核酸捕获和测序方法技术

本发明专利技术提供了捕获和测序靶核酸分子的方法。并提供了测定基因组DNA的甲基化状态的方法。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】
本专利技术涉及从核酸混合物中分离靶核酸分子和测定这些分子的序列。背景自全部人基因组序列完成后，基因组研究已转向“再测序(resequencing)”研究，其中在基因组中和基因组间鉴定变异，例如疾病相关突变。富含特定目的区域(例如外显子)的“分区”基因组的再测序需要涉及“捕获”和测序这些区域的若干步骤。例如，在某些基于微阵列的方法中，基因组DNA被剪切为特定大小范围的片段；末端修复所述片段，与独特的接头(adaptor)连接，并扩增；然后使用包含与参考目的基因组序列互补的探针的微阵列捕获扩增的片段；洗脱和扩增捕获的(杂交的)片段；测序扩增的片段，例如使用“下一代(next generation)”测序技术或再测序阵列。见,例如W02008/115185;Okou等人(2007)Nature Methods4:907-909; Hodges 等人(2007) Nature Genetics39:1522-1527。减少分离和测序目的核酸所需的步骤将提高效率和准确性，且可能降低成本。本专利技术满足了此要求并提供了额外的益处。一般在基因组中的CpG 二核苷酸处出现的胞嘧啶甲基化在基因调本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2010.08.27 US 61/402,3501.捕获和测序靶核酸分子的方法，其包括:(a)在杂交条件下将固相支持物暴露于包含靶核酸分子的核酸混合物，其中靶核酸分子与固定在固相支持物上的处于能够引发延伸的构型中的引物形成特异性杂交复合物；(b)从固相支持物上分离未结合的和非特异性结合的核酸；(C)在聚合条件下将固相支持物暴露于聚合酶和核苷酸；和(d)通过检测使用靶核酸分子作为模板，通过聚合酶从固定引物起始的核酸聚合，测定靶核酸分子的核酸序列。2.权利要求1的方法，其中所述靶核酸分子来自基因组DNA区域。3.权利要求2的方法，其中所述靶核酸包含外显子的全部或部分。4.权利要求1的方法，其中所述靶核酸分子是RNA，所述聚合酶是逆转录酶，且所述引物包含3’多聚T序列。5.权利要求1的方法，其中所述靶核酸分子是DNA，且所述聚合酶是DNA聚合酶.6.权利要求1的方法，其中所述核苷酸在其末端磷酸上被标记。6. 原文丢失7.权利要求6的方法，其中所述聚合酶用FRET供体标记，所述核苷酸用FRET受体标记。8.权利要求7的方法，其中所述FRET供体是荧光纳米颗粒。9.测定基因组DNA片段的甲基化状态的方法，所述方法包括:(a)在固相支持物上固定基因组DNA片段；(b)通过检测使用固定的基因组DNA片段作...

【专利技术属性】
技术研发人员：S·塞沙基里，
申请(专利权)人：弗·哈夫曼拉罗切有限公司，
类型：
国别省市：