棉花事件MON 88913及其组合物和检测方法技术

本发明专利技术提供棉花植物事件MON?88913的组合物和种子。也提供了基于DNA序列测定棉花植物事件MON?88913的存在的分析方法以及该DNA序列作为分子标记在DNA检测方法中的用途。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及到植物分子生物学领域。更具体地说，本专利技术涉及草甘膦耐受的棉花事件M0N88913，以及在植物样品及其组合物中分析检测棉花事件M0N88913DNA存在的方法。
技术介绍
棉花是世界上很多地区的重要的纤维作物。生物技术的方法已经应用到棉花上用于改善其农艺性状和产品的质量。向棉花植物中引入转基因的方法已经在美国专利5，004，863中得到证明。棉花生产中一个这样的重要的农艺性状是除草剂耐受性，具体地说，对草甘膦除草剂的耐受性。这个性状引入到了棉花植物中并且是现在用于棉花生产中的成功产品。目前商业化的RoundupReady 棉花事件(1445)在四叶龄期间表现出对Roundup 的活性组分的草甘膦的极好的耐受性(Nida等，J.Agric.FoodChem.44:1960-1966，1996 ；Nida etal.，J.Agric.Food Chem.44:1967-1974，1996)。然而，由于在某些环境条件下，超过 四叶龄时进行的叶面施用必须受到限制，这归因于在雄性生殖组织中耐受性不足。雄性生殖耐受性的缺失看来似乎是在关键组织中CP4 EPSPS的不充分表达的结果，这些组织对草甘膦高度敏感，并且草甘膦在这些严重衰败的组织(strong sink tissues)中大量积累(Pline 等，Weed Sc1.50:438-447, 2002)。存在着对比RoundupReady 棉花1445具有更高的草甘膦耐受的棉花植物的需要。为了确定有性繁殖的后代是否含有目的转基因，能检测特定事件的存在是有利的。此外，检测特定事件的方法将有利于遵守例如进入市场前许可所要求的规定、或来自重组体农作物的食品标记的规定。通过任何已知的诸如聚合酶链式反应(PCR)或使用核酸探针的DNA杂交法的核酸检测方法，可检测转基因的存在。这些检测方法通常集中于常用的遗传组件，如启动子、3'转录终止子、标记基因等。结果，这些方法不能用于区别不同事件之间的差别，具体是那些使用相同的DNA构建体的产物，除非已知基因组染色体DNA临近于所插入的DNA(侧翼基因组DNA)。用于草甘膦耐受的棉花事件1445的事件特异性DNA检测方法已经得以阐述(US20020120964，此处全部引用作为参考)。本专利技术涉及到草甘膦耐受的棉花事件M0N88913、其所含有的组合物、以及涉及用于在棉花事件M0N88913及其后代中检测转基因/基因组插入区域的方法。专利技术概述本专利技术涉及到被命名为M0N88913的转基因棉花事件，其具有保藏号为PTA-4854的存放于美国典型培养物保藏中心(ATCC)的种子。本专利技术的另一方面包括棉花事件M0N88913的后代植物或种子，或植物和种子的可再生部分。本专利技术也包括棉花事件M0N88913的植物部分，包括但不局限于花粉、胚珠、花、棉桃、棉绒、芽、根和叶。本专利技术涉及具有草甘膦耐受性表型和M0N88913的新的遗传组合物的棉花植物。本专利技术的一个方面提供了 DNA组合物和用于检测来自棉花事件M0N88913的转基因/基因组连接区域存在的方法。提供了分离的DNA分子，它包含至少一个选自SEQ ID NO:I和SEQ ID NO:2的转基因/基因组连接DNA分子及其互补序列，其中连接分子跨越了插入位点，所述插入位点包含插入到棉花基因组和基因组DNA的异源DNA，所述棉花基因组和基团组DNA来自棉花事件M0N88913中插入位点两侧的棉花细胞。含有这些分子的棉籽及其植物材料也是本专利技术的一个方面。提供了作为5'转基因/基因组区域SEQ ID NO:3或其互补物的分离的新DNA分子，其中这个DNA分子在棉花事件M0N88913中是新的。在其基因组中含有SEQ ID NO:3的棉花植物和种子是本专利技术的一个方面。根据本专利技术的另一方面，提供了作为3'转基因/基因组区域SEQ IDNO:4或其互补序列的分离的新DNA分子，其中这个DNA分子在棉花事件M0N88913中新的。在其基因组中含有SEQ ID NO:4的棉花植物和种子是本专利技术的一个方面。根据本专利技术的另一方面，提供了用于DNA扩增方法的两条DNA分子，其中第一个DNA分子包含SEQ ID NO:3的DNA分子的转基因区域上的任意部分的至少长11个或更多个连续的多核苷酸，以及SEQ IDNO:3的棉花基因组5'侧翼区域的任意部分的相似长度的DNA分子，其中一起应用时，这些DNA分子可用作生产扩增子的DNA扩增方法中的DNA引物组。在DNA扩增方法中使用DNA引物组所产生的扩增子，可用于诊断棉花事件M0N88913。通过同源于或互补于SEQ ID NO:3的任意部分的DNA引物，从M0N88913DNA生产的任何扩增子，是本专利技术的一方面。根据本专利技术的另一方面 ，提供两条用于DNA扩增方法的DNA分子，其中第一个DNA分子包含SEQ ID NO:4的DNA分子的转基因区域上的任意部分的至少长11个或更多个连续的多核苷酸，以及SEQ ID NO:4的棉花基因组3'侧翼区域的任意部分的相似长度的DNA分子，其中这些DNA分子可用作生产扩增子的DNA扩增方法中的DNA引物组。在DNA扩增方法中使用DNA引物组所产生的扩增子，可用于诊断棉花事件M0N88913。通过同源于或互补于SEQ ID NO:4的任意部分的DNA引物，从M0N88913DNA生产的任何扩增子，是本专利技术的一个方面。根据本专利技术的另一方面，提供在样品中检测特异性地对应于棉花事件M0N88913DNA的DNA存在的方法。所述方法包括:(a)将包含DNA的样品与引物组进行接触，当该引物组与来自棉花事件M0N88913的基因组DNA —起被用于核酸扩增反应时，产生用于诊断棉花事件M0N88913的扩增子；(b)进行核酸扩增反应，由此产生扩增子；和(c)检测扩增子。根据本专利技术的另一方面，提供在样品中检测特异性地对应于棉花事件M0N88913DNA的DNA存在的方法。所述方法包括:(a)将含有DNA的样品同含有SEQ ID NO:I或SEQ ID NO:2的DNA探针相接触，该探针在严谨的杂交条件下与来自棉花事件M0N88913的基因组DNA杂交，而在严谨的杂交条件下不与对照棉花植物DNA杂交；(b)将样品和探针置于严谨的杂交条件下；和(c)检测探针与棉花事件M0N88913DNA的杂交。根据本专利技术的另一方面，提供生产耐受草甘膦施用的棉花植物的方法，该方法包括:(a)将包含本专利技术的可赋予对草甘膦施用的耐受性的表达盒的第一亲本棉花事件M0N88913，与缺乏草甘膦耐受性的第二亲本进行有性杂交，由此产生的大量的后代植物；和(b)选择耐受草甘膦施用的后代。该方法可任择地包括使后代植物同第二亲本棉花植物的回交和选择草甘膦耐受性的后代以产生耐受草甘膦施用的纯育的棉花变种的步骤。根据本专利技术的另一方面，提供用于确定棉花事件M0N88913后代的接合性的方法，包括:(a)将包含棉花 DNA 的样品与包含 SEQ ID NO:21、SEQ ID NO:22、SEQ ID NO:23、SEQID N0:24、和SEQ ID NO:25的引物组进行接触，当所述引物组与来自棉花事件M0N88913的基因组DNA—起被用于核酸扩增反应时，产生用于诊断本文档来自技高网...

【技术保护点】
包含选自SEQ?ID?NO：1、SEQ?ID?NO：2、SEQ?ID?NO：3和SEQID?NO：4的序列的核酸分子，其中所述核酸分子还包含编码草甘膦耐受性EPSPS的序列。

【技术特征摘要】
2003.02.12 US 60/447,1841.包含选自SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:3 和 SEQID NO:4 的序列的核酸分子，其中所述核酸分子还包含编码草甘膦耐受性EPSPS的序列。2.权利要求1的核酸分子，其中所述序列为SEQID NO:1。3.权利要求1的核酸分子，其中所述序列为SEQID NO:2。4.权利要求1的核酸分子，其中所述序列为SEQID NO:3。5.权利要求1的核酸分子，其中所述序列为SEQID NO:4。6.定包含事件M0N88913的棉花植物的接合性的方法，包括: (a)将来自所述植物的包含DNA的样品与包含SEQID NO:21、SEQ ID NO:22和SEQ IDNO:23的引物组进行接触； (b)进行核酸扩增反应；和 (c)检测该反应的产物， 其中包含事件M0N88913的棉花种子样品以保藏号PTA-4854保藏于美国典型培养物保藏中心(ATCC)。7.权利要求6的方法，其中所述棉花植物是棉花事件M0N88913的后代，且其中所述方法包括: (a)将包含棉花DNA 的样品与包含 SEQ ...

【专利技术属性】
技术研发人员：R·E·切尔尼，C·杜翁，J·L·哈特，S·A·胡伯，R·L·克里布，J·J·利斯特洛，A·B·马滕斯，B·萨蒙斯，
申请(专利权)人：孟山都技术有限公司，
类型：发明
国别省市：