一种地衣芽孢杆菌-木寡糖合生元制备参数的优选方法、制备工艺及应用，将活化后的地衣芽孢杆菌CICC20446菌液以容量比1%接种于含2.5～4mg?mL-1木寡糖的液体培养基中，分别置40℃-120r?min-1培养箱中振荡培养，培养3.5～4.5h。该发明专利技术的地衣芽孢杆菌-木寡糖合生元可以显著提高动物的日增重，降低料重比和腹泻率，对动物的生长性能有显著改善作用。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于一种动物饲用微生态调节剂，具体地说是一种地衣芽孢杆菌-木寡糖合生元制备参数的优选方法、制备工艺及应用。
技术介绍
肠道是机体最大的消化器官，也是最大的免疫器官。稳定的肠道微生态群系可以促进肠道功能的完善，能提闻动物的生广性能和免疫性能。机体在遭受外在或内在各种因素(如疾病、断奶等)刺激作用下，肠道微生物菌群结构发生变化，有害菌群(如大肠杆菌)增多，有益菌群(如乳酸杆菌、芽孢杆菌)数量会减少，就会导致肠道的功能紊乱，出现腹泻、胃口差、对食物过敏、抵抗力下降、反复生病等问题。一直以来，肠道功能紊乱的防治以抗生素为主，但随着研究的深入，人们发现，抗生素在肠道中对微生物的作用是通杀:不仅对有害微生物有杀灭作用，同时对有益微生物也有杀灭作用。此外，未被杀死的部分微生物通过基因突变等自然进化方式对抗治疗，其结果造成某个菌种作为一个整体对某些抗生素不再敏感，最终形成耐药性。因此在天然资源中寻找无毒、无残留、无抗药性的抗生素有效替代制剂成为畜牧兽医业研究的热点。益生菌是对改善宿主肠道菌群生态平衡而发挥有益作用，达到提高宿主健康水平和健康佳态的活菌制剂及其代谢产物。具有维持肠道的正常功能，有促进营养吸收、调节机体免疫、改善机体代谢、净化肠道环境等多方面的作用。地衣芽孢杆菌bacillusIicheniformis是动物体内常见的益生菌，它有良好的益生功能。地衣芽孢杆菌在低pH和胆汁中存活并能植入肠粘膜，并具有安全性好，易于储存的特点，被认为是最理想的微生物添加剂。近年来，随着我国动物饲养水平的提高，益生菌的应用效果有所下降。人们发现益生菌的活菌制剂具有稳定性差、产品种类单一、应用范围有限、效果不稳定等缺点，在产品应用方面存在较大困难。益生元一种膳食补充剂，它可以通过选择性的刺激一种或少数种菌落中的细菌的生长与活性而对宿主产生有益的影响从而改善宿主健康的不可被消化的食品成分。成功的益生元应是在通过上消化道时，大部分不被消化而能被肠道菌群所发酵的。最重要的是它只是刺激有益菌群的生长，而不是有潜在致病性或腐败活性的有害细菌。益生元给益生菌提供“食物”，能够被肠道内有益细菌分解吸收，促进有益细菌生长繁殖。益生元主要包括各种寡糖类物质。木寡糖又称低聚木糖，誉为“超强双歧因子”，被认为具有调节消化道微生物区系的作用，是促进有益菌的生长和抑制有害菌生长的益生素。研究人员根据益生元和益生菌的特点，把两者结合起来，成为合生元。合生元就是将益生菌与益生元合并使用。合生元具有益生菌与益生元双重作用效果:既可发挥益生菌的生理性细菌活性，又可选择性增加这种菌的数量使益生作用更持久，合生元对调整肠道微生态平衡要优于益生菌与益生元单独使用。它是一种很好的抗生素的替代品，也是非常好的微生态制剂。目前市面上对地衣芽孢杆菌-木寡糖合生元产品没有报道，因此对于地衣芽孢杆菌-木寡糖合生元制备参数和工艺研究对合生元生产和应用具有重要意义。
技术实现思路
本专利技术的目的是提供一种地衣芽孢杆菌-木寡糖合生元制备参数的优选方法、制备工艺及应用，通过体外培养试验，科学选取地衣芽孢杆菌-木寡糖合生元制备参数，实现制备工艺优化，确保合生元产品的使用效果。本专利技术的原理:根据地衣芽孢杆菌的生长曲线，确定地衣芽孢杆菌的培养最佳温度、转速。利用菌液OD值，确定适宜的木寡糖添加量。再根据地衣芽孢杆菌生长代时G，确定合生元的最佳培养时间，最终确定地衣芽孢杆菌-木寡糖合生元的最佳制备工艺。本专利技术提供的地衣芽孢杆菌-木寡糖合生元制备参数的优选方法如下:1、地衣芽孢杆菌生长曲线绘制和培养温度、转速的确定:将活化后的地衣芽孢杆菌CICC20446菌液以容量比1%的接种量接种于已确定PH值(PH=7.0)的LB液体培养基中，分别于 34°C -120r min_1>37°C -120r min_1>40°C -120r mirf1 和 34°C -150r.mirT1、37 °C -150r min_1>40 °C -150r mirf1 及 34 °C -180r min_1>37 °C -180r mirf1、40°C -180r min—1的条件下振荡培养，每隔0.5h取样I次，连续培养12h，于600nm波长下测定其吸光度，以时间为横坐标、吸光度为纵坐标绘制曲线，根据生长曲线确定培养最佳温度、转速；2、木寡糖最适添加量的确定:在LB液体培养基里加入不同比例的木寡糖，使木寡糖的浓度分别为:0.5mg mL \1.5mg mL、2.5mg mL \3mg mL \3.5mg mL \4mg mL \4.5mg mL-1 >5mg mL-1 >6mg mL_1>7mg mL—1,将每个浓度的培养基等量的装入锥形瓶中。将活化后的地衣芽孢杆菌菌液以容量比1%的接种量分别加入上述含不同浓度的木寡糖液体培养基中，置40°C -120r/min培养箱中振荡培养，分别在2.5 7.5h时采样，根据600nm波长下测定吸光度，以确定木寡糖适宜添加量；3、地衣芽孢杆菌-木寡糖合生元最适培养时间的确定:将木寡糖的最适添加量确定好后，根据测量的最适添加浓度组的OD值，利用公式计算代时G，从而根据地衣芽孢杆菌在每个时间段的代时以确定合生元的最适培养时间；G=(t2-tl)/3.322(lgx2-lgxl)式中:tl、t2分别代表培养时间，xl,x2分别代表不同时间合生元的OD值；4、地衣芽孢杆菌-木寡糖 菌液活菌数检测:利用平板菌落计数法对地衣芽孢杆菌-木寡糖菌液活菌数进行检测。本专利技术提供的地衣芽孢杆菌-木寡糖合生元制备工艺如下:1、根据地衣芽孢杆菌的生长曲线，确定地衣芽孢杆菌的培养最佳温度和转速为40 0C -120r/min。2、以LB液体培养基，加入木寡糖，使木寡糖的最佳含量为3.5 mg mL—1 ；3、将活化后的地衣芽孢杆菌菌液以容量比1%的接种量接种于含量为3.5mg mL—1的木寡糖液体培养基中，置40°C-120r/min培养箱中振荡培养，最适培养时间为4h，取出后即得深黄色的地衣芽孢杆菌-木寡糖合生元产品。本专利技术的积极效果:1、科学选取地衣芽孢杆菌-木寡糖合生元制备参数，实现制备工艺优化，确保合生元产品的使用效果。2、用量小，木寡糖最佳添加浓度为3.5mg mL'地衣芽孢杆菌菌量为LgxiO8HiL'本专利技术制备的微生态制剂的原料用量不会对动物本身产生毒副作用，同时也不会增加生产成本；3、本专利技术的地衣芽孢杆菌-木寡糖合生元菌液中活菌数为IO8CFU mL—1以上，活菌数较高。附图说明图1是地衣芽孢杆菌(CICC20446) 120R不同温度下生长曲线。图2是地衣芽孢杆菌(CICC20446) 150R不同温度下生长曲线。图3是地衣芽孢杆菌(CICC20446) 180R不同温度下生长曲线。图4是不同时间段合生元菌液中地衣芽孢杆菌的代时。具体实施例方式(I)地衣芽孢杆菌生长曲线绘制及培养条件的确定在无菌实验室中，按1%容量比例的接菌量将活化后的地衣芽孢杆菌液接种于装有50mL已确定PH值(PH=7.0)的LB液体培养基的IOOmL锥形瓶中(LB培养基的本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种地衣芽孢杆菌合?木寡糖合生元制备参数的优选方法，其特征是：a、生长曲线及培养温度的确定：将活化后的地衣芽孢杆菌CICC20446菌液以容量比1%的接种量接种于已确定PH值为7.0的LB液体培养基中，于不同温度和不同转数下培养，隔0.5?h取样1次，连续培养12h，于600?nm下测定其吸光度，以时间为横坐标、吸光度为纵坐标绘制生长曲线，确定最适生长温度、转速；b、木寡糖最适添加量的确定：将经0.22μm微孔滤器除菌后的木寡糖加入灭菌的LB液体培养基，使木寡糖的浓度分别为：0.5?mg?mL?1、1.5?mg?mL?1、2.5?mg?mL?1、3?mg?mL?1、3.5?mg?mL?1、4?mg?mL?1、4.5?mg?mL?1、5?mg?mL?1、6?mg?mL?1、7?mg?mL?1，将每个浓度的培养基装入容器瓶中，每个容器瓶中的液体相等；将活化后的地衣芽孢杆菌菌液以容量比1%的接种量分别加入上述含不同浓度的木寡糖液体培养基中，置40℃?120?r?min?1培养箱中振荡培养，在2.5~7.5?h内每隔0.5?h采样1次，根据600?nm波长下测定吸光度，以确定木寡糖适宜添加量；c、地衣芽孢杆菌合?木寡糖合生元最适培养时间的确定：将木寡糖的最适添加量确定好后，根据测量的最适添加浓度组的OD值，利用公式计算代时G，从而根据地衣芽孢杆菌在每个时间段的代时以确定他们的最适培养时间；G?=(t2?t1)/3.322(lgx2?lgx1)?式中：t1、t2分别代表培养时间，x1、x2分别代表不同时间合生元的OD值；d、地衣芽孢杆菌合?木寡糖合生元菌液活菌数检测：利用平板菌落计数法对地衣芽孢杆菌合?木寡糖菌液活菌数进行检测。...
【技术特征摘要】
1.种地衣芽孢杆菌合-木寡糖合生元制备参数的优选方法，其特征是: a、生长曲线及培养温度的确定:将活化后的地衣芽孢杆菌CICC20446菌液以容量比1%的接种量接种于已确定PH值为7.0的LB液体培养基中，于不同温度和不同转数下培养，隔0.5 h取样I次，连续培养12h，于600 nm下测定其吸光度，以时间为横坐标、吸光度为纵坐标绘制生长曲线，确定最适生长温度、转速； b、木寡糖最适添加量的确定:将经0.22 iim微孔滤器除菌后的木寡糖加入灭菌的LB液体培养基，使木寡糖的浓度分别为:0.5 mg*mL_1>1.5 mg*mL'2.5 mg*mL_1>3 mg*mL'3.5mg*mL \ 4 mg*mL \4.5 mg*mL \5 mg*mL \ 6 mg*mL \7 mg*mL S 将每个浓度的培养基装入容器瓶中，每个容器瓶中的液体相等； 将活化后的地衣芽孢杆菌菌液以容量比1%的接种量分别加入上述含不同浓度的木寡糖液体培养基中，置40°C -120 r-min^1培养箱中振荡培养，在2.5^7.5 h内每隔0.5 h采样I次，根据600 nm波长下测定吸光度，以确定木寡糖适宜添加量； C、地衣芽孢杆菌合-木寡糖合生元最适培养时间的确定:将木寡糖的最适添加量确定好后，根据测量的最适添加...
【专利技术属性】
技术研发人员：刘显军，李建涛，陈静，王佳，
申请(专利权)人：刘显军，
类型：发明
国别省市：
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