本发明专利技术公开了一种用于修复周围神经缺损的组织工程神经移植物及制备方法，组织工程神经移植物由神经导管和细胞基质构建而成。制备方法包括含支持细胞的组织工程神经移植物的构建及细胞基质修饰的组织工程神经移植物的构建。本发明专利技术优点明显，神经导管及支架上的细胞基质是由培养的细胞形成后脱细胞获得，是完全天然的细胞基质，更利于细胞的黏附，并对轴突再生的方向性具有一定的导向作用，因而更利于加快神经再生的进程。同时去细胞后可降低或免除同种异体细胞移植的免疫原性，建立一个有利于再生轴突生长的环境，以达到神经快速生长、功能恢复的理想目标，为临床治疗提供可行方案。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于可植入人体中的医用生物材料
，涉及一种。
技术介绍
随着社会现代化进程和人们生活节奏的加快，不可避免的会出现更多的交通事故、工伤事故、运动意外等事件，同时频繁的局部战争和暴力事件及地震等自然灾害，均会造成周围神经损伤，临床上当中长距离的神经缺损不能依靠端对端的缝合来弥补神经缺失时，就不得不依靠移植物来桥接修复。寻找和研制较为合适的移植物问题虽然已有一百多年的历史了，但除了自体神经成为首选的神经缺损桥接移植物外，至今在人类仍在寻找理想的，能够在临床上广泛应用的神经移植替代物。就自体神经移植中，因为供移植用的神经来源有限、组织结构和尺寸难以匹配、移植供区长期失神经支配等原因，未能在临床上广泛使用。随着组织工程学的出现和发展，为构建自体神经移植替代品提供了一条新的出路。目前已有的人工神经移植物主要有两大类，一类是脱细胞处理的同种异体神经即脱细胞神经基质(acellular nerve graft,ANG),利用原来神经的管道,将异体细胞去掉。脱细胞神经基质具有作为周围神经组织工程支架的基本要求，可以成为细胞外基质替代物应用于组织工程研究。如文献《脱细胞神经基质诱导大鼠骨髓间充质细胞向Schwann细胞分化的形态学研究》(何红云，邓仪昊，佟晓杰等，神经解剖学杂志，2007年第23卷第6期)探讨脱细胞神经基质移植物(ANA)体外诱导成年大鼠骨髓问充质细胞(BMSCs)向Schwann细胞分化的可行性，研究结果提示ANA可诱导成年大鼠骨髓问充质细胞分化为Schwann细胞。如文献《脱细胞异体神经基质移植物对脊髓前角运动神经元的保护作用》(刘金超，林晓萍，佟晓杰等，解剖科学进展，2005 (3) : 206-209)探讨脱细胞神经基质移植物异体移植对脊髓前角运动神经元的保护作用。研究结果提示脱细胞异体神经基质移植物桥接周围神经缺损对运动神经元胞体的存活具有良好的保护作用。虽然目前对脱细胞神经基质制备技术的研究甚多，进展较快，但是其制备处理方法程序复杂，而且在处理过程会损伤支架材料的微细结构和受力特性。另外一类是利用适当的模具制备神经导管，将细胞基质或者细胞包覆在神经导管的内外表面，如文献《大鼠坐骨神经缺损后组织工程人工神经对外周靶器官及脊髓神经元的保护作用》(游华，矫树生，冯帅南等，中华创伤杂志，2010 Vol. 26 No. 3 P. 265-269) 公开了一种使用嗅球成鞘细胞(olfactory ensheathing cell, 0EC)-雪旺细胞(Schwann cell, SC)-细胞外基质成分(extracellular matrix, ECM)-聚乳酸-聚轻基乙酸共聚物 [poly (DLlactide-co-glycolid e acid), PLGA]桥接体保护大鼠坐骨神经缺损后外周革巴器官及脊髓神经元。又如申请号为CN03134541. 7，申请公布号为CN1589913的中国专利“用于修复周围神经缺损的组织工程化周围神经及制备方法”公开了一种用于修复周围神经缺损的组织工程化周围神经，使用神经胶质细胞或向神经胶质细胞分化的干细胞作为种子细胞，采用生物可降解材料构成的神经导管，同时应用复合有神经营养因子的控制释放微球， 并含有细胞外基质。目前组织工程化周围神经中所用的支持细胞有施万细胞及各种干细胞等。这些细胞多数是同种异体来源，移植过程中可能会导致免疫原性不利于临床推广。另一方面，细胞移植入体内后具体的归属及生物学效应如何并不完全清楚，可能会由于体内的环境而失活，达不到所期望的生物学效应。这些都制约了组织工程神经移植物的发展。
技术实现思路
本专利技术针对现有技术不足提供了一种利于细胞的黏附，能够促进神经轴突的再生的。本专利技术结合组织工程方法，利用旋转细胞培养反应器将支持细胞培养于神经导管及支架上，然后利用体外脱细胞技术将支持细胞脱去，形成只含支持细胞分泌的细胞基质的组织工程神经移植物，以修复周围神经缺损。本专利技术可以克服自体神经移植缺点，同时可以避免同种异体细胞移植的免疫原性，提供利于神经细胞黏附的细胞外基质，建立一个有利于再生轴突生长的环境，以达到神经快速生长、功能恢复的理想目标，为临床治疗提供可行方案。本专利技术具体技术方案如下一种用于修复周围神经缺损的组织工程神经移植物，由神经导管和细胞基质构建而成，所述细胞基质是自体的或同种异体来源细胞分泌形成后脱细胞而获得。所述细胞是施万细胞、皮肤来源的成纤维细胞、皮肤干细胞、骨髓间充质干细胞或诱导多潜能干细胞中的一种或几种。所述神经导管由生物可降解材料构成，优选丝素蛋白、壳聚糖、胶原、聚乳酸或聚羟基乙酸中的一种或几种。上述神经导管可以为本领域技术人员常用的组织工程神经移植物，优选表面多孔的壳聚糖导管，如50-90%、孔径50-300Mm的具有多孔结构、抗拉强度高的神经导管，管状本体内径为O. 5-8mm，壁厚O. 1-3_。具体可参照专利申请号为CN201110324474. 8，名为“组织工程神经移植物及其用途”中所述的方法制得。或者优选纳米纤维蚕丝丝素蛋白导管， 具体可参照专利申请号为CN200910034583. 9，公开号为CN101664346，名为“静电纺丝制备的人工神经移植物及其制备方法和专用装置”中所述的方法制得。或者优选使用表面多孔的壳聚糖导管外壳或纳米纤维蚕丝丝素蛋白导管外壳，导管内部充填入丝素蛋白纤维的复合型神经导管，丝素蛋白纤维的制备可参照专利申请号为CN200910034583. 9，公开号为 CN101664346，名为“静电纺丝制备的人工神经移植物及其制备方法和专用装置”中所述的方法制得，优选每个导管中含有120根丝素蛋白单丝。本专利技术还提供了上述用于修复周围神经缺损的经天然细胞基质修饰的组织工程神经移植物的制备方法，在于制备含支持细胞的组织工程神经移植物之后进行脱细胞处理得到去细胞的组织工程神经移植物。上述含支持细胞的组织工程神经移植物可以采用本领域技术人员熟知的神经移植物和细胞通过细胞培养的方式使细胞贴附于移植物内外表面生长，优选采用三维微重力细胞培养的方法。本专利技术使用型号为RCMW的Synthecon微重力灌入式三维培养系统。本专利技术含支持细 胞的组织工程神经移植物的制备及去细胞组织工程神经移植物的构建优选的技术方案如下(I)含支持细胞的组织工程神经移植物的构建将IOOml完全培养基缓慢注入培养容器，再加入2. 5 X IO7个细胞及无菌处理过的神经导管，再以蠕动泵缓慢注满整个容器，细胞最终密度为lX105/ml，排尽系统内空气后，开始旋转微重力循环灌注培养；旋转式生物反应器放入37°C CO2培养箱中，前24小时转速为10转/分钟，使细胞与神经导管充分接触，贴附；24小时后调整旋转式生物反应器旋转速度，使神经导管能悬浮到培养液中；继续培养2 天后更换为分化培养基培养，以促进细胞外基质分泌；培养2周后终止培养将表明贴附生长有细胞的神经导管取出，其中分化培养基优选配方为H-DMEM+15%FBS+50ng/ml HRG+2PM forsklin+50M-g/ml Vc0(2)含细胞自身分泌的细胞基质修饰的组织工程神经移植物的构建将培养有细胞的组织工程神经移植物进行脱细胞处理，PBS清洗后去离子无菌水3本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种用于修复周围神经缺损的组织工程神经移植物，由神经导管和细胞基质构建而成，其特征在于所述细胞基质是自体的或同种异体来源细胞分泌形成后脱细胞而获得。
【技术特征摘要】
1.一种用于修复周围神经缺损的组织工程神经移植物，由神经导管和细胞基质构建而成，其特征在于所述细胞基质是自体的或同种异体来源细胞分泌形成后脱细胞而获得。2.如权利要求1所述的组织工程神经移植物，其特征在于所述细胞是施万细胞、皮肤来源的成纤维细胞、皮肤干细胞、骨髓间充质干细胞或诱导多潜能干细胞中的一种或几种。3.如权利要求1所述的组织工程神经移植物，其特征在于所述神经导管由生物可降解材料构成，所述的生物可降解材料为丝素蛋白、壳聚糖、胶原、聚乳酸或聚羟基乙酸中的一种或几种。4.如权利要求1-3之一所述的组织工程神经移植物的制备方法，其特征在于制备含支持细胞的组织工程神经移植物之后进行脱细胞处理得到含细胞自身分泌的细胞基质修饰的组织工程神经移植物。5.如权利要求4所述的组织工程神经移植物的制备方法，其特征在与于所述含支持细胞的组织工程神经移植物采用三维微重力旋转培养得到。6.如权利要求5所述的组织工程神经移植物的制备方法，其特征在于含支持细胞的组织工程神经移植物的制备及去细胞组织工程神经移植物的构建具体为(1)含支持细胞的组织工程神经移植物的构建将完全培养基缓慢注入培养容器，再加入2. 5 X IO7个细胞及无菌处理过的神经导管，再将完全培养基注满整个容...
【专利技术属性】
技术研发人员：顾晓松，丁斐，顾芸，薛成斌，杨宇民，王勇军，龚蕾蕾，
申请(专利权)人：南通大学，
类型：发明
国别省市：
还没有人留言评论。发表了对其他浏览者有用的留言会获得科技券。