岩藻黄质的制备方法技术

岩藻黄质的制备方法，涉及岩藻黄质。将清洗后的褐藻原料晾干，用有机溶剂浸渍，提取；获得的提取液浓缩，得岩藻黄质粗提物；将岩藻黄质粗提物采用柱层析分离，收集岩藻黄质馏分，浓缩，得岩藻黄质原料；将获得的岩藻黄质原料用有机溶剂溶解，转入半制备/制备型高效液相色谱的进样瓶中，启动半制备/制备型高效液相色谱分离纯化，通过紫外在线检测或质谱信号触发馏分收集器自动收集岩藻黄质纯化液；将收集的岩藻黄质纯化液减压浓缩，冷冻干燥，得高纯岩藻黄质。经测试，所制得的岩藻黄质的纯度大于99%。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及岩藻黄质，尤其是涉及一种纯度大于99%的高纯。
技术介绍
岩藻黄质(fucoxanthin)亦称褐藻黄素，是自可食用褐藻中，如裙带菜(翅藻科，Undaria pinnatifida)、海带(Laminaria japonica Aresch)中提取出来的天然类胡萝卜素，在其刚性全反式长链的两端分别有一个化学性质活泼的5，6-环氧非饱和丙二烯键结构，因而又异于其他类胡萝卜素分子，具有很强的生物活性。近年来，它的多种生物学活性已被证实，一些潜在的活性也正在被科学家们积极探求之中，目前己成为当今海洋药物研究与开发的主攻热点之一。岩藻黄质具有抗肿瘤、抗炎、抗氧化、减肥等多种生物活性。首先，在抗肿瘤方面，1990年Okuzumi等首次报道，岩藻黄质10 u g/mL孵育3天后可降低62%的成人神经母细胞瘤细胞株(GOTO)的增殖。Okuztllni等研究证实，岩藻黄质可抑制由强皮肤促癌物十四烷酞佛波醋酸酷(TPA)诱导的小鼠表皮鸟氨酸脱梭酶活性增强，据此推测其可能对皮肤癌有抑制作用。1993年okuzumi等报道,岩藻黄质对N-乙基-N’-硝基-亚硝基胍诱导的十二指肠癌形成具有抑制作用。Masashi等报道了岩藻黄质对急性髓性白血病HL-60细胞株的作用，结果显示岩藻黄质对HL-60细胞可发挥显著的增殖抑制作用。Elichi等研究发现，岩藻黄质可明显降低前列腺癌细胞存活率，并诱导细胞凋亡。Swadesh K等人研究发现岩藻黄质对人肝癌HePG2细胞的生长具有抑制作用，因此，岩藻黄质对多种肿瘤细胞具有不同程度的抑制作用。其次，研究发现岩藻黄质还具体外抗氧化活性，其抗氧化活性甚至强于维生素C和E。此外，Kenjis等发现质抑制内毒素诱导的大鼠眼葡萄膜炎(Elu)，且其抗炎作用与尼松龙相当。特别是近年来研究发现，岩藻黄质能够显著的燃烧脂肪细胞，消除脂肪堆积的作用，从而起到显著的减肥效果，更使岩藻黄质在减肥药市场中占据重要的地位，因此，岩藻黄质是一个用途广泛的海洋活性物质。目前，已有一些关于岩藻黄质提取方法的研究报道如中国专利CN1706836A公开了一种从海藻中分离岩藻黄质的方法，该方法食用反复硅胶柱层析分离，且使用二甲基亚矾，不能通过低温减压蒸馏方法除去，使得样品难于在低温条件下干燥，难于获得高纯岩藻黄质。中国专利CN100999508A公开了一种从褐藻中提取岩藻黄质的方法,仅使用大孔吸附柱层析分离，获得的样品含量为I 20%，纯度较低。中国专利CN102336725公开了一种从海藻中提取含有岩藻黄质的浓缩物的方法，该方法使用了酶处理，提取浓缩物未进行分离，纯度较低。中国专利CN102007216公开了以及用于岩藻黄质的微藻，该方法从培养的微藻中提取制备岩藻黄质，该方法主要涉及产岩藻黄质微藻的培养，只获得提取物质，并未进行分离纯化。综上所述，以上的制备方法均未能获得高纯度的岩藻黄质，不能对岩藻黄质以及岩藻黄质系列产品进行高值化开发应用，因此，有必要专利技术一种从褐藻中或其他藻类中提取分离获得高纯岩藻黄质，以进行岩藻黄质高值化开发应用。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供一种，该方法从海藻中提取分离制得。本专利技术包括以下步骤I)将清洗后的褐藻原料晾干，用有机溶剂浸溃，提取；2)将步骤I)获得的提取液浓缩，得岩藻黄质粗提物；3 )将步骤2 )获得的岩藻黄质粗提物采用柱层析分离，收集岩藻黄质馏分，浓缩，得 岩藻黄质原料；4)将步骤3)获得的岩藻黄质原料用有机溶剂溶解，转入半制备/制备型高效液相色谱的进样瓶中，启动半制备/制备型高效液相色谱分离纯化，通过紫外在线检测或质谱信号触发馏分收集器自动收集岩藻黄质纯化液；5)将步骤4)收集的岩藻黄质纯化液减压浓缩，冷冻干燥，得高纯岩藻黄质。在步骤I)中，所述褐藻可选自海带、裙带菜、鼠尾藻等中的一种，所述褐藻可采用新鲜的褐藻以及褐藻加工过程中的下脚料；所述有机溶剂可选自甲醇、乙醇、丙酮、乙酸乙酯等中的一种；所述提取可采用有机溶剂进行浸溃或超声提取，提取时间可为0.1 48h ;在步骤2)中，所述浓缩可采用减压浓缩或膜浓缩。在步骤3)中，所分离可采用硅胶柱层析进行初步分离，硅胶可为100 400目，洗脱剂可为二氯甲烷-甲醇(50 5 1)，石油醚-丙酮(20 3 1)，石油醚-乙酸乙酯(20 3 1)，收集岩藻黄质馏分，大孔吸附柱层析，洗脱剂可为乙醇-水(I 99 99 1)，收集乙醇一水(70 30 99 I)洗脱部分。在步骤4)中，所述有机溶剂可选自甲醇、乙醇、丙酮、乙酸乙酯等中的一种；所述半制备/制备型高效液相色谱的柱填料可为CS柱或C18柱，半制备/制备柱的直径可为5 50mm ;所述紫外线在线检测可采用紫外检测器或二极管阵列检测器，检测波长为400 500nm，所述质谱信号触发馏分以质谱为检测器，离子源采用ESI+或APCI+;制备的进样量为50 5000 u L/次；流动相甲醇的体积百分比浓度为70% 95%，乙醇的体积百分比为60% 95%，乙腈的体积百分比为75% 95% ;流动相流速为2 100mL/min ；在步骤5)中，所述减压浓缩的温度可为20 50°C。与已有的方法相比，本专利技术的突出优点和技术效果如下经测试，本专利技术所制得的岩藻黄质的纯度大于99%。附图说明图1为高效液相紫外检测色谱图。图2为高效液相质朴检测色谱图。图3为岩藻黄质纯度检测色谱图。图4为岩藻黄质核磁共振氢谱图。图5为岩藻黄质核磁共振碳谱谱。图6为岩藻黄质紫外光谱图。图7为岩藻黄质红外光谱图。在图7中，横坐标为波数Wavenumber (cnT1),纵坐标为透光率 Transmittance (%)。图8为岩藻黄质质谱图。图9为岩藻黄质高分辨质谱图。具体实施例方式以下实施例将结合附图对本专利技术作进一步的说明。实施例1(I)原料的提取取海带1kg，洗净，置阴凉处晾干，加甲醇5L，超声提取30min，过滤，同法提取2次，合并提取液，减压浓缩，获得岩藻黄质浸膏；(2)初步分离纯化采用大孔吸附树脂进行柱层析，分别用水溶液、30%乙醇水溶 液、60%乙醇水溶液、90%乙醇水溶液进行洗脱，收集90%乙醇水溶液洗脱部分，浓缩干燥，获得岩藻黄质粗品260mg,含量25% ；(3)岩藻黄质精制a)原料的配制将岩藻黄质粗品配制成5mg/ml的溶液；b)仪器半制备型高效液相色谱；c)色谱条件半制备色谱柱为C8柱(250mmX 10mm)，流动相系统为70%甲醇水溶液，流动相流速为10mL/min，检测波长为450nm ；d)进样体积300 ii L ;通过运行制备型高效液相色谱获得岩藻黄质制备液350mL，在30°C下减压浓缩，将浓缩液进行冷冻干燥，即得岩藻黄质53mg，纯度98. 99%。实施例2I)原料的提取取海带1kg，洗净，置阴凉处晾干，加乙醇5L，超声提取60min，过滤，同法提取2次，合并提取液，减压浓缩，获得岩藻黄质浸膏；2)初步分离纯化采用大孔吸附树脂进行柱层析，分别用水溶液、30%乙醇水溶液、60%乙醇水溶液、80%乙醇水溶液进行洗脱，100%乙醇水溶液，收集100%乙醇水溶液洗脱部分，浓缩干燥，获得岩藻黄质粗品150mg,含量53% ；3)岩藻黄质精制a)原料的配制将岩藻黄本文档来自技高网...

【技术保护点】
岩藻黄质的制备方法，其特征在于包括以下步骤：1）将清洗后的褐藻原料晾干，用有机溶剂浸渍，提取；2）将步骤1）获得的提取液浓缩，得岩藻黄质粗提物；3）将步骤2）获得的岩藻黄质粗提物采用柱层析分离，收集岩藻黄质馏分，浓缩，得岩藻黄质原料；4）将步骤3）获得的岩藻黄质原料用有机溶剂溶解，转入半制备/制备型高效液相色谱的进样瓶中，启动半制备/制备型高效液相色谱分离纯化，通过紫外在线检测或质谱信号触发馏分收集器自动收集岩藻黄质纯化液；5）将步骤4）收集的岩藻黄质纯化液减压浓缩，冷冻干燥，得高纯岩藻黄质。

【技术特征摘要】
1.岩藻黄质的制备方法，其特征在于包括以下步骤1)将清洗后的褐藻原料晾干，用有机溶剂浸溃，提取；2)将步骤I)获得的提取液浓缩，得岩藻黄质粗提物；3 )将步骤2 )获得的岩藻黄质粗提物采用柱层析分离，收集岩藻黄质馏分，浓缩，得岩藻黄质原料；4)将步骤3)获得的岩藻黄质原料用有机溶剂溶解，转入半制备/制备型高效液相色谱的进样瓶中，启动半制备/制备型高效液相色谱分离纯化，通过紫外在线检测或质谱信号触发馏分收集器自动收集岩藻黄质纯化液；5)将步骤4)收集的岩藻黄质纯化液减压浓缩，冷冻干燥，得高纯岩藻黄质。2.如权利要求1所述岩藻黄质的制备方法，其特征在于在步骤I)中，所述褐藻选自海带、裙带菜、鼠尾藻中的一种。3.如权利要求1或2所述岩藻黄质的制备方法，其特征在于所述褐藻采用新鲜的褐藻以及褐藻加工过程中的下脚料。4.如权利要求1所述岩藻黄质的制备方法，其特征在于在步骤I)中，所述提取采用有机溶剂进行浸溃或超声提取，提取时间为O.1 48h。5.如权利要求1所述岩藻黄质的制备方法，其特征在于在步骤I)和步骤4)中，所述有机溶剂选自甲醇、乙醇、丙酮、乙酸乙酯中的一种。6.如权利要求1所述岩藻黄质的制备方法，其特征在于在步骤2)中，所述浓缩采用...

【专利技术属性】
技术研发人员：张怡评，易瑞灶，洪专，谢全灵，方华，孙继鹏，
申请(专利权)人：国家海洋局第三海洋研究所，
类型：发明
国别省市：