本发明专利技术公开了一株双眉藻(Amphora sp.)及其在产生物柴油、EPA、岩藻黄素中的应用。本发明专利技术的双眉藻的保藏编号为CGMCC No.11816。本发明专利技术的双眉藻是一株综合性状优良藻株。该藻株生长快，易采收，生物质生产成本低于多数微藻。在制备生物柴油的同时，利用生物精炼技术可以获得EPA、类胡萝卜素和岩藻黄素等高附加值产品，其胞外多糖和二氧化硅硅壳也具有商业价值。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及一株富油微藻及其在产生物柴油、EPA、岩藻黄素中的应用，特别涉及一株双眉藻及其在产生物柴油、EPA、岩藻黄素中的应用。
技术介绍
化石燃油短缺及其燃烧时带来的环境污染问题，使可再生的代用燃料——生物柴油备受关注。微藻可以在滩涂、盐碱地、粘土地等荒芜土地上及浅海和湖泊中大规模培养，不与粮争地，不与人争粮，并可节约淡水资源，还可与工厂废弃的二氧化碳处理和减排相结合。因此，微藻被认为是极具开发潜力的生物柴油原料。近几年，研究者们获得了许多具有生物柴油开发潜力的富油微藻。然而，由于微藻培养、采收和加工的高成本，导致微藻生物柴油的生产成本仍不能与化石燃油相比，限制了微藻生物柴油的商业化生产。目前，研究者们普遍认为，将微藻生产生物柴油藻与微藻生物精炼(Biorefining)技术相结合将是解决微藻生物柴油高成本的有效途径。微藻富含多不饱和脂肪酸、优质蛋白、多糖、色素及多种特殊的次级代谢物质，在生产生物柴油的同时，进行多不饱和脂肪酸、蛋白或色素等高附加值产品的生产，将有效降低微藻生物燃油的成本。
技术实现思路
本专利技术提供了一株双眉藻(Amphora sp.)及其产生物柴油、EPA和岩藻黄素富油微藻中的应用。本专利技术的双眉藻(Amphora sp.)是本实验室经过多年筛选，获得一株综合性状优良硅藻株系，命名为BQWSM，已于2016年1月8日保藏于中国普通微生物菌种保藏管理中心(地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号中国科学院微生物研究所)，保藏编号为CGMCC No.11816。双眉藻藻株BQWSM的形态为壳面椭圆形，长10～12.5微米，宽6～7.5微米。两端头形，宽2.8～3.5微 米，背缘凸出、腹缘内凹，壳缝直，左右对称。本专利技术经过培养检测发现，双眉藻(Amphora sp.)BQWSM CGMCC No.11816环境适应性强，易培养，易采收，具体如下所述：(1)温度适应性强：属耐高温藻种，生长最适温度：30-38℃，可耐4℃低温和45℃高温。在海南可常年室外培养，无需温控设备。(2)盐度适应性强：属广盐性藻种，目前实验表明，在淡水至盐度为80‰的海水中均可生长，最适盐度为30‰--60‰，最高盐度尚未实验。(3)可进行附着培养和悬浮培养。(4)容易采收：该藻种在不同培养条件下呈较大颗粒状或片状的群体细胞形态，可用筛网过滤采收，降低采收成本。双眉藻(Amphora sp.)BQWSM CGMCC No.11816油脂含量可达细胞干重30-60％。在35℃条件下，F/2海水培养基培养3天，总脂含量可达到20％以上；培养7天，当达到指数生长中后期时，藻细胞总脂含量可达30％以上；当达到生长后期，或环境刺激(如低温或高盐条件培养)，藻细胞总脂含量最高可达到60％以上。双眉藻(Amphora sp.)BQWSM CGMCC No.11816藻油主要成份是：棕榈酸(C16：0)：30％左右；棕榈油酸(C16：1)：25％左右；EPA(二十碳五烯酸，C20:5)：3％—25％左右棕榈酸(C16：0)和棕榈油酸(C16：1)比例高，占50％以上，两种脂肪酸碳链较短，饱和度较高，适合做生物柴油。双眉藻(Amphora sp.)BQWSM CGMCC No.11816只含EPA，不含DHA，因而较易获得EPA纯品。此外，双眉藻(Amphora sp.)BQWSM CGMCC No.11816藻株易采收和培养，生物质生产成本较低，油脂含量高，EPA占脂肪酸量最可达25％，高于多数微藻，因而是较理想的制备EPA的原料。双眉藻(Amphora sp.)CGMCC No.11816在生产EPA中的应用也属于本专利技术的保护范围。所述应用中，生产EPA中包括培养双眉藻(Amphora sp.)CGMCC No.11816用于提取EPA，所述双眉藻(Amphora sp.)CGMCC No.11816按照包括下述步骤 的方法培养：1)将双眉藻(Amphora sp.)CGMCC No.11816接种至含硅酸盐的培养基静置或通气培养藻种，培养温度为30～38℃，，获得藻种培养液；2)将步骤1)培养的藻种培养液与含硅酸盐的培养基按照体积比1：20-120置于培养容器中进行大量培养，将可供硅藻附着的固体附着板或附着网(如PC板或其它固体附着材料)竖直(垂直于容器底部)固定于培养容器中，形成用于双眉藻附着的附板，相邻的两个间隔3-6厘米，向培养容器中通入空气，使海水培养基的温度为30-38℃，对硅藻附板照射灯光，光照强度10-80mol.m-2.s-1，光照时间每天12-15小时，培养3至10天后，采收藻株细胞。所述双眉藻(Amphora sp.)CGMCC No.11816培养后还包括低温刺激，所述低温刺激的步骤为：置于10-25℃低温环境中给予低温刺激0.5-2天。所述低温刺激优选15-25℃低温环境，低温刺激的方法可以为放置于低温循环水浴锅中刺激。双眉藻(Amphora sp.)CGMCC No.11816在生产生物柴油中的应用也属于本专利技术的保护范围。双眉藻(Amphora sp.)CGMCC No.11816在生产类胡萝卜素中的应用也属于本专利技术的保护范围。所述类胡萝卜素中，含量较高的是岩藻黄素，因此，本专利技术的双眉藻(Amphora sp.)CGMCC No.11816也可以用于高效提取岩藻黄素。综上所述，本专利技术的双眉藻(Amphora sp.)BQWSM CGMCC No.11816是一株综合性状优良藻株。该藻株生长快，易采收，生物质生产成本低于多数微藻。在制备生物柴油的同时，利用生物精炼技术可以获得EPA、类胡萝卜素和岩藻黄素等高附加值产品，其胞外多糖和二氧化硅硅壳也具有商业价值。附图说明图1为双眉藻(Amphora sp.)BQWSM显微镜下照片。具体实施方式实施例1.双眉藻(Amphora sp.)BQWSM的筛选、分离和鉴定1、双眉藻(Amphora sp.)BQWSM的筛选我们经过筛选，获得一株综合性状优良的硅藻株系：双眉藻(Amphora sp.) BQWSM，具体方法如下：取海南海口近岸海水，补加营养盐富集，瓶底长出褐色藻落后，取褐色藻落涂平板(平板用F/2培养基+1.5％琼脂配制而成)，获得多个双眉藻单克隆，挑取多个单克隆用F/2液体培养基培养，再经过涂平板分离纯化，经十几代的分离纯化经，高温、高盐筛选适应性强生长快的藻株，常温培养，检测EPA含量，挑取EPA含量最高的藻株，再进行平板纯化，培养。获得一株双眉藻，命名为BQWSM。2、双眉藻(Amphora sp.)BQWSM的鉴定2.1形态学鉴定在100倍油镜和激光共聚焦显微镜下观察双眉藻(Amphora sp.)BQWSM(图1)，可见藻细胞壳面椭圆形，长10～12.5微米，宽6～7.5微米。两端头形，宽2.8～3.5微米，背缘凸出、腹缘内凹，壳缝直，左右对称。2.2、分子鉴定方法：已测定18s rDNA和ITS序列离心收集对数期微藻细胞，CTAB法提取基因组DNA。分别以真核藻类18srDNA和ITS通用引物扩增藻细胞的18srDNA序列和ITS序列。18srDNA引物序列为：18SF:5’GGA TCA GAA TTC TAT CTG GTT 本文档来自技高网...
【技术保护点】
一株双眉藻(Amphora sp.)，其特征在于，所述双眉藻(Amphora sp.)的保藏编号为CGMCC No.11816。
【技术特征摘要】
1.一株双眉藻(Amphora sp.)，其特征在于，所述双眉藻(Amphora sp.)的保藏编号为CGMCC No.11816。2.双眉藻(Amphora sp.)CGMCC No.11816在生产EPA中的应用。3.根据权利要求2所述的应用，其特征在于，生产EPA中包括培养双眉藻(Amphora sp.)CGMCC No.11816，所述双眉藻(Amphora sp.)CGMCC No.11816按照包括下述步骤的方法培养：1)将双眉藻(Amphora sp.)CGMCC No.11816接种至含硅酸盐的培养基培养藻种，培养温度为25℃～38℃，获得藻种培养液；2)将步骤1)培养的藻种培养液与含硅酸盐的培养基按照体积比1：20-120置于培养容器中进行大量培养，将可供硅藻附着的固体附着...
【专利技术属性】
技术研发人员：刘志媛，
申请(专利权)人：海南大学，
类型：发明
国别省市：海南;46
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