一种猪II型圆环病毒ORF2蛋白的制备方法技术

本发明专利技术公开了一种猪II型圆环病毒ORF2蛋白的制备方法，将编码PCV2核衣壳蛋白的Cap基因连接到pET-28a(+)质粒上构建成表达质粒pET-28-Cap，转化BL21(DE3)感受态细胞，得到基因工程菌种pET-28-Cap/BL21。通过诱导表达及检测表明该重组蛋白具有良好的反应原性。可进一步用来作为诊断抗原或制备亚单位疫苗。产物在大肠杆菌中以可溶性形式表达，表达量大且避免了蛋白变性再复性的繁琐过程，降低了蛋白的损耗和生产成本。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及一种猪II型圆环病毒0RF2蛋白的制备方法。
技术介绍
猪II型圆环病毒(PCV2)是近年来新发现的动物病毒之一，属于圆环病毒科，是一种二十面体对称、无囊膜、单股环状DNA病毒，病毒粒子直径为17nm，是目前发现的最小的动物病毒。该病最早于1991年在加拿大西部发现，根据致病性的不同，被分为PCV-1和 PCV-2。其中PCV-2对猪有较强的感染性，可经口腔、呼吸道途径感染不同年龄的猪，引起断奶仔猪多系统衰竭综合征(PMWS)等。感染猪出现进行性消瘦、行动迟缓、呼吸困难、黄疸、 皮肤苍白，甚至死亡，病原学及血清学调查表明，该病在许多国家都广泛存在，给世界养猪业造成了很大的损失。PCV-2基因组含ORFl和0RF2，ORFl编码Rep蛋白，参与病毒复制，0RF2编码233个氨基酸，是病毒的核衣壳蛋白(Cap)，具有良好的免疫原性，是构建重组疫苗和临床检测的首选抗原。大肠杆菌表达系统不仅具有遗传背景清楚，培养操作简单、转导效率高、生长繁殖快、 成本低廉、可以快速大规模地生产目的蛋白等优点，而且其表达外源基因产物的水平远高于其它基因表达系统，因此大肠杆菌是目前应用最广泛的蛋本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种猪II型圆环病毒ORF2蛋白的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：1.序列合成通过序列比对，在保证编码的氨基酸相同的前提下改变核苷酸序列，把序列中的稀有密码子替换成大肠杆菌偏爱密码子，并在序列两端分别加上EcoR?I和Not?I?限制性酶切位点，合成cap基因，连接到PES载体上，按照设定的限制性内切酶进行酶切，将目的片段克隆至pMD18?T质粒载体上，转化感受态DH5a细胞，挑取阳性菌落，OMEGA试剂盒小量提取质粒，酶切鉴定阳性质粒；2．原核表达载体的构建与鉴定将质粒pES?Cap经EcoR?I和Not?I双酶切，回收702bp的目的片段，与同样经EcoR?I和Not?I双酶切的线性表...

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：李朝阳，李明义，石乔，
申请(专利权)人：山东信得科技股份有限公司，
类型：发明
国别省市：