本发明专利技术公开了一种叶酸受体靶向肿瘤的CT成像分子探针的制备方法，以叶酸为包裹剂，将叶酸溶解于用于制备纳米金的含有金离子的溶液中，并调节其pH为7.0～7.5，得到混合溶液，其中叶酸与金离子的摩尔比为1:2～6；向混合溶液中加入还原剂，然后快速搅拌反应至少1h，反应结束后自然冷却，透析去除未反应的部分，得到叶酸包被的纳米金。本发明专利技术所制备的叶酸包被的纳米金FA-GNPs，对X射线具有较高的衰减能力，可以作为CT成像造影剂；FA-GNPs能够为肿瘤提供高对比度的CT成像。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于CT分子成像
，涉及一种叶酸受体靶向肿瘤的CT成像分子探针的制备方法。
技术介绍
恶性肿瘤是一种常见的严重危害人类健康的疾病，目前已成为人类死亡的主要原因之一。近年来，随着经济和科技的发展，人们的生存环境和生活习惯日益改变，肿瘤已经成为世界范围内危害人类健康的难题并且其发病率呈上升趋势。与发达国家相比，我国的恶性肿瘤死亡率要高于世界平均水平。诊断的早晚决定了病人治愈的几率，据大量临床数据统计，早期发现的恶性肿瘤的五年生存率可达90%以上，而晚期发现的只有20%左右。大部分恶性肿瘤在早期没有任何症状，等出现了典型症状与体征时，往往已属中晚期而贻误·了治疗的时机。因此如果能够实现恶性肿瘤的早期诊断，精确了解恶性肿瘤的位置、大小和有无转移对于肿瘤的准确分期和治疗是十分必要的，将在很大程度上提高肿瘤的治愈率。因此，肿瘤的早期检测和治疗已成为各国科学家关注的热点。要实现肿瘤的早期诊断和治疗，首先要寻找活细胞内的肿瘤标志物，通过对肿瘤标记物进行标记，再进行成像获得相关信息。由于叶酸受体(FolicAcid Receptor FR)在多数肿瘤细胞膜表面，比如宫颈癌、卵巢癌、乳腺癌、子宫内膜癌、肺癌和鼻咽癌等，过度表达，通常比正常细胞高出20-200倍。而且，由于叶酸靶向的肿瘤诊断和治疗有对肿瘤细胞亲和力高，在体内循环时间长(5-20h)，在正常组织中可以很快被清除等优点，叶酸受体通常被作为叶酸药物复合物的靶目标实现对过表达FR的肿瘤的显像和治疗。近年来，随着纳米技术的飞速发展，纳米材料在生物医学工程领域的应用研究已成为一个很有生命力的新方向。由于纳米微粒尤其是纳米金具有易控的表面化学能力，独特的光学性质以及局域场增强效应等特性，其在生物组织成像、癌症的诊断和治疗方面受到了广泛重视。CT成像图像采集时间短、空间分辨率高(50-200 μ m)，可整体成像、费用低廉，就可用性、效率和成本等多方面考虑，CT是临床上最有效的诊断工具之一。现有的含碘CT造影剂能够有效吸收X射线，但在体内仅有很短的留存时间即被肾脏清除，成像时间短(15分钟以内)。而且本身可修饰性差，很难与肿瘤标记物耦合，不具备靶向性。此外，含碘造影剂对肾脏存在毒性，血管渗透压高。纳米金与之相比，具有更高的X射线衰减能力，体内循环时间长，并且很容易和生物分子结合，可以靶向肿瘤细胞。目前制备叶酸包被的纳米金也有一些方法，比如，Wang等(Li GP, Li D, ZhangLXj Zhai JFj Wang EKj one-stop synthesis of Folic Acid protected GoldNanoparticlesand Their Receptor-Mediated Intracellular Uptake,Chem. Eur. J. , 200915:9868-9873)报道了一种在温和条件下，以叶酸为还原剂制备纳米金颗粒，并具有一定的优点。但这种方法制备使用时较长。孙莉萍等人(孙莉萍，赖友群，张召武，马燕燕，贾静，叶酸受体靶向型纳米金颗粒的合成方法，专利技术专利CN: 102029401)利用微波加热法制备叶酸包裹的纳米金颗粒。但这种方法需要特殊的微波设备。上述的两种方法所制备的粒径都不均匀，而且没有验证是否可以应用于CT成像。
技术实现思路
本专利技术解决的问题在于提供一种叶酸受体靶向肿瘤的CT成像分子探针的制备方法，制备出作为靶向肿瘤探针的叶酸包裹的纳米金粒子。本专利技术是通过以下技术方案来实现一种叶酸包被的纳米金的制备方法，包括以下步骤I)以叶酸为包裹剂，将叶酸溶解于用于制备纳米金的含有金离子的溶液中，并调节其pH为7. O 7. 5，得到混合溶液，其中叶酸与金离子的摩尔比为1:5 10 ; 2)向混合溶液中加入还原剂，然后快速搅拌反应至少lh，反应结束后自然冷却，透析去除未反应的部分，得到叶酸包被的纳米金。所述的用于制备纳米金的含有金离子的溶液为氯金酸溶液。将叶酸溶于水，加热搅拌，使叶酸溶解之后，再加入到含有金离子的溶液中。所述的混合溶液中叶酸的浓度为O. 08 O. 24mmol/L,金离子的浓度为O. 4 1.5mmol/L。所述的还原剂为硼氢化钠，硼氢化钠与金离子的摩尔比为520:4 15。所述向混合溶液中加入还原剂,然后快速搅拌反应2 3h,搅拌速度为1000 1500转/分。所述的叶酸包被的纳米金的制备方法，其特征在于，所述的透析其透析截流分子量大于50(Tl000D的物质，透析6 12小时。所述的叶酸包被的纳米金的制备方法，其特征在于，所制备的叶酸包被的纳米金的粒径为3 5nm，在质量浓度为3. 5%NaCl溶液中和25000r/min离心下均不会发生聚沉。所述的叶酸包被的纳米金的制备方法在制备叶酸受体靶向肿瘤的CT成像分子探针中的应用。所制备的叶酸包被的纳米金作为叶酸受体靶向肿瘤的CT成像分子探针的应用。与现有技术相比，本专利技术具有以下有益的技术效果本专利技术提供的叶酸包被的纳米金的制备方法，以叶酸为稳定剂和包裹剂，以硼氢化钠为还原剂，简单快捷地制备出叶酸包裹的纳米金粒子(folic acidcoatd goldnanoparticles, FA-GNPs)作为祀向肿瘤探针。这种纳米探针粒径分布在3_5nm之间,体系均一、稳定，而且在高盐环境(3. 5%NaCl溶液)和高速离心(25000rpm)下均不会发生聚沉，而且对X射线具有强吸收，能够靶向肿瘤细胞并且可以对肿瘤进行清晰成像。本专利技术所制备的叶酸包被的纳米金FA-GNPs，通过FA-FR特异性结合到!fepG2细胞表面，而GNPs在30min内未能结合到MR-90细胞表面。HepG2细胞表面大量表达FR，而IMR-90细胞表面基本不表达FR，表明所制备的FR-GNPs对肿瘤细胞表面表达的FR存在靶向性。本专利技术所制备的叶酸包被的纳米金FA-GNPs，对X射线具有较高的衰减能力，可以作为CT成像造影剂；FA-GNPs能够为肿瘤提供高对比度的CT成像。附图说明图1-1为FA-GNPs TEM照片，图1-2为FA-GNPs的粒径分布图；图2-1 为 FA-GNPs 的 XPs 全谱图；图2-2为FA-GNPs中各元素的XPS分谱，其中A为Au4f、B为Cls、C为Nls、D为Ols ；图3-1为FA-GNPs和H印G2细胞培养30分钟后的电镜照片；图3-2为GNPs和H印G2细胞培养30分钟后的电镜照片；图4为添加有FA-GNPs的培养液在HepG2细胞培养前后吸光度值变化图； 图5-1为图5-2中各FA-GNPs的不同浓度分布；图5-2为对应的FA-GNP不同浓度的FA-GNPs CT成像(反色处理)；图5-3为不同浓度FA-GNPs的CT值曲线；图6为裸鼠背部大腿两侧分别种植宫颈癌肿瘤的照片；图7为裸鼠从尾到头不同横截面的CT成像，视图左侧为R，右侧为L，裸鼠摆放时左倾；箭头所指处为注射过FA-GNPs的H印G2肿瘤组织。具体实施例方式下面结合具体的实施例对本专利技术做进一步的详细说明，所述是对本专利技术的解释而不是限定。实施例1一种叶酸包被的纳米金的制备方法，包括以下步骤称取FA O. 0018g,溶于50mL超纯水中，滴加ImL 1%的HAuC14溶液，此时F本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种叶酸包被的纳米金的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：1）以叶酸为包裹剂，将叶酸溶解于用于制备纳米金的含有金离子的溶液中，并调节其pH为7.0～7.5，得到混合溶液，其中叶酸与金离子的摩尔比为1:2～6；2）向混合溶液中加入还原剂，然后快速搅拌反应至少1h，反应结束后自然冷却，透析去除未反应的部分，得到叶酸包被的纳米金。
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：姚翠萍，张镇西，杨洋，郭佑民，张少娟，董艳花，王晶，梅建生，
申请(专利权)人：西安交通大学，
类型：发明
国别省市：
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