本发明专利技术公开了一种测定水溶性维生素的方法，步骤包括：（1）制备维生素标准溶液，利用高效液相色谱仪对其检测，得保留时间并生成标准曲线；（2）取样品预处理得到溶液样品，利用所述高效液相色谱仪在与步骤（1）相同的条件下对其进行检测，得到样品保留时间和峰面积；（3）将步骤（2）中获得的保留时间和峰面积与步骤（1）中得到的保留时间及所述标准曲线进行比对，通过计算确定维生素含量。步骤（2）中预处理步骤包括：超声提取，将提取液于沸水中煮沸20-30min，冷却至室温，定容，摇匀；静置，取上清液过滤。采用本发明专利技术方法避免重复制样的繁琐过程，一次性完成四种维生素的测试，检测速度提高，且检测结果准确。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及一种维生素的检测方法，尤其是关于动物饲料中水溶性维生素的检测方法，属于化学成份的检测
技术介绍
水溶性维生素是指能在水中溶解的维生素，主要包括维生素B1、维生素B2、维生素B6、烟酰胺和维生素C等。其中，维生素B1又称硫胺素，参与动物体内糖类代谢，维持神经、消化和循环系统的正常功能。维生素B2又称核黄素，在生物氧化的呼吸链中起递氢作用，参与动物体内多种物质代谢和能量代谢。维生素B6参与氨基酸、糖原代谢和激素的合成，能促进消化、吸收，增强免疫力。烟酰胺是辅酶I和辅酶II的组成部分，是动物体内合成多种脱氢酶的辅酶的重要原料。上述水溶性维生素对生命活动具有重要作用。维生素通常是从食物中摄取的，人工饲养的动物食物源固定，维生素的摄取途径单一。控制好饲料中的维生素添加量就成了防止家畜缺乏维生素的主要手段。现有饲料工业检测水溶性维生素B:、B2、B6和烟酰胺的方法，是先将样品分别预处理后，再分别按照以下标准进行检测标准GB/T14700-2002《饲料中维生素B1的测定》、GB/T14701-2002《饲料中维生素B2的测定》、GB/T14702-2002《饲料中维生素B6的测定》和NY/T2130-2012《饲料中烟酰胺的测定》。上述水溶性维生素检测方法存在以下不足(I)检测分别进行，操作重复，检测周期冗长。(2)前处理过程中，所用的提取液、流动相为多种不同试剂，需分别配置，操作重复，过程繁琐。(3)为消除检测结果中拖尾现象，流动相配制时需用额外添加三乙胺。三乙胺是一种易燃、易爆、有毒、具强刺激性的药品，增加测试过程危险性。(4)维生素B1和B2结构类似，分离较困难。先分别提取再检测，维生素B1和B2相互影响，检测结果不准确。
技术实现思路
本专利技术的目的在于克服现有技术中检测过程繁杂，检测周期冗长、分离效果不佳等不足，提出。本专利技术的检测方法可以在较短的时间内实现对维生素BpByB6和烟酰胺的同时分离及精确检测。为了实现上述专利技术目的，本专利技术提供了以下技术方案一种水溶性维生素的检测方法，包括以下步骤(I)制备维生素B1、B2、B6和烟酰胺的标准溶液，利用高效液相色谱仪对其检测，得所述维生素的保留时间，并生成维生素浓度与峰面积之间对应的标准曲线；(2)取饲料样品进行预处理，然后利用所述高效液相色谱仪在与步骤(I)相同的条件下对其进行检测，得到所述溶液样品的各组份的保留时间和检测峰面积；(3)将步骤(2)中获得的所述溶液样品的各组分的保留时间和检测到的峰面积与步骤(I)中得到的保留时间及所述的标准曲线进行比对，计算确定饲料中的维生素B2,B6和烟酰胺的含量；进一步的，所述步骤(2)中的预处理包括(201)将词料样品用尚子对溶液超声提取,得提取液；(202)将步骤(201)所得提取液于沸水中煮沸20_30min ；(203)将步骤(202)得到的提取液冷却至室温，定容，摇匀；静置，取上清液过滤；所述离子对溶液为含有4-8mmol/L己烧磺酸钠和15_25mmol/L磷酸的水溶液。进一步，上述水溶性维生素的检测方法中，所述离子对溶液为含有5mmol/L己烷磺酸钠和20mmol/L磷酸的离子对溶液。进一步，上述水溶性维生素的检测方法中，所述高效液相色谱的流动相为所述离子对溶液。进一步，上述水溶性维生素的检测方法中，所述高效液相色谱的流动相分为流动相A和流动相B，其中流动相A为所述离子对溶液，流动相B为乙腈。高效液相色谱检测过程采用梯度洗脱方式，优选梯度洗脱程序如表I。表I用于洗脱水溶性维生素的梯度洗脱程序权利要求1.一种水溶性维生素的检测方法，其特征在于，包括以下步骤 (1)制备维生素BpByB6和烟酰胺的标准溶液，利用高效液相色谱仪对其检测，得所述维生素的保留时间，并生成维生素浓度与峰面积之间对应的标准曲线； (2)取饲料样品进行预处理，然后利用所述高效液相色谱仪在与步骤(I)相同的条件下对其进行检测，得到所述溶液样品的各组份的保留时间和检测峰面积； (3)将步骤(2)中获得的所述溶液样品的各组分的保留时间和检测到的峰面积与步骤(O中得到的保留时间及所述的标准曲线进行比对，计算确定饲料中的维生素V B2, B6和烟酰胺的含量； 所述步骤(2)中的预处理包括 (201)将饲料样品用离子对溶液超声提取，得提取液； (202)将步骤(201)所得提取液于沸水中煮沸20-30min； (203)将步骤(202)得到的提取液冷却至室温，定容，摇匀；静置，取上清液过滤； 所述离子对溶液为含有4-8mmol/L己烷磺酸钠和15-25mmol/L磷酸的水溶液。2.根据权利要求I所述的检测水溶性维生素的方法，其特征在于，所述离子对溶液为含有5mmol/L己烧磺酸钠和20mmol/L磷酸的离子对溶液。3.根据权利要求I所述的检测水溶性维生素的方法，其特征在于，步骤(203)中提取液过滤用的是O. 45 μ m水相滤膜。4.根据权利要求I所述的检测水溶性维生素的方法，其特征在于，所述高效液相色谱的流动相为权利要求I中所述离子对溶液。5.根据权利要求I所述的检测水溶性维生素的方法，其特征在于，高效液相色谱流动相分为A，B两种，A为权利要求I中所述的离子对溶液，B为乙腈，高效液相色谱检测过程采用梯度洗脱方式。6.根据权利要求5所述的检测水溶性维生素的方法，其特征在于，检测过程梯度洗脱程序如下流动相A、B初始比例为91:9，待基线平衡后进样，同时调整流动相A、B比例在12min内线性调整为80:20。7.根据权利要求I所述的检测水溶性维生素的方法，其特征在于，步骤(201)预处理中，饲料样品与提取液比例是重量体积比g/L，2 Γ5 :1。8.根据权利要求I所述的检测水溶性维生素的方法，其特征在于，高效液相色谱检测条件色谱柱，资生堂 UG120 (5 μ m, 4. 6mm i. d. X 250mm);温度，30<€ ;流速，I. OmL/min ;检测波长210nm。全文摘要本专利技术公开了一种测定水溶性维生素的方法，步骤包括(1)制备维生素标准溶液，利用高效液相色谱仪对其检测，得保留时间并生成标准曲线；(2)取样品预处理得到溶液样品，利用所述高效液相色谱仪在与步骤(1)相同的条件下对其进行检测，得到样品保留时间和峰面积；(3)将步骤(2)中获得的保留时间和峰面积与步骤(1)中得到的保留时间及所述标准曲线进行比对，通过计算确定维生素含量。步骤(2)中预处理步骤包括超声提取，将提取液于沸水中煮沸20-30min，冷却至室温，定容，摇匀；静置，取上清液过滤。采用本专利技术方法避免重复制样的繁琐过程，一次性完成四种维生素的测试，检测速度提高，且检测结果准确。文档编号G01N30/88GK102980967SQ20121058454公开日2013年3月20日 申请日期2012年12月28日 优先权日2012年12月28日专利技术者梁玉树, 王虎, 何芸芸 申请人:新希望乳业控股有限公司本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种水溶性维生素的检测方法，其特征在于，包括以下步骤：（1）制备维生素B1、B2、B6和烟酰胺的标准溶液，利用高效液相色谱仪对其检测，得所述维生素的保留时间，并生成维生素浓度与峰面积之间对应的标准曲线；（2）取饲料样品进行预处理，然后利用所述高效液相色谱仪在与步骤（1）相同的条件下对其进行检测，得到所述溶液样品的各组份的保留时间和检测峰面积；（3）将步骤（2）中获得的所述溶液样品的各组分的保留时间和检测到的峰面积与步骤（1）中得到的保留时间及所述的标准曲线进行比对，计算确定饲料中的维生素B1、B2、B6和烟酰胺的含量；所述步骤(2)中的预处理包括：（201）将饲料样品用离子对溶液超声提取，得提取液；（202）将步骤（201）所得提取液于沸水中煮沸20?30min；（203）将步骤（202）得到的提取液冷却至室温，定容，摇匀；静置，取上清液过滤；所述离子对溶液为含有4?8mmol/L己烷磺酸钠和15?25mmol/L磷酸的水溶液。
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：梁玉树，王虎，何芸芸，
申请(专利权)人：新希望乳业控股有限公司，
类型：发明
国别省市：
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