一种制备抗凝血酶的方法技术

本发明专利技术提供了一种制备抗凝血酶的方法，它包括如下步骤：a.沉淀溶解；b.PEG沉淀；c.病毒灭活；e.调制；h.残留肝素吸附；i.病毒灭活；j.除菌分装，冻干。本发明专利技术采用化学稳定性更好的硬性硅胶基质（HeparinHyperD）进行肝素亲和层析，这种基质耐碱处理的能力更好，更适用于工业化生产的需要，发明专利技术人在纯化技术及病毒灭活去除方面均进行改进，并加以进行有机组合，以期进行血浆深度综合利用，提高AT-Ⅲ制剂的有效性及安全性，为临床治疗提供新的选择。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及运用改良K-N法组份IV沉淀制备人抗凝血酶的方法，属血浆蛋白领域。
技术介绍
人抗凝血酶(Human Antithrombin- III, AT-III)是体内重要抗凝物质，它是相当分子量为58KD的单链α 2糖蛋白，由432个氨基酸组成，内含3个二硫键和4个寡糖侧链，多糖含量约15%。在机体内分布于肾脏，肺脏，特别是肝脏血管内皮细胞，AT-III正常血浆水平为80-300mg/L，其活性70%_130%。AT- III与丝氨酸蛋白酶作用的活性位点位于八找393-5虹394处，蛋白酶攻击该键使其裂解并引起41'-111变构，从而形成41'-111与酶I :I复合物，这种共价结合是不可逆的，能被肝素或硫酸乙酰肝素大大加强。AT-III与其他丝氨酸蛋白酶抑制剂如α 2-抗溶纤酶(α 2-ΑΡ)，肝素辅因子(HC- II)和纤溶酶原激活抑制物(PAI)等在氨基酸序列机构上具有同源性。AT-III抑酶很广，除凝血酶以外，对凝血因子II a, Xa, IXa, XIa, XDa以及纤溶酶，胰蛋白酶，激肽释放酶和补体均有灭活作用。AT-III的临床适应症为1.遗传性AT-III缺本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种制备抗凝血酶的方法，其特征在于：它包括如下步骤：a.沉淀溶解：取改良K?N法组份Ⅳ沉淀溶解于8?12倍体积的pH8.1?9.0的缓冲液中，常温分散混悬搅拌1小时，30?40℃加热搅拌1小时，再常温搅拌4?14小时，得溶解液；b.PEG沉淀：将a步骤溶解液冷至5℃，加入PEG3000?6000至浓度为6?12%（g/ml），搅拌1小时，用酸调整pH值至5.95?6.05，加入1.0?2.0%助滤剂，搅拌过滤得到PEG上清液，上清液用碱调到pH7.35?7.45；c、病毒灭活：S/D法；d、纯化：采用肝素亲和层析纯化；e、调制；f、纯化：采用肝素亲和层析纯化；g.超滤透析；h.残留肝素吸附；i...

【技术特征摘要】
1. 一种制备抗凝血酶的方法，其特征在于它包括如下步骤 a.沉淀溶解取改良K-N法组份IV沉淀溶解于8-12倍体积的pH8.1-9. O的缓冲液中，常温分散混悬搅拌I小时，30-40°C加热搅拌I小时，再常温搅拌4-14小时，得溶解液； b.PEG沉淀将a步骤溶解液冷至5°C，加入PEG3000-6000至浓度为6-12% (g/ml)，搅拌I小时，用酸调整pH值至5. 95-6. 05，加入I. 0-2. 0%助滤剂，搅拌过滤得到PEG上清液，上清液用碱调到PH7. 35-7. 45 ； C、病毒灭活S/D法； d、纯化采用肝素亲和层析纯化； e、调制； f、纯化采用肝素亲和层析纯化； g.超滤透析； h.残留肝素吸附； i.病毒灭活:15nm纳米过滤； j.除菌分装，冻干。2.一种制备抗凝血酶的方法，其特征在于它包括如下步骤 a.沉淀溶解取改良K-N法组份IV沉淀溶解于8-12倍体积的pH8.1-9. 0的缓冲液中，常温分散混悬搅拌I小时，30-40°C加热搅拌I小时，再常温搅拌4-14小时，得溶解液，弃去沉淀，在上清液中加入2-3%助滤剂，边搅拌边进行压滤得滤液，超滤浓缩至滤液体积的1/6-1/7，浓缩液蛋白浓度控制在5. 1_6%，得超滤浓缩液； b.PEG沉淀将a步骤超滤浓缩液冷至5°C，加入PEG3000-6000浓度为6-12% (g/ml),搅拌I小时，用酸调整pH值至5. 95-6. 05，加入I. 0-2. 0%助滤剂，搅拌过滤得到PEG上清液，上清液用碱调到PH7. 35-7. 45 ； C、病毒灭活S/D法； d、纯化采用肝素亲和层析纯化； e、调制； f、纯化采用肝素亲和层析纯化； g.超滤透析； h.残留肝素吸附...

【专利技术属性】
技术研发人员：吴强，蔡骏，廖颖，初毅波，胡晓东，
申请(专利权)人：成都蓉生药业有限责任公司，
类型：发明
国别省市：