细胞色素结合结构域蛋白作为助分泌因子提高外源基因在毕赤酵母中分泌表达量的用途制造技术

本发明专利技术公开了细胞色素结合结构域蛋白作为助分泌因子提高外源蛋白在毕赤酵母中分泌的用途。将细胞色素结合结构域蛋白编码基因按毕赤酵母密码子偏好进行优化并与外源基因进行融合得到融合基因，将融合基因转化到毕赤酵母中进行分泌表达能显著提高外源基因在毕赤酵母中的分泌表达量。由此，本发明专利技术提供了细胞色素结合结构域蛋白作为助分泌因子或其编码基因作为助分泌基因的新用途。此外，融合有细胞色素结合结构域蛋白编码基因的融合基因所表达的融合蛋白在分泌出毕赤酵母细胞外的过程中能被KeX2蛋白酶切割成野生型蛋白质和细胞色素结合结构域蛋白质，使外源蛋白质的N端不增加额外的序列，不影响分泌蛋白质的理化性质。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及细胞色素结合结构域蛋白及其编码基因的新用途，尤其涉及细胞色素结合结构域蛋白及其编码基因作为助分泌因子或助分泌基因以提高外源基因在毕赤酵母中分泌表达量中的新用途，属于细胞色素结合结构域蛋白或其编码基因的用途领域。
技术介绍
毕赤酵母(Pichia pastoris)是单细胞真核生物，既有类似原核生物的生长特征， 又有一般真核生物的细胞生物学特性，是目前最成功的外源基因真核表达系统。毕赤酵母表达系统具有易于操作培养，高密度发酵水平很高，表达菌株稳定，正确翻译和翻译后加工修饰更接近于高等真核生物等优点。除此之外毕赤酵母极少分泌自身蛋白，在其培养液中除目的蛋白外，几乎不含任何其它蛋白，这样就使得目的蛋白的纯化变得非常简单，而且许多外源基因的分泌表达量可达到每升克级以上，因此利用该系统可以极大的降低目的蛋白的生产成本。但是，如果目的蛋白不能分泌到胞外，其产量一般不会高于细胞总蛋白量的 1%，并且目的蛋白的纯化将变得非常复杂，蛋白质的生产成本自然也会非常高。因此尽管科研人员非常希望利用毕赤酵母高效分泌表达外源基因，然而到目前为止仍然有许多基因 (尤其是那些在原始菌或细胞中不分泌表本文档来自技高网...

【技术保护点】
细胞色素结合结构域蛋白作为助分泌因子在提高外源基因在毕赤酵母(Pichia?pastoris)分泌表达量中的应用；其中，所述细胞色素结合结构域蛋白的氨基酸序列为SEQ?ID?No.3所示。

【技术特征摘要】
1.细胞色素结合结构域蛋白作为助分泌因子在提高外源基因在毕赤酵母(Pichiapastoris)分泌表达量中的应用；其中，所述细胞色素结合结构域蛋白的氨基酸序列为SEQID No. 3 所示。2.优化的细胞色素结合结构域蛋白编码基因，其特征在于其核苷酸序列为SEQIDNo. 2所示。3.一种融合基因，其特征在于含有SEQ ID No. 2所示的核苷酸序列和SEQ ID No. 4所示的核苷酸序列。4.细胞色素结合结构域蛋白编码基因或权利要求2所述优化的细胞色素结合结构域蛋白编码基因作为助分泌基因在提高外源基因在毕赤酵母(Pichia pastoris)分泌表达量中的应用。5.按照权利要求4所述的应用，其特征在于，包括将细胞色素结合结构域蛋白编码基因或优化的细胞色素结合结构域蛋白编码基因与外源基因融合得到融合基因；将融合基因转化到毕赤酵母中进行分泌表达。6.按照权利要求5所述的应用，其特征在于所述的融合是将细胞色素结合结构域蛋白的C端引入能在毕赤酵母中能被KeX2蛋白酶识别的切割位点，然后再加上外源基因；其中，所述切割位...

【专利技术属性】
技术研发人员：田健，伍宁丰，初晓宇，黄璐，王平，
申请(专利权)人：中国农业科学院生物技术研究所，
类型：发明
国别省市：