一种结合FAP的多肽制造技术

本发明专利技术公开了一种结合FAP的多肽，所述的多肽是通过从噬菌体环七肽库中筛选得到的，所述的多肽能特异性的结合成纤维细胞活化蛋白且具有高亲活性，其序列为SCDYNHHWC。得用该多肽可以制备针对肿瘤基质的广谱探针，可以满足在肿瘤分子成像和肿瘤靶向治疗等方面的应用。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及一种多肽，具体而言涉及一种结合FAP的多肽。
技术介绍
目前，恶性肿瘤已经逐渐取代心脑血管疾病，成为人类的头号杀手。最近统计资料表明，我国每年新发现癌症患者约2000万人，近150万人死于癌症。癌症的死亡人数占总死亡数的1/5。肿瘤的早期诊断与治疗是提高其治愈率及改善病人生存质量的关键，而如何找到和利用有效的临床手段来实现肿瘤的早期诊断因此成为了基础研究的一个热门领域。分子成像在肿瘤的诊断和治疗中的应用研究越来越受到重视。开发新的高亲和性和特异性分子探针是肿瘤分子成像亟待解决的一个问题。已往在寻找诊断肿瘤的分子探针的研究主要集中在筛选针对肿瘤细胞表达的特异性标志物。然而，各种肿瘤的“异质性”，使得适用于各种病理类型的肿瘤靶向分子研究至今尚未获得突破性进展。肿瘤基质作为所有肿瘤的共有成份，在促进肿瘤持续生长和侵袭等方面发挥着关键的作用。因此以肿瘤基质为靶点设计的分子探针可能成为肿瘤分子显像新的切入点。肿瘤基质主要是由肿瘤相关的成纤维细胞、新生的血管、各种淋巴细胞和巨噬细胞、细胞外基质蛋白及细胞因子等成份组成[Liotta LA, Kohn EC. Themicroenvironmentofthe tumor host interface. Nature, 2001,411 (6835) :375-379.]。而肿瘤相关的成纤维细胞(Tumor-associated fibroblasts, TAFs)占肿瘤组织的50% 90%,主要分布于肿瘤基质内、靠近肿瘤血管内皮细胞并包绕着癌巢[Loeffler M, Kriiger JA, NiethammerAG，Reisfeld RA. . R. Targeting tumor-associated fibroblastsimproves cancerchemotherapy by increasing intratumoral drug uptake J. Clin. Invest,2006(7),116 1955-1962]。TAFs是非转化细胞且基因组非常稳定，与正常组织成纤维细胞差异显著，并且在各种肿瘤中的差异较小。成纤维细胞活化蛋白(FibroblastActivation Protein, FAP)是 TAFs 的核心标志物，属II型膜结合糖蛋白属于丝氨酸蛋白水解酶家族，具有二肽肽酶活性和胶原酶活性，可水解二肽肽酶、明胶和I型胶原，在脊椎动物的进化过程中高度保守。研究证明FAP表达在胚胎，间叶组织来源的肿瘤(如骨肉瘤，软组织肉瘤)、多种恶性上皮肿瘤(如肺癌、卵巢癌、结肠癌、乳腺癌、胃癌、恶性黑色素瘤，前列腺膀胱癌、胰腺癌、皮肤癌等)的 TAF 中选择性表达[ParkJE, LenterMC, Zimmermann RN, Garin-Chesa P, Old LJ,Rettig WJ. I. Fibroblast ActivationProtein, a Dual Specificity Serine ProteaseExpressed in Reactive Human TumorStromal Fibroblasts. J Biological Chemistry,1999,274(51) :36505-36512 ;Lee J,Fassnacht M,Nair S,Boczkowski D,Gilboa E. . TumorImmunotherapy TargetingFibroblast Activation Protein， a Product Expressed inTumor-AssociatedFibroblasts Cancer Research，2005，65(23) :11156-11163 ;Cheng JD,Valianou M，Canutescu AA, Jaffe EK, Lee HO，Wang H，Lai JH, Bachovchin WW, WeinerLM. . Abrogation of fibroblast activation protein enzymatic activity attenuatestumorgrowth.，Mol Cancer Ther. 2005，4 (3) :351-60 ；Huber MA, Kraut N，Park JE,SchubertRD，Rettig WJ, Peter RU，Garin-Chesa P. . Fibroblast activation protein differentialexpression and serine protease activity in reactive stromalfibroblasts of melanocyticskin tumors. . J Invest Dermatol，2003，120(2) :182-188;Cheng JD, Dunbrack RL Jr, Valianou M，Rogatko A，Alpaugh RK, Weiner LM. Promotionof tumor growth bymurine fibroblast activation protein, a serine protease,in an animal model. CancerRes，2005，62 (16) :4767-4772 ;enry LR，Lee HO，Lee JS,Klein-Szanto A，Watts P，Ross EA, Chen WT, Cheng JD. . Clinical implications offibroblast activation proteinin patients with colon cancer. Clin Cancer Res，2007，13(6) :1736-1741.]。因此，构建以FAP为靶点的分子影像探针，将在肿瘤的早期诊断、早期治疗和监测治疗效果方面发挥巨大的作用。分子探针可以分为小分子化合物，多肽，蛋白以及抗体等。多肽类分子具有高亲和力、高特异性、血液清除快和组织穿透能力强等特点而受到广泛关注。另外其制备与修饰也相对容易，在较短时间内能获得高对比度的肿瘤影像，并几乎不存在人体免疫反应。
技术实现思路
本专利技术旨在利用卩遼菌体展示环七肽库(Ph. D. -C7C Phage displaypeptidelibrary)，筛选对FAP具有高特异性和高亲和力的多肽序列。该多肽将有望有效解决具有广谱适用性的肿瘤靶向分子成像技术难题，为肿瘤的早期诊断提供重要手段，另外该多肽序列还有可能进一步用于肿瘤靶向治疗药物的开发。本专利技术采用逐步增加筛选压力的方法来进行特异性噬菌体的富集。具体筛选方法如下以FAP包被免疫试管并于4 °C度封闭过夜，TBST洗涤6次后加入噬菌体肽库，37 V振荡孵育lh，TBST洗涤10次去除非特异结合的噬菌体，加O. 2mol/LGlycine-HCl (pH2. 2) ImL振荡IOmin洗脱特异结合的噬菌体，加150 μ Llmol/LTris-HCl (ρΗ9. I)中和，取10 μ L洗脱产物计数噬菌体的滴度，其余洗脱产物感染大肠杆本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种特异性结合FAP的多肽，其特征在于，所述多肽的氨基酸序列为：SCDYNHHWC

【技术特征摘要】
1.一种特异性结合FAP的多肽，其特征在于，所述多肽的氨基酸序列为SCDYNHHWC2.权利要求I中所述多肽在肿瘤分子成像上的应用。3.权利要求I中所述多肽在肿瘤靶向治疗上的应用。4.权利要求I中所述多肽的筛选方法包括以下步骤 1)以FAP包被免疫试管并于4°C度封闭过夜； 2)TBST洗涤6次后加入噬菌体肽库，37°C振荡孵育lh，TBST洗涤10次去除非特异结合的噬菌体； 3)加0.2mol/L Glycine...

【专利技术属性】
技术研发人员：刘敏，
申请(专利权)人：刘敏，
类型：发明
国别省市：