(3R,5S)-6-氯-3,5-二羟基己酸叔丁酯的生物制备方法技术

一种(3R,5S)-6-氯-3,5-二羟基己酸叔丁酯的生物制备方法，其以(S)-6-氯-5-羰基-3-羟基己酸叔丁酯为底物，该底物在生物催化剂、辅因子和氢供体的存在下发生还原反应生成(3R,5S)-6-氯-3,5-二羟基己酸叔丁酯，所述的生物催化剂为重组酮还原酶，所述的辅因子为NAD/NADH或NADP/NADPH，所述的氢供体为异丙醇，所述的还原反应在pH为6.0~9.0的水相缓冲液中进行。本发明专利技术方法通过采用重组的酮还原酶，避免了因添加辅助的葡萄糖脱氢酶和葡萄糖而导致的使酶失活和产品提取困难等问题；并且采用改进的工艺，使得反应条件温和，反应效率提高，操作简便。

【技术实现步骤摘要】

：本专利技术属于生物制药和绿色化学领域，具体涉及一种(3R,5S)-6-氯-3,5-二羟基己酸叔丁酯的生物制备方法。
技术介绍
：利用生物酶催化剂制备手性药物中间体，在医药工业中有着重要的应用。在生产世界上畅销的降胆固醇他汀类药物，即羟甲基戊二酰CoA(HMG-CoA)还原酶抑制剂类化合物的研究中，其手性侧链的生产步骤是最关键的。其中，在尝试制备关键中间体(3R,5S)-6-氯-3,5-二羟基己酸叔丁酯的研究中，利用还原酶从(S)-6-氯-5-羰基-3-羟基己酸叔丁酯一步还原得到目标产物，以其高效率、高选择性的特点成为化学和制药工业界重点研究的对象。在已经公开的制备(3R,5S)-6-氯-3,5-二羟基己酸叔丁酯的方法中，化学还原方法的反应条件往往需要低温(如-70℃)，及易燃的硼烷类化合物参与，是极为危险和难以实用化的(Angew. Chem. Int. Ed. 2000, 39: 4306-4307)。相比较而言，生物法的应用条件更加温和，因此也更加实用和环保。例如美国专利US2008/0248539 A1公开了一种利用来自于酿酒酵母(Saccharomyces本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种(3R,5S)？6？氯？3,5？二羟基己酸叔丁酯的生物制备方法，其以(S)？6？氯？5？羰基？3？羟基己酸叔丁酯为底物，该底物在生物催化剂、辅因子和氢供体的存在下发生还原反应生成(3R,5S)？6？氯？3,5？二羟基己酸叔丁酯，其特征在于：所述的生物催化剂为重组酮还原酶，所述的重组酮还原酶的制备方法为：将含有酮还原酶基因的重组大肠杆菌单菌落接种到含卡纳霉素抗性的液体LB培养基中，于35~40℃下摇床活化8~12小时，将活化后得到的培养物接种到含卡纳霉素抗性的液体LB培养基中，于35~40℃下摇床扩大培养，培养至OD600值达到0.6~0.8时，加入诱导剂，于25~33℃下继续培养8~12小...

【技术特征摘要】
1. 一种(3R,5S)-6-氯-3,5-二羟基己酸叔丁酯的生物制备方法，其以(S)-6-氯-5-羰基-3-羟基己酸叔丁酯为底物，该底物在生物催化剂、辅因子和氢供体的存在下发生还原反应生成(3R,5S)-6-氯-3,5-二羟基己酸叔丁酯，其特征在于：所述的生物催化剂为重组酮还原酶，所述的重组酮还原酶的制备方法为：将含有酮还原酶基因的重组大肠杆菌单菌落接种到含卡纳霉素抗性的液体LB培养基中，于35~40℃下摇床活化8~12小时，将活化后得到的培养物接种到含卡纳霉素抗性的液体LB培养基中，于35~40℃下摇床扩大培养，培养至OD600值达到0.6~0.8时，加入诱导剂，于25~33℃下继续培养8~12小时，离心，收集沉淀物，加入磷酸盐缓冲液得悬浮液，将悬浮液置于冰水浴中超声破碎8~12分钟，再离心，将上清液预冻至温度降至-10~-25℃，然后再冻干24~48小时，即得冻干粉状的重组酮还原酶，所述的重组酮还原酶能将异丙醇转化为丙酮，所述的辅因子为NAD/NADH或NADP/NADPH，所述的氢供体为异丙醇，所述的还原反应在pH为6.0~9.0的水相缓冲液中进行。
2. 根据权利要求1所述的(3R,5S)-6-氯-3,5-二羟基己酸叔丁酯的生物制备方法，其特征在于：在反应起始时的反应体系中，重组酮还原酶与(S)-6-氯-5-羰基-3-羟基己酸叔丁酯的质量百分比为2~4%，辅因子与(S)-6-氯-5-羰基-3-羟基己酸叔丁酯的质量百分比为...

【专利技术属性】
技术研发人员：鞠鑫，樊博，
申请(专利权)人：苏州汉酶生物技术有限公司，
类型：发明
国别省市：