本发明专利技术公开了一种肝干细胞保存液及其应用。本发明专利技术提供的肝干细胞保存液，是将0.1-1g有效剂量的人血白蛋白、2.60-4.97g氯化钠、2.48-4.74g葡萄糖酸钠、1.82-3.40g醋酸钠、0.18-0.35g氯化钾、0.15-0.28g氯化镁和0.4-0.7mL肝素钙注射液用水定容至100mL得到的。本发明专利技术提供的肝干细胞保存液用于保存肝干细胞，在12小时以内细胞存活率为85％以上，甚至达到95％以上。将肝干细胞悬浮于所述肝干细胞保存液得到的细胞悬液可以作为治疗糖尿病的药物，具有稳定性高、疗效好、安全性高、无毒副作用、便于储存和运输，适应临床大规模使用，应用前景广阔的特点，本发明专利技术可为糖尿病患者带来福音，为临床上干细胞的使用开辟了新的道路。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及一种肝干细胞保存液及其应用。
技术介绍
"糖尿病"是一种血液中的葡萄糖容易堆积过多的疾病。国外给它的别名叫"沉默的杀手"(Silent Killer)，特别是"成人型糖尿病"，四十岁以上的中年人染患率特别高，在日本，四十岁以上的人口中占10%，即十人当中就有一位"糖尿病"患者。一旦患上"糖尿病"，将减少寿命十年之多，且可能发生的并发症遍及全身。"糖尿病"本身亦给人带来非常的痛苦，让人常常觉得口干想喝水，因多尿而半夜多次醒来，尽管已吃了不少食物仍觉饥饿感，体重减轻、嗜睡等等，总让人觉得周身哪处不对劲。等到能够感觉到某处的明显情况时，"糖尿病"的病情已发展到一定程度了。而可怕的并发症亦随之悄悄地在全身各处发展着。 肝干细胞是一种来源于肝脏Herring狭隙和肝内胆管的具有双向分化潜能的细胞，能够分化为肝实质细胞和胆管上皮细胞。这种细胞的细胞质少，具有卵圆形细胞核，故X称卵圆细胞(Oval)。在正常的情况，这种卵园细胞是静止的，数量很少。在肝细胞严重及持续性肝损伤中，肝细胞的增殖能力减弱，这种称为卵圆细胞的肝干细胞亚群被激活增殖。肝干细胞对糖尿病是有作用的，但具有个体差异，有的人通过介入肝干细胞后停止服用胰岛素，有的人胰岛素减量。虽然肝干细胞能通过多种途径形成胰岛素分泌细胞，但肝干细胞向胰腺细胞转分化的机制还不清楚。有人认为可能肝、胰腺和小肠共同来源于内胚层的细胞，或者存在有这样一个相邻的区域，在发育过程中或在某种刺激条件下，这个区域的细胞能够被重编程或退分化再转分化形成完全不同于正常组织的表型。这不排除另一种可能成体组织中存在一小群多能的干细胞，它们具有向多个系统分化的能力。
技术实现思路
本专利技术的目的是提供一种肝干细胞保存液及其应用。本专利技术提供的肝干细胞保存液，是将O. I-Ig有效剂量的人血白蛋白、2. 60-4. 97g氯化钠、2. 48-4. 74g葡萄糖酸钠、I. 82-3. 40g醋酸钠、O. 18-0. 35g氯化钾、O. 15-0. 28g氯化镁和O. 4-0. 7mL肝素钙注射液用水定容至IOOmL得到的。本专利技术提供的肝干细胞保存液，优选为是将O. 2-lg有效剂量的人血白蛋白(如O. 2-0. 4g有效剂量的人血白蛋白或O. 4-1. Og有效剂量的人血白蛋白)、4. 18-4. 97g氯化钠(如 4. 18-4. 71g 或 4. 71-4. 97g)、3· 99-4. 74g 葡萄糖酸钠(如 3. 99-4. 49g 或 4. 49至 4. 74g)、2· 90-3. 40g 醋酸钠(如 2. 90-3. 29g 或 3. 29-3. 40g)、0· 29-0. 35g 氯化钾(如O. 29-0. 33g 或 O. 33-0. 35g)、0· 24-0. 28g 氯化镁(如 O. 24-0. 27g 或 O. 27-0. 28g)和O. 5-0. 7mL肝素钙注射液(如O. 5-0. 6mL或O. 6-0. 7mL)用水定容至IOOmL得到的。所述人血白蛋白可以以人血白蛋白注射液的形式加入，也可以以人血白蛋白冻干粉的形式加入。肝素钙具有防止细胞聚集成团的功能。本专利技术提供的肝干细胞保存液用于保存肝干细胞，在12小时以内细胞存活率为85%以上，甚至达到95%以上。所述肝干细胞保存液可用于保存肝干细胞，特别是离体的肝干细胞，优选为离体的人肝干细胞。本专利技术还保护一种保存肝干细胞的方法，是将肝干细胞悬浮于所述肝干细胞保存液，4-8°C保存12小时以下(如4-6°C保存12小时或6_8°C保存12小时)；所述肝干细胞和所述肝干细胞保存液的配比为6 X 105-7 X IO5个肝干细胞活细胞ImL肝干细胞保存液(如6 X 105-6. 8 X IO5个肝干细胞活细胞ImL肝干细胞保存液，或6. 8 X 105_7 X IO5个肝干细胞活细胞=ImL肝干细胞保存液)。所述肝干细胞可为离体的肝干细胞，优选为离体的人肝干 细胞。本专利技术还保护一种治疗糖尿病的药物，是将肝干细胞悬浮于所述肝干细胞保存液得到的细胞悬液；所述肝干细胞和所述肝干细胞保存液的配比为6X 105-7X 105个肝干细胞活细胞ImL肝干细胞保存液(如6 X 105-6. 8 X IO5个肝干细胞活细胞ImL肝干细胞保存液，或6. 8 X 105-7 X IO5个肝干细胞活细胞ImL肝干细胞保存液)。所述肝干细胞可为离体的肝干细胞，优选为离体的人肝干细胞。本专利技术提供的治疗糖尿病的药物具有稳定性高、疗效好、安全性高、无毒副作用、便于储存和运输，适应临床大规模使用，应用前景广阔的特点，本专利技术可为糖尿病患者带来福音，为临床上干细胞的使用开辟了新的道路。本专利技术提供的药物可分化成有功能的肝细胞，具有再生修复实质器官和发挥免疫调节的双向作用，可以提高免疫功能、改善肝脏的微环境、降低炎性细胞因子分泌，减轻炎症反应，还可以抑制肝星状细胞活化、阻止细胞外基质的生成，还可以逆转糖尿病、激活卵原细胞、促进肝细胞再生、修复实质器官和慢性肝损害。具体实施例方式以下的实施例便于更好地理解本专利技术，但并不限定本专利技术。下述实施例中的实验方法，如无特殊说明，均为常规方法。下述实施例中所用的试验材料，如无特殊说明，均为自常规生化试剂商店购买得到的。以下实施例中的定量试验，均设置三次重复实验，结果取平均值。人肝干细胞文献(Humanhepatic stem cells):参考文献Schmelzer E, ZhangL，Bruce A，Wauthier E，Ludlow J，Yao HL, Moss N，Melhem A，McClelland R，Turner W,Kulik M，Sherwood S，Tallheden T，Cheng N，Furth ME，Reid LM. Human hepaticstem cellsfrom fetal and postnatal donors. J Exp Med. 2007，204 (8) :1973-87.实施例I、肝干细胞保存液的制备人血白蛋白注射液购自哈尔滨世亨生物工程药业股份有限公司，产品目录号为(92)卫药准字(哈世亨)S-Ol号，每升含有20g有效剂量的人血白蛋白。肝素I丐注射液购自Sanofi Winthrop Industrie公司，产品目录号为J20040119。肝干细胞保存液I的制备方法将5mL人血白蛋白注射液(含O. Ig有效剂量的人血白蛋白)、0. 4mL肝素钙注射液、2. 60g氯化钠、2. 48g葡萄糖酸钠、I. 82g醋酸钠、O. 18g氯化钾和O. 15g氯化镁用水定容至100mL。肝干细胞保存液II的制备方法将IOmL人血白蛋白注射液(含O. 2g有效剂量的人血白蛋白)、0. 5mL肝素钙注射液、4. 18g氯化钠、3. 99g葡萄糖酸钠、2. 90g醋酸钠、O. 29g氯化钾和O. 24g氯化镁用水定容至lOOmL。肝干细胞保存液III的制备方法将20mL人血白蛋白注射液(含O. 4g有效剂量的人血白蛋白)、0. 6mL肝素钙注射液 、4. 71g氯化钠、4. 49g葡萄糖酸钠、3. 29g醋酸钠、O. 33g氯化钾和O. 27g氯化镁用水定容至lOOmL。肝干细胞保存液IV的本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种肝干细胞保存液，是将0.1?1g有效剂量的人血白蛋白、2.60?4.97g氯化钠、2.48?4.74g葡萄糖酸钠、1.82?3.40g醋酸钠、0.18?0.35g氯化钾、0.15?0.28g氯化镁和0.4?0.7mL肝素钙注射液用水定容至100mL得到的。
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：田杰，
申请(专利权)人：北京清美联创干细胞科技有限公司，
类型：发明
国别省市：
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