本发明专利技术涉及从免疫缺陷型非人类动物中产生人单克隆抗体的方法，所述方法包括将新生免疫缺陷型非人类动物与人类胎儿肝干细胞(FL细胞)接触来产生免疫移植的非人类动物(重建动物)，随后将所述重建动物与抗原接触，从所述重建动物中收集产生针对所述抗原的人抗体的人细胞，并从所述抗体产生细胞中分离所述抗体。
【技术实现步骤摘要】
在用人胎儿肝干细胞注射的免疫缺陷动物中产生抗体的方法本申请是申请日为2007年5月9日、专利技术名称为“”的中国专利申请200780008799. 7 (国际申请号PCT/ EP2007/004085)的分案申请。本专利技术涉及产生抗体的方法、抗体生成细胞的组合物、它们的生产方法及其用途。
技术介绍
长期以来认为单克隆抗体(MAB)是癌症的免疫疗法、感染或自身免疫病等的妙方。然而，由于人抗小鼠的免疫应答，人类中使用的第一代鼠抗体很不成功。人抗体大部分来自携带有受限的一组人类Ig基因的转基因小鼠或使用噬菌体展示、酵母展示或类似重组技术选自多数人工抗体库。这些策略已经被设计用来消除针对人类背景中的单克隆抗体的任何免疫反应。人抗体可以在转基因动物(例如小鼠)中产生， 所述转基因动物经免疫后能够在没有内源性免疫球蛋白产生的情况下产生人抗体。在此类种系转基因小鼠中转移人类种系免疫球蛋白基因阵列导致抗原攻击时产生人抗体(见， 例如，van Dijk, Μ. Α.和 van de Winkel, J. G.，Curr. Opin. Chem. Biol. 5 (2001) 368-374 ； Jakobovits, Α.,等)κ, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 90(1993)2551-2555 Jakobovits, A.， 等人，Nature 362(1993)255-258 ；Bruggemann, Μ.,等人，Year Immunol. 7 (1993) 33-40)。 人抗体也可在噬菌体展示文库中产生(Hoogenboom，H. R.和Winter，G.，J. Mol. Biol. 227 (1992) 381-388 ；Marks, J. D.，等人，J. Mol. Biol. 222 (1991) 581-597)。Cole 等人和Boerner等人的技术也适用于人单克隆抗体的制备(Cole等人，Monoclonal Antibodies and Cancer Therapy, Alan R. Liss, p. 77 (1985)；禾口 Boerner, P.,等人’ J. Immunol. 147(1991)86-95)。然而此类转基因小鼠只能提供具有受限的一组人类Ig基因的抗体-由转染的免疫球蛋白基因阵列引起的那些。基于对人类免疫球蛋白基因转基因的小鼠的方法学已经允许产生来自人类种系序列的抗体，根据报道所述抗体与鼠类的或小鼠-人嵌合抗体相比已经降低所获抗体药物的免疫原性。然而，来自转基因小鼠的人抗体与天然人类免疫所有组成成分相比在它们的多样性、亲和力及特异性上有限。类似地，基于噬菌体或酵母展示的组合文库方法的主要缺点是抗体重链和轻链的随机配对。为鉴定具有高亲和力的重链和轻链对，原始抗体重链和轻链对——非同源对的解离需要筛选多数克隆。此外，此类非同源对可能呈现与人类自身抗原不想要的交叉反应性。最后，由于固有的选择偏倚，通过组合文库的选择和筛选鉴定的靶特异性抗体的遗传多样性通常受限。Traggai，E.等人，Science 304(2004) 104-107描述了在移植了人类脐血细胞的 Rag 2-/-γ C-/-小鼠中开发人类免疫系统的方法，其可用作评估对疫苗或活体感染性病原体的应答和靶定人类免疫系统的药学化合物的临床前模型。已表明重建并随后接种病原体的小鼠可产生低水平的破伤风类毒素特异性抗体应答。专利技术概述本专利技术包含从免疫缺陷型非人类动物中产生人单克隆抗体的方法，所述方法包括使新生免疫缺陷型非人类动物与人类胎儿肝干细胞(FL细胞)接触来产生免疫移植的非人类动物(重建动物)，随后使所述重建动物与抗原接触，从所述重建动物中收集产生针对所述抗原的人抗体的人细胞，并从所述抗体产生细胞中分离所述抗体。本专利技术优选包括本专利技术的方法，其特征在于通过转化方法或细胞融合方法建立所述抗体产生细胞，优选无限增殖的抗体产生细胞。优选地所述无限增殖细胞能够保持活力至少50代。优选地，所述非人类动物是啮齿类动物并更优选为小鼠、大鼠或兔。进一步优选所述小鼠是 I ag2-/- y c-/-、裸 fcig 2-/-、NOD (NOD 指根据本专利技术优选 NOD. Cg-RagltmlMom PrfltmisdVSzJ)或SCID米色小鼠并且大鼠是裸大鼠。本专利技术包括本专利技术的方法，其特征在于所述FL细胞是人类造血胎儿肝干细胞 (HFL 细胞)，优选 CD133+、CD 117+、CD 31+和域 CD34+。在另一实施方案中，所述方法优选地特征在于所述FL细胞是HFL细胞和人类非造血胎儿肝干细胞的组合。本专利技术包括本专利技术的方法，其特征在于所述抗体产生细胞是人类B细胞。本专利技术包括本专利技术的方法，其特征在于所述FL细胞经腹膜内、皮下或肝内注射到动物中用于接触。本专利技术包括本专利技术的方法，其特征在于所述抗原是多肽、MHC/肽复合体或DNA。本专利技术包括本专利技术的方法，其特征在于所述抗原作为抗原、抗原片段、编码抗原的 DNA和/或抗原携带细胞与重建动物接触。本专利技术包括本专利技术的方法，其特征在于所述免疫缺陷非人类动物与FL细胞接触前接受亚致死照射。本专利技术包括本专利技术的方法，其特征在于所述小鼠与所述FL细胞接触后5到18周小鼠第一次与抗原接触。本专利技术包括本专利技术的方法，其特征在于所述小鼠与抗原接触高达10次。本专利技术包括本专利技术的方法，其特征在于所述收集的细胞是人CD19+或CD22+细胞。本专利技术包括本专利技术的方法，其特征在于所述细胞通过杂交瘤技术建立。本专利技术包括本专利技术的方法，其特征在于融合伴侣细胞系是MFP-2、HK_U8、K6H6/B5 或Karpas 707细胞系。本专利技术包括用于产生多数人类B细胞的方法，所述B细胞产生完全多数的针对抗原的人抗体，所述方法的特征在于使新生免疫缺陷的非人类动物与FL细胞接触来产生免疫重建动物，随后使所述重建动物与抗原接触，收集所述人类B细胞，产生所述完全多数的抗体。本专利技术包括非人类动物用于产生本专利技术的产生抗原的无限增殖细胞的用途。如果所述无限增殖细胞是杂交瘤细胞，用于杂交瘤产生的一种融合伴侣是来自所述移植并重建动物的人类B细胞，另一种融合伴侣是例如来自人、啮齿动物或其它动物的骨髓瘤细胞。或者通过EBV转化产生无限增殖的移植并重建的B细胞。本专利技术包含多数的人类B细胞，所述人类B细胞产生完全多数的针对人类蛋白质的人抗体。本专利技术包含无限增殖细胞的组合物，其提供完全多数的针对人类蛋白质的人抗体。本专利技术包含重建动物用于产生多数无限增殖B细胞的用途，所述B细胞产生完全多数的针对人类蛋白质的人抗体。本专利技术包括在非人类动物中发生并产生单克隆人抗体的方法，所述抗体针对人类蛋白质(包括片段)，其与所述非人类动物的对应蛋白质有至少80% (BLAST)的同源性。此实例是CXCR5。人和鼠的CXCR5有84%的同源性。本专利技术因此提供方法来产生针对高保守蛋白质或蛋白质区的人抗体，即使所述蛋白质或其片段在人和所述非人类动物间具有至少 95%或更高的同源性或甚至100%的同源性。因此本专利技术的另一目标是对人类蛋白质特异的单克隆人抗体，所述人类蛋白质与非人类动物，优选小鼠、大鼠和/或兔的对应蛋白质具有至少95%，优选98%并甚至100% 同源性本文档来自技高网...
【技术保护点】
【技术特征摘要】
...
【专利技术属性】
技术研发人员：A·利夫克，V·利夫克，B·穆勒贝克曼，T·施奈泽尔，
申请(专利权)人：弗·哈夫曼拉罗切有限公司，
类型：发明
国别省市：
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