本发明专利技术提供一种利用阳性脂质体增加介孔硅纳米材料进入细胞效率的方法,包括下列步骤：用无血清培养基500微升稀释溶解阳性脂质体20微升，稀释比例为1：25,并室温下静置5分钟；用500微升无血清培养基稀释溶解0.5mg介孔硅纳米材料，室温下静置5分钟；稀释溶解后的阳性脂质体与所述稀释溶解后的介孔硅材料等量混合，室温下静置20分钟；将混合液均匀加在含1640培养基4ml的培养细胞中，轻轻混匀后，37°C的二氧化碳培养箱培养。本发明专利技术用于增加介孔硅纳米材料，特别是表面负电荷的介孔硅进入细胞内的效率，使介孔硅纳米材料更好发挥生物作用。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及介孔硅纳米材料进入细胞内增效，且特别是有关于一种。
技术介绍
纳米材料是目前发展迅速的一个领域，介孔硅(MSN)是一种纳米材料。由于介孔硅具有多孔性，表面面积大，表面容易进行化学修饰等优点。近年来人们研究利用介孔硅装载针对肿瘤化学治疗的药物，直接通过细胞内吞进入靶细胞，到达细胞内在溶酶体酸性pH条件下，释放装载的药物，达到杀伤肿瘤细胞的作用。因此，避免了药物在到达肿瘤细胞前对正常细胞的毒性作用，发挥特异性杀死肿瘤细胞的作用。由于介孔硅表面含有氨基，可以通过化学键与多肽、核苷酸等多种化学物质相连。在介孔硅表面连接上肿瘤细胞特有的某些多肽如RGD (三肽)，就可以发挥特异性靶向肿瘤的作用。同时，介孔硅还可以与具有荧光、 近红外发光、超顺磁性材料(SPI0)等物质一起合成，进行光学和磁共振成像，成为针对肿瘤的特异性纳米探针。因此，介孔硅是一种非常有发展前途的纳米材料。介孔硅发挥其生物作用的前提条件是介孔硅必须进入靶向细胞。根据研究结果，不同的介孔硅进入不同肿瘤细胞的效率不同。介孔硅的形状、表面电荷特性、长短径比值、表面修饰材料等都会影响其进入细胞的效率。同一介孔硅针对不同的细胞，被细胞内吞的效率也不相同。由于细胞膜的表面呈现负电荷，对于表面也为负电荷的介孔硅，其进入细胞内的效率就特别低。
技术实现思路
本专利技术目的是增加介孔硅特别是表面为负电荷的介孔硅纳米材料进入细胞内的效率，从而使介孔硅发挥其生物作用。为达成上述目的，本专利技术提出一种，包括下列步骤；用无血清培养基500微升稀释溶解阳性脂质体20微升，稀释比例为I :25，并室温下静置5分钟；用500微升无血清培养基稀释溶解O. 5mg介孔硅纳米材料，室温下静置5分钟；稀释溶解后的阳性脂质体与所述稀释溶解后的介孔硅材料等量混合，室温下静置20分钟；将混合液均匀加在含1640培养基4ml的培养细胞中，轻轻混匀后，37° C的二氧化碳培养箱培养。进一步,本专利技术中，所述的阳性脂质体为Lipofectamine 2000,所述的无血清培养基为 OptiMEM I。本专利技术的有益效果是由于脂质体(liposomes)表面带正电荷,可以将表面带负电荷的介孔硅(MSNs)包围起来，脂质体表面带正电荷，很容易和带负电荷的细胞膜结合，从而携带介孔娃进入细胞内，提闻介孔娃纳米材料进入细胞内的效率。附图说明图I为阳性脂质体Lipofectamine2000的示意图。图2显示了通过透射电镜观察单纯介孔硅纳米材料被正常胚胎肾293T细胞吞噬的情况。图3显示了使用了本专利技术后再通过电镜观察介孔硅纳米材料被正常胚胎肾293T细胞吞噬的情况。图4应用电感耦合等离子直读光谱仪(ICP)测定293T对照组细胞(没有吞噬介孔硅)、293T细胞单纯介孔硅吞噬和293Τ细胞脂质体增强介孔硅吞噬实验后，等量细胞内硅原子浓度，其中结果显示，脂质体明显增加介孔硅进入细胞的数量。·具体实施例方式为了更了解本专利技术的
技术实现思路
，特举具体实施例并配合所附图式说明如下。阳性脂质体Lipofectamine2000是一种双层的疏水脂质体材料，目前常规用于转导DNA进入细胞。如图I所示，由于脂质体(liposomes)表面带正电荷,可以将表面带负电荷的介孔硅(MSNs)包围起来，脂质体表面带正电荷，很容易和带负电荷的细胞膜结合，从而携带介孔娃进入细胞内。基于上述原理，本专利技术提出一种，包括下列步骤用无血清培养基500微升稀释溶解阳性脂质体20微升，稀释比例为I :25，并室温下静置5分钟；用500微升无血清培养基稀释溶解O. 5mg介孔硅纳米材料，室温下静置5分钟；稀释溶解后的阳性脂质体与所述稀释溶解后的介孔硅材料等量混合，室温下静置20分钟；将混合液均匀加在含1640培养基4ml的培养细胞中，轻轻混匀后，37° C的二氧化碳培养箱培养。且本实施例中，阳性脂质体为美国invitrogen公司生产的Lipofectamine2000,无血清培养基为美国invitrogen公司生产的OptiMEM I。图2显示了通过透射电镜观察单纯介孔硅纳米材料被正常胚胎肾293T细胞吞噬的情况，由图2可见，细胞内几乎没有被吞噬的介孔硅纳米颗粒。图3显示了使用了本专利技术的方法后再通过电镜观察介孔硅纳米材料被正常胚胎肾293T细胞吞噬的情况。由图3可知，阳性Lipofectamine 2000帮助介孔硅进入细胞，电镜检查显示293T细胞内吞噬有较多的介孔硅纳米材料。图4应用电感耦合等离子直读光谱仪(ICP)测定293T对照组细胞(没有吞噬介孔硅)、293T细胞单纯介孔硅吞噬和293Τ细胞脂质体增强介孔硅吞噬实验后，等量细胞内硅原子浓度。结果显示，脂质体明显增加介孔硅进入细胞的效率。本专利技术用于增加介孔硅纳米材料，特别是表面负电荷的介孔硅进入细胞内的效率，使介孔硅纳米材料更好发挥生物作用。虽然本专利技术已以较佳实施例揭露如上，然其并非用以限定本专利技术。本专利技术所属
中具有通常知识者，在不脱离本专利技术的精神和范围内，当可作各种的更动与润饰。因 此，本专利技术的保护范围当视权利要求书所界定者为准。权利要求1.一种，其特征在于，包括下列步骤 用无血清培养基500微升稀释溶解阳性脂质体20微升，稀释比例为I :25，并室温下静置5分钟； 用500微升无血清培养基稀释溶解O. 5mg介孔硅纳米材料，室温下静置5分钟； 稀释溶解后的阳性脂质体与所述稀释溶解后的介孔硅材料等量混合，室温下静置20分钟； 将混合液均匀加在含1640培养基4ml的培养细胞中，轻轻混匀后，37° C的二氧化碳培养箱培养。2.根据权利要求I所述的，其特征在于，所述的阳性脂质体为Lipofectamine 2000。3.根据权利要求I所述的，其特征在于，所述的无血清培养基为OptiMEM I。权利要求不允许出现上述形式的语句。全文摘要本专利技术提供一种,包括下列步骤用无血清培养基500微升稀释溶解阳性脂质体20微升，稀释比例为125,并室温下静置5分钟；用500微升无血清培养基稀释溶解0.5mg介孔硅纳米材料，室温下静置5分钟；稀释溶解后的阳性脂质体与所述稀释溶解后的介孔硅材料等量混合，室温下静置20分钟；将混合液均匀加在含1640培养基4ml的培养细胞中，轻轻混匀后，37°C的二氧化碳培养箱培养。本专利技术用于增加介孔硅纳米材料，特别是表面负电荷的介孔硅进入细胞内的效率，使介孔硅纳米材料更好发挥生物作用。文档编号A61K47/02GK102940885SQ201210486898公开日2013年2月27日 申请日期2012年11月26日 优先权日2012年11月26日专利技术者王建东, 卢光明 申请人:中国人民解放军南京军区南京总医院本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种利用阳性脂质体增加介孔硅纳米材料进入细胞效率的方法,其特征在于，包括下列步骤：用无血清培养基500微升稀释溶解阳性脂质体20微升，稀释比例为1：25,并室温下静置5分钟；用500微升无血清培养基稀释溶解0.5mg介孔硅纳米材料，室温下静置5分钟；稀释溶解后的阳性脂质体与所述稀释溶解后的介孔硅材料等量混合，室温下静置20分钟；将混合液均匀加在含1640培养基4ml的培养细胞中，轻轻混匀后，37°C的二氧化碳培养箱培养。
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：王建东，卢光明，
申请(专利权)人：中国人民解放军南京军区南京总医院，
类型：发明
国别省市：
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