本发明专利技术涉及用于预防性和/或治疗性治疗哺乳动物的甲型流感病毒诱发的疾病的多核苷酸，其中所述多核苷酸包含编码具有TRAF2和/或TRAF6结合结构域的Mx蛋白的基因。本发明专利技术还提供了转基因动物，其具有减弱的对甲型流感病毒的易感性，表达编码Mx蛋白的基因，所述Mx蛋白具有TRAF2和/或TRAF6结合结构域；条件是所述动物不属于灵长目、牛科(牛属、印度水牛、Ovis)、鳍脚目或啮齿目的分类组。
【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】
本专利技术总体上涉及突变的Mx发动蛋白(dynamin),更具体地涉及利用此类Mx发动蛋白突变体预防或治疗与病毒感染相关的疾病的组合物和方法。具体地，本专利技术涉及用于治疗甲型流感病毒诱发的疾病、编码经修饰的Mx蛋白的多核苷酸、所述经修饰的Mx蛋白以及表达编码经修饰的Mx蛋白的基因的转基因动物。背景产生了许多疫苗，并且验证了所述疫苗预防与人和动物的病毒感染相关的症状和死亡率。由于被靶向的病毒的持续遗传进化，这些疫苗中的一些疫苗必须经常更新，特别是目的在于预防可归因于甲型流感病毒的症状和死亡率的那些疫苗。用于制备更新的疫苗的 病毒株系的这样的反复更新阻碍了大量疫苗的及时产生。此外，此类反复更新和确保此类疫苗的快速和广泛分配及施用所必需的供应链的生产成本通常阻止了猪、鸡、火鸡或马工业及时充足地接种所有被靶向的动物。在人中，仅金刚烷(金刚烷胺，金刚乙胺)和神经氨酸酶的抑制剂(奥司他韦，扎那米韦)可用于治疗与甲型流感病毒相关的疾病。此类分子的大规模使用迅速导致抗性病毒株的出现。例如，大部分循环甲型流感病毒株目前抗金刚烷并且抗神经氨酸酶的抑制剂的H5N1株的流行持续增加。因此，能够缓和人的甲型流感病毒相关疾病的化学治疗分子是非常缺乏的。在人中，提出了使用单克隆抗体来抵抗病毒疾病的。然而，由于此类分子包含非人区段，因此它们通常引起过敏反应。此外，由于许多病毒被赋予用于逃避新型治疗分子的非常有效的遗传进化能力，因此预期的来自开发新型抗病毒单克隆抗体的方法的成本/效益比明显阻碍了新型分子的发现。在人中，基因疗法是抵抗疾病的替代性方法，如过去对于遗传疾病、癌症或病毒疾病所显示的方法(参见PCT公布号W091/02805、EP O 415731和WO 90/07936)。由于基因疗法中使用的载体仅转化一部分可用于病毒扩增的宿主细胞，因此可靠的抗病毒转基因必须编码非常强的抗病毒蛋白以给基因疗法提供降低被靶向的疾病的严重度的任何机会。此类可靠的转基因仍未存在。在动物中，经济破坏性或兽传人兽互通性病毒性接触传染病的传播的预防包括大规模屠杀。今天，该卫生政策面临重大经济和伦理考量。在动物中，理论上仍然可能使用遗传抗性亲代(genitor)来在后代之间散播抗性性状并且，因此，逐渐增强农场动物群体的流行病抗性。然而，该方法基于对编码抗被靶向的疾病的先天抗性的基因座上的等位基因变异的先前鉴定。就成本/效益比而言这样的项目是不现实的，特别地因为许多疾病抗性性状是多基因的。在1962年，Lindenmann小组偶然发现近交小鼠品系A2G自发地抗利用对于其它品系是系统性致命的甲型流感病毒的实验感染。新型抗性性状被记录为Mx，代表粘病毒抗性(myxovirus resistance)。数年后发现，Mx+性状在干扰素α / β (IFN α / β )治疗后与约78kDa的蛋白质(此后命名为Mx蛋白)的表达共分离。自那以来，分子遗传学研究导致首先在小鼠中，然后在人中以及随后在所有研究的脊椎动物物种中鉴定了引起Mx蛋白表达的基因。根据序列同源性，已显示脊椎动物Mx蛋白为大的发动蛋白样GTP酶。发动蛋白组成了在许多细胞过程(其中有迁移、膜重塑、胞吞、小泡运输以及细胞和细胞器的分裂)中起着至关重要的作用的高分子量GTP酶的亚家族。在发动蛋白分子中，有一些不存在典型的普列克底物蛋白(pleckstrin)和富含脯氨酸/精氨酸的结构域并且其表达受I型干扰素控制；此类蛋白称为“Mx”发动蛋白。每一个脊椎动物物种具有2个或3个Mx基因，已在体外显示其少数等位基因形式编码被赋予抗病毒活性(最常见地是抗甲型流感病毒)的Mx发动蛋白。其它研究显示Mx发动蛋白的一些形式被赋予抗病毒性质以及靶向不同的病毒(取决于研究的Mx同种型)。定向诱变研究后来显示Mx发动蛋白的C末端GTP酶效应子结构域(GED)支持抗病毒活性和抗病毒谱。为了努力研究抗病毒活性，已获得牛(Bos taUrUS)Mxl发动蛋白序列。利用表达牛Mxl基因的培养的细胞进行的体外测试显示人和牛副流感_3、人和牛呼吸道合胞体、牛 病毒性腹泻/粘膜疾病、仙台、麻疹和脑心肌炎病毒不被牛Mxl抑制，而水泡性口炎和狂犬病病毒被其抑制。与其它Mx发动蛋白相比较，特定的抗病毒谱因而与牛Mxl发动蛋白相关，但由于现有技术已显示其它Mx发动蛋白展示特定的抗病毒谱，这并非是意料之外的。除由小鼠Mxl+等位基因编码的是个明显的例外外，现有技术缺乏能够在体内抑制甲型流感病毒感染相关疾病的Mx发动蛋白。由于甲型流感病毒在人、猪和家禽群体中持续地循环，所以人、猪或鸡Mx蛋白不分别保护人、猪和鸡免受严重的、甚至致命的流感疾病的侵害并不令人惊奇。因此将人、猪或鸡抗病毒Mxl发动蛋白用于基因疗法并不可行。类似地，选择被赋予最佳等位基因(如体外测定的)的亲代来逐渐产生更具抗性的鸡或猪群体也不可行。相反地，将小鼠Mxl发动蛋白用于基因疗法或用于产生转基因抗流感食用动物(food animal)在理论上是可行的。然而，由于小鼠Mxl发动蛋白在系统发育上远离人Mx蛋白，因此免疫病理学(过敏)问题可能因基于小鼠Mxl的基因疗法或因含小鼠Mxl的食品的摄入而产生。此外，将鼠源化(murinized)鸡肉、鼠源化火鸡肉或鼠源化猪肉摆上市场无疑将引起消费者的反感。因此，高度期望将具有增强的抗病毒活性的突变型人Mx发动蛋白用于基因治疗组合物。类似地，高度期望产生具有等于或优于由小鼠Mxl在体内产生的抗病毒活性的突变型食用动物Mx发动蛋白，以产生转基因抗流感食用动物。迄今已知的所有抗流感Mx发动蛋白的抗病毒功能都是通过它们的C末端GTP酶效应子结构域(GED)产生的。TNF-受体相关因子(TRAF)形成许多衔接分子(adapter molecule),在TNF-、IL-I β , TLR和RANK受体通过它们各自的同源配体衔接后，所述衔接分子首先与激活的受体接触，用作激酶和被招募至激活的受体的其它效应蛋白的停靠分子。TRAF随后调节受体-配体复合物的亚细胞再定位并且通过控制途径中的关键蛋白的降解来调节应答的性质和程度。通过这样的作用，TRAF控制蛋白激酶级联以及NF-kB和AP-I家族的转录因子的激活，从而调谐参与增殖、分化和细胞凋亡的众多基因的转录。现有技术缺乏抑制病毒增殖和/或消除或减弱病毒疾病相关的细胞因子应答和器官功能障碍的方法。因此本专利技术的目的是提供动物，优选转基因动物，所述动物具有减弱的对甲型流感病毒的易感性。目的还在于提供用于预防性和/或治疗性治疗甲型流感病毒诱发的疾病的药物。此外，本专利技术的目的因而也在于提供用于预防性和/或治疗性治疗甲型流感病毒，特别是用于人用途的药物。专利技术概述在根据本专利技术的研究中，令人惊讶地已发现在体外，与其它Mx发动蛋白相比较，牛Mxl发动蛋白展示出曾经鉴定的最强的抗甲型流感病毒活性。此外，由该特定Mx发动蛋白产生的特别强的抗甲型流感病毒活性在体内得到了确认，从而提供了用于预防或治疗甲型流感病毒相关疾病的最可靠的分子。如根据现有技术所预期的，有人假设该前所未有的抗病毒活性由蛋白质的C末端区段、所谓的GED支持。然而，本专利技术人惊讶地发现，用被赋予弱抗甲型流感病毒活性的任何Mx发动蛋白的GED置换牛Mxl中的G本文档来自技高网...
【技术保护点】
【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】
【专利技术属性】
技术研发人员：D·德斯梅克特，A·M·L·G·考纳特，
申请(专利权)人：列日大学，
类型：
国别省市：
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