一株保藏编号为CGMCC?No.4824的青霉属分枝青霉组（P.ramigena，YNCA0361)菌株，以及用该菌株在发酵罐中发酵转化黄体酮制备睾酮的方法。培养基选用PDA和察氏培养基。黄体酮的投料量比例为0.1～2％(w/v)；发酵温度25～40℃，通气比0.1～10(v/v)，搅拌速率120～500r/min，发酵时间100h～200h。产物提取过程中添加1～5％(w/v)的Amberlite?XAD～16大孔吸附树脂，25～40℃处理2h。本发明专利技术为规模化发酵转化黄体酮制备睾酮提供一株性状稳定、培养基简单、生长良好的青霉菌菌株、实用简便的发酵罐发酵及分离提取工艺。用该菌株及该工艺来规模制备睾酮，生产成本低、杂质少，产物得率高。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于生物、医药
，涉及一种青霉属分枝青霉组菌株发酵转化黄体酮制备睾酮的工艺。特别提供一株人工驯化的青霉属分枝青霉组(Penicillium ramigena,YNCA0361，菌株保藏编号为CGMCC No. 4824)菌株，以及用该菌株在发酵罐中发酵转化黄体酮制备睾酮的工艺。
技术介绍
睾酮(17a-羟基雄留-4-烯-3-酮)又称睾丸素、睾丸酮或睾留酮，是一种雄性激素药物，它对健康及有着重要的影响，具有促进男性性器官的形成、发育、成熟，并对抗雌激素，抑制子宫内膜生长及卵巢垂体功能。促进蛋白质合成代谢、兴奋骨髓造血功能，刺激血细胞的生成。临床用于男性性腺机能减退症、无睾症及隐睾征；妇科疾病，如月经过多、子宫 肌瘤、子宫内膜异位症、老年骨质疏松及小儿再生障碍性贫血。还可用其作为制备丙酸酯和苯甲酸酯衍生物的中间体。国内外对睾酮及其衍生物应用已有大量研究，其应用范围日益扩大。在留体药物生产中微生物转化技术一直占据重要地位，美国和日本从二十世纪八十年代开始以植物留醇为原料微生物转化生产雄留烯二酮(4AD)，我国天药股份现已掌握这一生产技术，再以此合成留体药物，从而解决了植物资源有限的原料瓶颈，降低了制造成本，并大大减少了环境污染。睾酮的生产方法有两种一是以薯芋皂甙为原料经过十二步反应得到睾酮；其二是以4AD为原料，经过四步反应得到睾酮。上述方法需要大量的有机溶剂和化工原料，反应复杂，环境污染大，且有的反应要求在无水条件和低温冷冻条件下进行，总收率较低。国内外也进行了微生物转化的研究，目前报到的主要有两种方法一是雄留烯二酮为底物微生物氢化转化为睾酮，该方法在国外已实现产业化；其二是以植物留醇为底物微生物直接转化为睾酮，该方法尚处于实验室阶段。本专利技术涉及以价值比雄留烯二酮(4AD)低廉的黄体酮通过青霉属分枝青霉组菌株转化制备睾酮的研究，国内外尚未见文献报道。
技术实现思路
为了简便、高效、规模化发酵制备睾酮，本专利技术提供的转化微生物是一株由中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心保藏的青霉属分枝青霉组(Penicilliumramigena, YNCA0361)菌株，菌株保藏编号为CGMCC No. 4824，保藏日期为2011年5月2日。在本专利技术青霉菌发酵黄体酮制备睾酮的方法中，青霉菌(Penicillium ramigena,YNCA0361)菌株经过长时间的驯化培养后，可在PDA培养基、察氏培养基、虎红培养基上生长。在本专利技术青霉菌(Penicillium ramigena, YNCA0361)发酵转化黄体酮制备睾酮的方法中，黄体酮的投料量比例为O. I 2% (w/v);发酵温度25 40°C，通气比O. I 10(v/V)，搅拌速率120 500r/min，发酵时间IOOh 200h。产物提取过程中添加I 5% (w/V)的Amberlite XAD 16大孔吸附树脂，25 40°C处理2h。在本专利技术青霉菌(Penicillium ramigena, YNCA0361)发酵转化黄体酮制备睾酮的方法中，可以通过全自动发酵罐发酵黄体酮制备睾酮，经过柱层析分离后得到睾酮的单体。权利要求1.一株由中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心保藏的青霉属分枝青霉组(P. ramigena,YNCA0361)菌株,菌株保藏编号为CGMCC No. 4824，保藏日期为2011年5月6曰。2.一种黄体酮生物转化制备睾酮，式I的方法3.一种用权利要求I所述菌株发酵转化黄体酮制备睾酮的方法。其特征在于 (1)所述培养基为PDA或察氏液体培养基。(2)培养基中黄体酮投料量比例为O.I 2% (w/v);发酵温度18 50°C，0. I 35%(w/v)氨水动态调节pH = 2 8,通气比O. I 10(v/v),搅拌速率10 900r/min,发酵时间 20h 240h。 (3)在产物提取过程中添加O.I 30% (w/v)的Amberlite XAD-16或DlOl大孔吸附树脂，18-50°C处理Ih 10h。发酵液经过固液分离所得菌丝体和大孔吸附树脂在乙醇中超声提取Ih 24h。 (4)青霉属分枝青霉组(P.ramigena, YNCAO361)菌株发酵黄体酮,得到睾酮。全文摘要一株保藏编号为CGMCC No.4824的青霉属分枝青霉组(P.ramigena，YNCA0361)菌株，以及用该菌株在发酵罐中发酵转化黄体酮制备睾酮的方法。培养基选用PDA和察氏培养基。黄体酮的投料量比例为0.1～2％(w/v)；发酵温度25～40℃，通气比0.1～10(v/v)，搅拌速率120～500r/min，发酵时间100h～200h。产物提取过程中添加1～5％(w/v)的Amberlite XAD～16大孔吸附树脂，25～40℃处理2h。本专利技术为规模化发酵转化黄体酮制备睾酮提供一株性状稳定、培养基简单、生长良好的青霉菌菌株、实用简便的发酵罐发酵及分离提取工艺。用该菌株及该工艺来规模制备睾酮，生产成本低、杂质少，产物得率高。文档编号C12R1/80GK102876583SQ20121004182公开日2013年1月16日 申请日期2012年2月23日 优先权日2012年2月23日专利技术者杨海英, 杜刚, 田孟华, 李干鹏, 袁明龙 申请人:杨海英本文档来自技高网...
【技术保护点】
一株由中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心保藏的青霉属分枝青霉组(P.ramigena，YNCA0361)菌株，菌株保藏编号为CGMCC？No.4824，保藏日期为2011年5月6日。
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：杨海英，杜刚，田孟华，李干鹏，袁明龙，
申请(专利权)人：杨海英，
类型：发明
国别省市：
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