一种制备波戈甾醇的方法技术

本发明专利技术公开了一种制备波戈甾醇的方法。该方法是采用甲醇浸泡、有机溶剂萃取酶解、高速逆流色谱分离以及重结晶等方法得到纯度大于95%的波戈甾醇。该方法不经柱层析、合成等操作，具有工艺简单、效率高、分离环境缓和、产品纯度高等特点，适合工业化生产，为波戈斑鸠菊中有效成分的提取利用奠定了坚实的基础。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于中药化学领域，具体涉及一种制备波戈留醇的方法。
技术介绍
波戈甾醇(Pogosterol) CAS登录号为149155-26-0，分子式为C29H46O6,分子量为490. 68,是一种留体阜苷元，mp. 154_157°C。主要存在于菊科(Compositae)植物波戈斑鸠菊Vernonia pogosperma的叶中,现代药理研究表明,波戈留醇具有一定的细胞毒活性,体外对L-1210细胞呈弱的细胞毒作用，目前对波戈甾醇的研究较少，因此需要一种高效、环保、简单、适合工业化生产的制备方法，为波戈斑鸠菊中有效成分以及波戈留醇的进一步研究提供丰富的原料
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供一种制备波戈留醇的方法，该方法工艺简单、高效、环保、提率高。为了实现上述目的，本专利技术的技术方案是 (1)将波戈斑鸠菊干燥叶粉碎成粗粉，加入6-15倍药材重量的质量百分比浓度为80-100%的甲醇水溶液,室温浸泡提取5-10h,过滤,将滤洛重复上述操作2-3次,合并滤液，减压浓缩成浸膏，得甲醇提取物； (2)将上述步骤得到的甲醇提取物加少量水分散，用二氯甲烷溶液萃取，分取水层和二氯甲烷层，将水层用水饱和正丁醇进行萃取，分取上层，即正丁醇层，减压回收正丁醇得总甾体皂苷； (3)将总留体皂苷加适量水共沸，冷却至45-50°C，调节pH4.5-5. 5，加入生物酶保温酶解1-4小时，酶解液减压浓缩、离心得粗品； (4)将上述粗品用高速逆流色谱仪制备分离纯化，得到波戈留醇粗晶；(5)将上述粗晶用二氯甲烷-甲醇(1:3，V/V)重结晶，过滤，干燥得到波戈甾醇纯品。步骤(3)所述的生物酶可选蜗牛酶、纤维素酶、果胶酶、淀粉酶或半纤维素酶中的一种或几种重混合，用量为原料的1-3. 5%。。步骤(4)所述高速逆流色谱制备条件为溶剂系统选用氯仿-甲醇-水，体积比为1:4:2,以上相为固定相，下相为流动相，转速为850-1000r/min，流动相流速为2_4ml/min。本专利技术的有益效果是在常温下进行分离和分解，不引入酸碱，目标化合物不发生结构改变，最大程度保持了化合物的稳定性。采用采用高速逆流色谱分离，产品无损失，无废弃物产生，再进行重结晶操作可得到高纯度波戈留醇，工艺简便、得率高。具体实施例方式 实施例I: 取波戈斑鸠菊干燥叶经粉碎机粉碎，称取粉末10kg，加入12倍药材重量的85%甲醇溶液中室温浸泡提取8h，过滤，将滤渣重复上述操作，再提取2次，合并滤液，减压浓缩成浸膏，得甲醇提取物；取浸膏加入2倍体积量的水分散，然后用与水等体积量的二氯甲烷萃取2次，合并二氯甲烷层，减压回收二氯甲烷(用于下次萃取使用)，将水层继续用水饱和正丁醇萃取3次，分取上层即正丁醇层，合并正丁醇层，减压回收正丁醇(用于下次萃取使用)得总甾体皂苷；将总甾体皂苷加适量水共沸30min，冷却至45°C，盐酸调节pH至4. 5，加入18g蜗牛酶保温酶解2小时，酶解液减压浓缩，离心得到粗品。取氯仿、甲醇、水按1:4:2比例混合，取上相注入色谱柱作固定相，开启高速逆流色谱仪，调整转速900r/min，注入流动相，平衡后，调整流速2. 5ml/min,甲醇溶解粗品，进样，通过检测仪定时收集流分，流分回收试剂干燥，连续制备，得到波戈甾醇粗晶，再用二氯甲烷-甲醇(1:3，V/V)重结晶，滤出结晶，干燥得到657mg波戈留醇，经HPLC检测，其含量为98. 8%。实施例2 取波戈斑鸠菊干燥叶经粉碎机粉碎，称取粉末10kg，加入10倍药材重量的100%甲醇溶液中室温浸泡提取5h，过滤，将滤渣重复上述操作，再提取I次，合并滤液，减压浓缩成浸膏，得甲醇提取物；取浸膏加入2. 5倍体积量的水分散，然后用与水等体积量的二氯甲烷萃 取2次，合并二氯甲烷层，减压回收二氯甲烷(用于下次萃取使用)，将水层继续用水饱和正丁醇萃取3次，分取上层即正丁醇层，合并正丁醇层，减压回收正丁醇(用于下次萃取使用)得总甾体皂苷；将总甾体皂苷加适量水共沸30min，冷却至50°C，盐酸调节pH至4. 8，加入IOg果胶酶和半纤维素酶复合酶(按重量比2:1混合)保温酶解I小时，酶解液减压浓缩，离心得到粗品。取氯仿、甲醇、水按1:4:2比例混合，取上相注入色谱柱作固定相，开启高速逆流色谱仪，调整转速950r/min，注入流动相，平衡后，调整流速2. 5ml/min,甲醇溶解粗品，进样，通过检测仪定时收集流分，流分回收试剂干燥，连续制备，得到波戈留醇粗晶，再用二氯甲烷-甲醇(1: 3，V/V)重结晶，滤出结晶，干燥得到668mg波戈甾醇，经HPLC检测，其含量为98. 5%ο实施例3 取波戈斑鸠菊干燥叶经粉碎机粉碎，称取粉末10kg，加入6倍药材重量的90%甲醇溶液中室温浸泡提取10h，过滤，将滤渣重复上述操作，再提取2次，合并滤液，减压浓缩成浸膏，得甲醇提取物；取浸膏加入I. 5倍体积量的水分散，然后用与水等体积量的二氯甲烷萃取2次，合并二氯甲烷层，减压回收二氯甲烷(用于下次萃取使用)，将水层继续用水饱和正丁醇萃取3次，分取上层即正丁醇层，合并正丁醇层，减压回收正丁醇(用于下次萃取使用)得总甾体皂苷；将总甾体皂苷加适量水共沸30min，冷却至46°C，盐酸调节pH至5. O,加入22g淀粉酶和蜗牛酶复合酶(按重量比2:1混合)保温酶解4小时，酶解液减压浓缩，离心得到粗品。取氯仿、甲醇、水按1:4:2比例混合，取上相注入色谱柱作固定相，开启高速逆流色谱仪，调整转速850r/min，注入流动相，平衡后，调整流速4. Oml/min,甲醇溶解粗品，进样，通过检测仪定时收集流分，流分回收试剂干燥，连续制备，得到波戈留醇粗晶，再用二氯甲烷-甲醇(1:3，V/V)重结晶，滤出结晶，干燥得到670mg波戈甾醇，经HPLC检测，其含量为98. 2%。实施例4: 取波戈斑鸠菊干燥叶经粉碎机粉碎，称取粉末10kg，加入8倍药材重量的80%甲醇溶液中室温浸泡提取6h，过滤，将滤渣重复上述操作，再提取2次，合并滤液，减压浓缩成浸膏，得甲醇提取物；取浸膏加入2倍体积量的水分散，然后用与水等体积量的二氯甲烷萃取2次，合并二氯甲烷层，减压回收二氯甲烷(用于下次萃取使用)，将水层继续用水饱和正丁醇萃取3次，分取上层即正丁醇层，合并正丁醇层，减压回收正丁醇(用于下次萃取使用)得总甾体皂苷；将总甾体皂苷加适量水共沸30min，冷却至50°C，盐酸调节pH至5. 2，加入35g果胶酶保温酶解2. 5小时，酶解液减压浓缩，离心得到粗品。取氯仿、甲醇、水按1:4:2比例混合，取上相注入色谱柱作固定相，开启高速逆流色谱仪，调整转速lOOOr/min，注入流动相，平衡后，调整流速2. Oml/min，甲醇溶解粗品，进样，通过检测仪定时收集流分，流分回收试剂干燥，连续制备，得到波戈甾醇粗晶，再用二氯甲烷-甲醇(1:3，V/V)重结晶，滤出结晶，干燥得到643mg波戈留醇，经HPLC检测，其含量为99. 2%。 实施例5: 取波戈斑鸠菊干燥叶经粉碎机粉碎，称取粉末10kg，加入15倍药材重量的95%甲醇溶液中室温浸泡提取8h，过滤，将滤渣重复上述操作，再提取I次，合并滤液，减压浓缩成浸膏，得甲醇提取物；取浸膏加入I. 5倍体积量的本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种制备波戈甾醇的方法，其特征在于包括以下步骤：（1）将波戈斑鸠菊干燥叶粉碎成粗粉，加入6？15倍药材重量的质量百分比浓度为80？100%的甲醇水溶液，室温浸泡提取5？10h，过滤，将滤渣重复上述操作2？3次，合并滤液，减压浓缩成浸膏，得甲醇提取物；（2）将上述步骤得到的甲醇提取物加少量水分散，用二氯甲烷溶液萃取，分取水层和二氯甲烷层，将水层用水饱和正丁醇进行萃取，分取上层，即正丁醇层，减压回收正丁醇得总甾体皂苷；（3）将总甾体皂苷加适量水共沸，冷却至45？50℃，调节pH4.5？5.5，加入生物酶保温酶解1？4小时，酶解液减压浓缩、离心得粗品；（4）将上述粗品用高速逆流色谱仪制备分离纯化，得到波戈甾醇粗晶；（5）将上述粗晶用二氯甲烷？甲醇（1:3，V/V）重结晶，过滤，干燥得到波戈甾醇纯品。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：苏刘花，
申请(专利权)人：南京泽朗农业发展有限公司，
类型：发明
国别省市：