非对称发夹探针及其应用制造技术

本发明专利技术涉及“非对称发夹探针及其应用”，属于生物检测领域。非对称发夹探针由靶核酸特异序列和一回文序列组成，在无靶序列存在的情况下，处于亚稳定的发夹结构，而一旦加入待测靶序列，即触发无需酶参与的链式聚合反应，非对称发夹探针的靶核酸特异序列部分与对应靶核酸位点结合，其余探针则两两复性成两端均为回文序列的部分双链探针，在分子识别杂交的同时大幅度地增强检测信号，从而实现了待测靶序列的快速检测。本发明专利技术的非对称发夹探针链反应技术，巧妙地结合了分子杂交的高特异性和链式聚合的高效性，通过DNA聚合释放的自由能驱动分子级联放大，其反应体系简单，检测效率高，且有效地避免了PCR等传统技术存在的实验室污染问题。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及一种生物反应技术，特别是涉及一种非对称发夹探针链反应技术。
技术介绍
核酸分子固相杂交法、DNA测序法、毛细管电泳分析、基因芯片技术等检测方法的先后建立，将细菌分子检测方法提高到一个崭新的阶段，但是这些检测方法大多需要特殊的大型仪器，技术难度大，难以在临床中普及应用。此外，大多需要预先对样本进行PCR扩增，严重干扰了致病菌的定量检测，同时PCR技术存在的实验室污染问题也极大地影响了这些检测方法的准确性。DNA探针技术又称分子杂交技术，是利用DNA分子的变性、复性以及碱基互补配对的高度精确性，对某一特异性DNA序列进行探查的新技术。DNA探针是利用同位素、生物素 等标记的特定DNA片断，该片断可大至寄生虫基因组DNA，小至20个碱基。当DNA探针与待测的非标记单链DNA (或RNA)按碱基顺序互补结合时，以氢键将2条单链连接而形成标记DNA-DNA (或标记DNA-RNA)的双链杂交分子。将未配对结合的探针洗去稀后用检测系统(放射自显影或酶检测等)检测杂交反应结果。由于DNA分子碱基互补的精确性，单连DNA探针仅与样品中变性处理的DNA单链出现配对杂交，由此决定了探针的本文档来自技高网...

【技术保护点】
非对称发夹探针1，其特征在于：包括回文序列、两条茎臂和连接于一条茎臂上的粘性末端，所述两条茎臂连接于回文序列的两端且具有互补的核酸序列，所述回文序列为无关序列，所述茎臂与其连接的粘性末端具有靶序列的互补核酸序列。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：夏涵，梁盼盼，黄庆，府伟灵，
申请(专利权)人：中国人民解放军第三军医大学第一附属医院，
类型：发明
国别省市：