一种利用蛋白A的高密度包被磁珠纯化抗体的方法技术

本发明专利技术公开了一种利用蛋白A的高密度包被磁珠纯化抗体的方法，该方法包括以下步骤：将磁珠和含有抗体的表达产物加入到反应容器中，在反应容器外部或内部施加磁场，然后转移出上清液；将洗涤缓冲液加入反应容器中，撤去磁场；重复洗涤磁珠2~4次；然后加入洗脱缓冲液，撤去磁场，室温下孵育5~15min；施加磁场使磁珠贴壁，转移出溶液，调节溶液的pH值至中性，得到纯化后的抗体。本发明专利技术使用磁珠亲和分离技术进行抗体纯化，比传统的抗体亲和层析技术具有更快的抗体捕获速度；此外，纯化操作无需复杂的层析系统，样品无需进行澄清处理，可以直接对粘度较大的样品进行纯化操作；再者，使用了独特的蛋白A包被磁珠，抗体结合效率大幅提高，蛋白A配基的脱落率达到极低水平。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及一种抗体纯化的方法，具体涉及一种利用蛋白A的高密度包被磁珠纯化抗体的方法。
技术介绍
单克隆抗体是B淋巴细胞和骨髓瘤细胞杂交形成的杂交瘤细胞产生的，其重链和轻链所形成的结构域可以识别和结合特异抗原。1997年FDA批准第一个治疗淋巴癌的嵌合单克隆抗体药物Rituxan Anti-⑶20抗体上市，至2007年，FDA已批准了 20多种治疗性单克隆抗体药物，约一半用于治疗癌症，多个已成为年销售额超十亿美元的“炸弹药物”。全球单克隆抗体药物的市场增长十分迅猛，约有200多种单抗处于临床实验阶段，占整个临床生物技术药品总数的三分之一多，其中四分之一在临床三期或等候批准。单抗药物已成为全球生物制药领域发展的主旋律。·单抗药物的迅猛发展对抗体纯化工业提出了新的挑战。目前，主流的抗体纯化生产主要包括以下步骤1、发酵液澄清；2、抗体捕获；3、抗体精细纯化；4、抗体浓缩洗滤；5、抗体过滤除菌/制剂。在抗体捕获阶段，主要应用蛋白A亲和层析技术从发酵上清液中提取抗体。蛋白A是一种从金黄葡萄球菌细胞膜上提取的蛋白，具有5个IgG结合结构域，能特异性地与抗体Fe端结合。现阶段最常用的蛋白A亲和本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种利用蛋白A的高密度包被磁珠纯化抗体的方法，其特征在于包括以下步骤：（1）将蛋白A的高密度包被磁珠、含有抗体的表达产物加入到反应容器中，搅匀，室温下孵育5~15min；（2）在反应容器外部或内部施加磁场；（3）从反应容器中转移出上清液；（4）将洗涤缓冲液加入反应容器中，撤去磁场；重复步骤（2）~（3）一次；（5）重复步骤（4）洗涤磁珠2~4次；（6）将洗脱缓冲液加入反应容器中，撤去磁场，室温下孵育5~15min；（7）施加磁场使磁珠贴壁，转移反应容器中的溶液，调节溶液的pH值至中性，得到纯化后的抗体；步骤（4）所述的洗涤缓冲液含有0.01~0.5M的磷酸缓冲液、1~500mM的NaCl，余量...

【技术特征摘要】
1.ー种利用蛋白A的高密度包被磁珠纯化抗体的方法，其特征在于包括以下步骤 (1)将蛋白A的高密度包被磁珠、含有抗体的表达产物加入到反应容器中，搅匀，室温下孵育5 15min ； (2)在反应容器外部或内部施加磁场； (3)从反应容器中转移出上清液； (4)将洗涤缓冲液加入反应容器中，撤去磁场；重复步骤(2) (3)一次； (5)重复步骤(4)洗涤磁珠2 4次； (6)将洗脱缓冲液加入反应容器中，撤去磁场，室温下孵育5 15min； (7)施加磁场使磁珠贴壁，转移反应容器中的溶液，调节溶液的pH值至中性，得到纯化后的抗体； 步骤(4)所述的洗涤缓冲液含有O. ΟΓΟ. 5Μ的...

【专利技术属性】
技术研发人员：任辉，张曙光，韩蓝青，乌韦·斯莱泰，安德烈亚斯·布韦特莱瑟，刘蔼珊，
申请(专利权)人：海狸纳米科技苏州有限公司，
类型：发明
国别省市：