本发明专利技术在水泡性口炎病毒的包膜蛋白G（VSV?G）基因的特定位点引入琥珀密码子TAG，利用正交的氨酰tRNA合成酶-tRNA将具有光交联性质的非天然氨基酸DiZPK定点突变到VSV?G的特定位点。在病毒与宿主细胞相互作用过程中，用365nm紫外光引发DiZPK的光交联反应，在VSV?G与相互作用蛋白间形成共价键，避免了相互作用的解离，为病毒与宿主间蛋白相互作用的研究提供有力的手段。
【技术实现步骤摘要】
专利技术涉及在水泡性口炎病毒的包膜蛋白G (VSV G)基因的特定位点引入琥珀密码子TAG，利用正交的氨酰tRNA合成酶-tRNA将具有光交联性质的非天然氨基酸DiZPK定点突变到VSV G的特定位点。在病毒与宿主细胞相互作用过程中，用365nm紫外光引发DiZPK的光交联反应，在VSV G与相互作用蛋白间形成共价键，避免了相互作用的解离，为病毒与宿主间蛋白相互作用的研究提供有力的手段。
技术介绍
水泡件口炎病毒及其腊蛋白VSVG水泡性口炎病毒(VSV)是弹状病毒科(Rhabdoviridae)的一种，其是单负链RNA包 膜病毒，基因组大小在11，000-12，000个碱基；编码5个蛋白质分子L蛋白，磷酸蛋白，M蛋白，N蛋白，G蛋白；这五种蛋白的组成VSV结构如图I所示。其中G蛋白(VSV G)被命名为III型病毒融合蛋白，在病毒表面形成钉状三聚体结构，介导病毒与宿主细胞受体的识别和宿主细胞对病毒的内吞，以及病毒包膜与宿主细胞膜的融合，在VSV的感染过程中起到首要作用。VSV G (Indiana)共有495个氨基酸残基，其中N端的446个氨基酸残基在病毒膜外，该部分也是病毒抗体的识别区域。编码VSVG基因的序列AAGTTCACCATAGTTTTTCCACACAACCAAAAAGGAAACTGGAAAAATGTTCCTTCTAATTACCATTATTGCCCGTCAAGCTCAGATTTAAATTGGCATAATGACTTAATAGGCACAGCCTTACAAGTCAAAATGCCCAAGAGTCACAAGGCTATTCAAGCAGACGGTTGGATGTGTCATGCTTCCAAATGGGTCACTACTTGTGATTTCCGCTGGTATGGACCGAAGTATATAACACATTCCATCCGATCCTTCACTCCATCTGTAGAACAATGCAAGGAAAGCATTGAACAAACGAAACAAGGAACTTGGCTGAATCCAGGCTTCCCTCCTCAAAGTTGTGGATATGCAACTGTGACGGATGCCGAAGCAGTGATTGTCCAGGTGACTCCTCACCATGTGCTGGTTGATGAATACACAGGAGAATGGGTTGATTCACAGTTCATCAACGGAAAATGCAGCAATTACATATGCCCCACTGTCCATAACTCTACAACCTGGCATTCTGACTATAAGGTCAAAGGGCTATGTGATTCTAACCTCATTTCCATGGACATCACCTTCTTCTCAGAGGACGGAGAGCTATCATCCCTGGGAAAGGAGGGCACAGGGTTCAGAAGTAACTACTTTGCTTATGAAACTGGAGGCAAGGCCTGCAAAATGCAATACTGCAAGCATTGGGGAGTCAGACTCCCATCAGGTGTCTGGTTCGAGATGGCTGATAAGGATCTCTTTGCTGCAGCCAGATTCCCTGAATGCCCAGAAGGGTCAAGTATCTCTGCTCCATCTCAGACCTCAGTGGATGTAAGTCTAATTCAGGACGTTGAGAGGATCTTGGATTATTCCCTCTGCCAAGAAACCTGGAGCAAAATCAGAGCGGGTCTTCCAATCTCTCCAGTGGATCTCAGCTATCTTGCTCCTAAAAACCCAGGAACCGGTCCTGCTTTCACCATAATCAATGGTACCCTAAAATACTTTGAGACCAGATACATCAGAGTCGATATTGCTGCTCCAATCCTCTCAAGAATGGTCGGAATGATCAGTGGAACTACCACAGAAAGGGAACTGTGGGATGACTGGGCACCATATGAAGACGTGGAAATTGGACCCAATGGAGTTCTGAGGACCAGTTCAGGATATAAGTTTCCTTTATACATGATTGGACATGGTATGTTGGACTCCGATCTTCATCTTAGCTCAAAGGCTCAGGTGTTCGAACATCCTCACATTCAAGACGCTGCTTCGCAACTTCCTGATGATGAGAGTTTATTTTTTGGTGATACTGGGCTATCCAAAAATCCAATCGAGCTTGTAGAAGGTTGGTTCAGTAGTTGGAAAAGCTCTATTGCCTCTTTTTTCTTTATCATAGGGTTAATCATTGGACTATTCTTGGTTCTCCGAGTTGGTATCCATCTTTGCATTAAATTAAAGCACACCAAGAAAAGACAGATTTATACAGACATAGAGATGAACCGACTTGGAAAGTGA (SEQ ID NO :1)VSVG蛋白氨基酸序列MKCLLYLAFLFIGVNCKFTIVFPHNQKGNWKNVPSNYHYCPSSSDLNWHNDLIGTALQVKMPKSHKAIQADGWMCHASKWVTTCDFRWYGPKYITHSIRSFTPSVEQCKESIEQTKQGTWLNPGFPPQSCGYATVTDAEAVIVQVTPHHVLVDEYTGEWVDSQFINGKCSNYICPTVHNSTTWHSDYKVKGLCDSNLISMDITFFSEDGELSSLGKEGTGFRSNYFAYETGGKACKMQYCKHWGVRLPSGVWFEMADKDLFAAARFPECPEGSSISAPSQTSVDVSLIQDVERILDYSLCQETffSKIRAGLPISPVDLSYLAPKNPGTGPAFTIINGTLKYFETRYIRVDIAAPILSRMVGMISGTTTERELffDDffAPYEDVEIGPNGVLRTSSGYKFPLYMIGHGMLDSDLHLSSKAQVFEHPHIQDAASQLPDDESLFFGDTGLSKNPIELVEGWFSSWKSSIASFFFIIGLIIGLFLVLRVGIHLCIKLKHTKKRQIYTDIEMNRLGK (SEQ ID NO :2)病毒蛋白相互作用病毒是人类面临的重大威胁之一，在病毒的进化过程中，不断产生基因的变异和 蛋白的改变，产生新的病毒亚型，从而获得在动物和人之间传播的能力，进而可能引发严重全球性传染病。人类对病毒研究和抗病毒的实验从未停止，病毒与宿主间蛋白相互作用是抗病毒药物研究在重要靶点，目前，用于病毒与宿主间蛋白相互作用的研究方法大致有cDNA文库技术；噬菌体展示技术；酵母双杂交技术；免疫沉淀和免疫共沉淀技术；病毒蛋白铺覆蛋白免疫印迹技术等。而以上的研究的蛋白间相互作用是以非共价键结合的形式存在的，例如盐键、疏水作用等，在蛋白质发挥生物功能，特别是在受体识别与信号传递过程中，蛋白质间的结合是弱结合并且动态变化的，因此用传统的蛋白间相互作用的研究方法，往往无法解决蛋白间瞬时作用和弱作用的难题，病毒与宿主间蛋白相互作用正是难题之O密码子扩展技术Lei Wang等人开发了基因密码子扩展技术，实现了在活细胞内位点特异性地将非天然氨基酸插入到蛋白质分子中。基因密码子扩展技术体系中包含三个要素氨酰本文档来自技高网...
【技术保护点】
定点突变的水泡性口炎病毒的VSV？G蛋白，其在特定位点的1个氨基酸被突变为非天然氨基酸，所述非天然氨基酸为所示的DiZPK；所述特定位点选自：示于SEQ？ID？NO：1的序列的第I37位，Q42位，Y77位，Y116位，D121位，V161位，Y174位，K242位，R249位，I339位，R342位，M346位，N20位，K172位，D185位，P362位中的1个位点。FDA00001805227400011.jpg
【技术特征摘要】
2011.06.23 CN 201110171750.11.定点突变的水泡性口炎病毒的VSVG蛋白，其在特定位点的I个氨基酸被突变为非天然氨基酸，所述非天然氨基酸为2.定点突变的VSVG蛋白，其与示于SEQ ID NO :I的序列的区别在于在SEQ ID NO I所示的序列的第N位的氨基酸被突变为Lys-diazirine，所述突变氨基酸与SEQ ID NO : I所示的序列的连接方式如下式所示3.定点突变的VSVG蛋白，其与示于SEQ ID NO :1的序列的区别在于在SEQ ID NO:I所示的序列的第N位的氨基酸被突变为DiZPK，所述突变氨基酸与SEQ ID NO :1所示的序列的连接方式如下式所示4.编码突变的VSVG蛋白的核酸分子，所述核酸分子与编码SEQID NO :I的核酸分子SEQ ID NO 2的区别在于，其中编码SEQ ID N O 1的第137位，Q42位，Y77位，Yl 16位，D121 位，V161 位，Y174 位，K242 位，R249 位，1339 位，R342 位，M346 位，N20 位，K172 位，D185位，P362位的氨基酸中的一个氨基酸的密码子被突变为TAG。5.核酸载体，其可操作地连接有权利要求5的核酸分子。6.权利要求5的核酸载体，其还可操作地连接有标签序列。7.权利要求6的核酸载体，其中的标签序列是Flag标签序列。8.宿主细胞,其中含有权利要求5- 7中任一项的核酸载体。9.权利要求8的宿主细胞，其中还含有表达甲烷球菌的tRNA(tRNAPyl)和吡咯赖氨酰-tRNA合成酶(tRNAPyl)的质粒。10.权利要求8或9的宿主细胞，其为真核...
【专利技术属性】
技术研发人员：周德敏，郑永祥，赵传科，张传领，俞飞，肖苏龙，张礼和，
申请(专利权)人：北京大学，
类型：发明
国别省市：
还没有人留言评论。发表了对其他浏览者有用的留言会获得科技券。