多重样品中的甾族化合物的质谱法制造技术

本发明专利技术涉及通过质谱法对甾族化合物的定量测量。在具体方面，本发明专利技术涉及通过质谱法对来自多个样品的甾族化合物的定量测量方法。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】多重样品中的甾族化合物的质谱法专利
本专利技术涉及通过质谱法的甾族化合物的定量测量。在具体方面，本专利技术涉及通过质谱法的多个样品的甾族化合物的定量测量的方法。专利技术背景甾族化合物是任何为数众多的天然存在的或合成的脂溶性有机化合物，该化合物具有作为基础的以四个环排列的17个碳原子，并包括甾醇和胆汁酸、肾上腺和性激素、某些天然药物如洋地黄化合物以及某些维生素和相关的化合物(如维生素D、维生素D类似物和维生素D代谢物)。许多甾族化合物是生物学上重要的。例如，维生素D是在钙(Ca2+)稳态的正调节中具有重要生理作用的必需营养素。维生素D可通过暴露于日光而在皮肤中从头形成或它可从饮食吸收。存在两种形式维生素D：维生素D2(麦角钙化醇)和维生素D3(胆钙化醇)。维生素D3是由动物从头合成的形式。它还是加入到在美国生产的乳制品和某些食品中的常见补充物。饮食和内在合成的维生素D3必须经历代谢激活以产生生物活性的代谢物。在人类中，维生素D3激活的最初步骤主要发生在肝中并包括羟基化作用以形成中间体代谢物25-羟基胆钙化醇(骨化二醇；25OHD3)。骨化二醇是循环中维生素D3的主要形式。然后循环的25OHD3由肾转化，形成1,25-二羟基维生素D3(骨化三醇；1,25(OH)2D3)，其通常被认为是具有最高生物活性的维生素D3的代谢物。维生素D2来自真菌和植物来源。许多非处方膳食补充物（dietarysupplements）含有麦角钙化醇(维生素D2)而不是胆钙化醇(维生素D3)。麦角骨化醇（Drisdol）——在美国可获得的唯一的维生素D的高效处方形式——是用麦角钙化醇配制的。维生素D2在人类中经历与维生素D3相似的代谢激活途径，形成代谢物25OHD2和1,25(OH)2D2。维生素D2和维生素D3已长期被假定在人类中在生物学上相等，然而最近的报道提出这两种形式的维生素D在生物活性和生物利用率上可存在差异(Armaset.al.,(2004)J.Clin.Endocrinol.Metab.89:5387-5391)。维生素D——无活性维生素D先驱体——的测量在临床情况中不常发生。相反，25-羟基维生素D3、25-羟基维生素D2和总25-羟基维生素D(“25OHD”)的血清水平是维生素D营养状况和某些维生素D类似物的效力的有用指示物。25OHD的测量通常用于钙代谢病症的诊断和处理。在这方面，低水平25OHD指示与疾病如低钙血症、低磷血症、继发性甲状旁腺功能亢进症、升高的碱性磷酸酶、成人中骨软化症和儿童中佝偻病有关的维生素D缺乏。在疑似维生素D中毒的患者中，升高水平的25OHD使该病症区别于引起高钙血症的其它病症。1,25(OH)2D的测量还用于临床情况。某些疾病状态可通过循环水平的1,25(OH)2D反映，例如肾疾病和肾功能衰竭常常导致低水平的1,25(OH)2D。升高水平的1,25(OH)2D可指示过量的甲状旁腺素或可指示某些疾病如结节病或某些类型的淋巴瘤。维生素D代谢物的检测已通过用对25OHD2和25OHD3共同特异的抗体的放射免疫测定完成。因为目前的基于免疫学的测定不分别分辨25OHD2和25OHD3，所以不求助于其它试验，维生素D的任何营养缺乏的来源不能被确定。已发表了公开利用质谱法检测特定维生素D代谢物的方法的报道。在一些报道中，维生素D代谢物在质谱法之前被衍生，但是在其它的报道中，它们不是这样。例如Holmquist,etal.2007年12月28日提交的美国专利申请系列号11/946765；YeungB,etal.,JChromatogr.1993,645(1):115-23；HigashiT,etal.,Steroids.2000,65(5):281-94；HigashiT,etal.,BiolPharmBull.2001,24(7):738-43；HigashiT,etal.,JPharmBiomedAnal.2002,29(5):947-55；HigashiT,etal.,Anal.BioanalChem,2008,391:229-38；和Aronov,etal.,AnalBioanalChem,2008,391:1917-30公开通过在质谱法之前衍生代谢物而检测各种维生素D代谢物的方法。检测未衍生的维生素D代谢物的方法在Clarke,etal.,2005年4月6日提交的美国专利申请系列号11/101,166和2006年3月21日提交的11/386,215中，和Singh,etal.,2004年10月24日提交的美国专利申请系列号10/977,121中被报道。还已公开了报道，其公开用Cookson型试剂，特别是4-苯基-1,2,4-三唑啉-3,5-二酮(PTAD)和4-[2-(6,7-二甲氧基-4-甲基-3-氧代-3,4-二氢喹喔啉基(dihydroquinoxalyl))乙基]-1,2,4-三唑啉-3,5-二酮(DMEQ-TAD)进行的维生素D3的衍生。参见Aberhart,J,etal.,J.Org.Chem.1976,41(12):2098-2102和Kamao,M,etal.,JChromatogr.B2007,859:192-200。专利技术概述本专利技术提供用单个质谱测定来测定多个试验样品中每个试验样品的甾族化合物的量的方法。该方法包括不同地处理每个试验样品以形成多个处理的样品，其中由于处理，每个处理的样品中的甾族化合物可通过质谱法区别于其它处理的样品中的甾族化合物；合并处理的样品以形成多重样品；使多重样品在适于产生一种或多种通过质谱法可检测的离子的条件下经历电离源，其中一种或多种从来自每个处理的样品的甾族化合物产生的离子不同于一种或多种从来自其它处理的样品的甾族化合物产生的离子；通过质谱法检测一种或多种来自每个处理的样品的甾族化合物的离子的量；和使一种或多种来自每个处理的样品的甾族化合物的离子的量与每个试验样品中甾族化合物的量相关联。在一些实施方式中，处理试验样品包括使每个试验样品在适于产生衍生的甾族化合物的条件下经历不同的衍生剂。在一些实施方式中，一个试验样品可被处理，无需使该样品经受衍生剂。在一些实施方式中，在多个试验样品的处理中使用的不同的衍生剂是各自的同位素变体。在一些实施方式中，不同的衍生剂是Cookson型衍生剂；如选自4-苯基-1,2,4-三唑啉-3,5-二酮(PTAD)、4-[2-(6,7-二甲氧基-4-甲基-3-氧代-3,4-二氢喹喔啉基)乙基]-1,2,4-三唑啉-3,5-二酮(DMEQTAD)、4-(4-硝基苯基)-1,2,4-三唑啉-3,5-二酮(NPTAD)、4-二茂铁基甲基-1,2,4-三唑啉-3,5-二酮(FMTAD)和其同位素变体的Cookson型衍生剂。在一个相关的实施方式中，Cookson型衍生剂是4-苯基-1,2,4-三唑啉-3,5-二酮(PTAD)的同位素变体。在一个具体实施方式中，多个样品包括两个样品，第一Cookson型衍生试剂是4-苯基-1,2,4-三唑啉-3,5-二酮(PTAD)，第二Cookson型衍生试剂是13C6-4-苯基-1,2,4-三唑啉-3,5-二酮(13C6-PTAD)。在一些实施方式中，甾族化合物是维生素D或维生素D相关的本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2009.12.11 US 61/285,9411.用单个质谱测定来测定多个试验样品的每个试验样品中的甾族化合物的量的方法，其中在处理之前所述甾族化合物在每个试验样品中是相同的，所述方法包括：不同地处理多个试验样品以形成多个处理的样品，其中所述处理包括使每个试验样品在适于产生Cookson型衍生的甾族化合物的条件下经历不同的Cookson型衍生剂，所述Cookson型衍生剂选自4-苯基-1,2,4-三唑啉-3,5-二酮(PTAD)、4-甲基-1,2,4-三唑啉-3,5-二酮(MTAD)、4-[2-(6,7-二甲氧基-4-甲基-3-氧代-3,4-二氢喹喔啉基)乙基]-1,2,4-三唑啉-3,5-二酮(DMEQTAD)、4-(4-硝基苯基)-1,2,4-三唑啉-3,5-二酮(NPTAD)、和4-二茂铁基甲基-1,2,4-三唑啉-3,5-二酮(FMTAD)，并且其中由于所述处理，每个处理的样品中的所述甾族化合物通过质谱法可区别于其它处理的样品中的所述甾族化合物；合并所述处理的样品以形成多重样品；使所述多重样品在适于产生一种或多种通过质谱法可检测的离子的条件下经历电离源，其中一种或多种从来自每个处理的样品的所述甾族化合物产生的离子不同于一种或多种从来自其它处理的样品的所述甾族化合物产生的离子；通过质谱法检测一种或多种来自每个处理的样品的所述甾族化合物的离子的量；和使一种或多种来自每个处理的样品的所述甾族化合物的离子的量与每个试验样品中所述甾族化合物的量相关联。2.权利要求1所述的方法，其中所述多个处理的样品包括一个具有未衍生的甾族化合物的处理的样品。3.权利要求1所述的方法，其中所述甾族化合物是维生素D或维生素D相关化合物。4.权利要求1所述的方法，其中所述甾族化合物选自维生素D2、维生素D3、25-羟基维生素D2(25OHD2)、25-羟基维生素D3(25OHD3)、1α,25-二羟基维生素D2(1α,25OHD2)和1α,25-二羟基维生素D3(1α,25OHD3)。5.权利要求4所述的方法，其中所述甾族化合物是25-羟基维生素D2(25OHD2)或25-羟基维生素D3(25OHD3)。6.权利要求1所述的方法，进一步包括在经历电离源之前将所述多重样品经历萃取柱和分析柱。7.权利要求6所述的方法，其中所述萃取柱是固相萃取(SPE)柱。8.权利要求6所述的方法，其中所述萃取柱是湍流液相色谱(TFLC)柱。9.权利要求6所述的方法，其中所述分析柱是高效液相色谱(HPLC)柱。10.权利要求1所述的方法，其中质谱法是串联质谱法。11.权利要求10所述的方法，其中所述串联质谱法作为多重反应监测、先驱离子扫描或产物离子扫描而进行。12.权利要求6所述的方法，其中所述萃取柱、分析柱和所述电离源以联机方式连接。13.权利要求1所述的方法，其中所述电离源包括激光二极管热解吸(LDTD)。14.权利要求1所述的方法，其中所述电离源包括电雾化电离源(ESI)或大气压化学电离源(APCI)。15.权利要求1所述的方法，其中所述试验样品包括生物样品。16.权利要求15所述的方法，其中所述试验样品包括血浆或血清。17.用单个质谱测定来测定多个试验样品的每个试验样品中的两种或多种甾族化合物的量的方法，所述方法包括：不同地处理多个试验样品以形...

【专利技术属性】
技术研发人员：B·霍尔奎斯特，N·J·克拉克，
申请(专利权)人：奎斯特诊断投资公司，
类型：发明
国别省市：