本发明专利技术涉及一种归丹沙棘胶囊中二苯乙烯苷与丹酚酸B的同时定量方法。其特征：采用普通的等度洗脱，以体积比为23～24∶8～9∶65～67的甲醇-乙腈-1.5％甲酸水溶液为流动相；在300±2nm处，同时测定了样品中二苯乙烯苷与丹酚酸B的含量，使二种性质完全不同的中药有效成分，能够采用同一流动相，由一次定量测定完成。二成分的定量色谱图，波峰分离良好，二苯乙烯苷的波峰保留时间约5分钟，丹酚酸B的波峰保留时间约15分钟。方法无萃取、无浓缩、无蒸发，简便、快捷、准确、重现，易于普及掌握，有效提高了检测效率，降低了检测成本，减少了环境污染。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及一种归丹沙棘胶囊中二苯乙烯苷与丹酚酸B的同时定量方法。
技术介绍
归丹沙棘胶囊国家食品药品监督管理局批复的保健食品，批准文号为国食健字620110772。其保健功能为润肠通便，祛黄褐斑。每1000粒处方组成如下何首乌500g 当归500g苦杏仁400g 沙棘250g丹参200g 制备工艺处方中五味药材，取丹参100g，60°C干燥后粉碎，过80目筛，细粉用5kGy剂量的6tlCo辐照灭菌后备用；剩余丹参与沙棘加8倍量75%乙醇，回流提取2次，每次I. 5小时，滤过，合并滤液，减压回收乙醇，并浓缩至相对密度为1.30-1.35(6(TC测)的清膏，备用；滤渣及何首乌、当归、苦杏仁加8倍量水，煮提2次，每次I. 5小时，滤过，合并滤液，减压浓缩至相对密度为1.30-1.35(6(TC测)的清膏，备用；合并上述两种清膏，65°C减压干燥，将干膏粉碎成细粉，与丹参细粉混合均匀，用85 %乙醇制软材，16目筛制粒，55 60°C干燥，整粒，制成胶囊1000粒，即得。为高质量地确保本品的保健功能，除对胶囊中的总黄酮进行定量测定外，又对何首乌中的二苯乙烯苷和丹参中的丹酚酸B，采用HPLC法，同一流动相，普通的等度洗脱，进行了同时定量测定研究。查阅文献得知，二苯乙烯苷和丹酚酸B为两类化学结构与性质完全不同的两种有效成分，其含量，都是分别单独测定，二苯乙烯苷的检测波长320nm，流动相是乙腈-水(25 75);丹酚酸B的检测波长286nm，流动相是甲醇-乙腈-甲酸-水(30 10 I 59)。这样，花费的时间和试剂要比同时测定成倍增加，但测定效率却成倍降低。目前还未查阅到采用同一流动相，同时测定二成分的报道 ^OH9H900H hV^hoyShoy° TTIJOH OhH0 二苯乙烯苷化学结构式丹酚酸B化学结构式
技术实现思路
本专利技术正是在上述背景的前提下，为提高检测效率，降低检测成本，减少环境污染，首次采用反相高效液相法，以体积比为23 24 : 8 9 : 65 67的甲醇-乙腈-I. 5%甲酸水溶液为流动相，300nm为检测波长，同时测定了样品中二苯乙烯苷与丹酚酸B的含量。二成分波峰数值都在约60 70万，二苯乙烯苷保留时间5分钟，丹酚酸B保留时间15分钟，分离度良好。通过方法学考察，二苯乙烯苷进样量在O. 0423 O. 846 μ g、丹酚酸B进样量在O. 118 2. 36 μ g，与峰面积呈良好的线性关系(见表I、表2、图I、图2)，回归方程分别为Y = 2263793X-60196, r = O. 9995 和 Y = 1363675X-31292，r = O. 9998。采用加样回收实验，结果表明二苯乙烯苷9次测定的平均回收率为99. 04%，RSD为O. 66% (见表3);丹酚酸B 9次测定的平均回收率为98. 47%，RSD为O. 83% (见表4)。精密度(见表5)、稳定性(见表6)、重复性(见表7)、专属性(见图3、4、5)实验均符合方法学要求。适用于金防感冒颗粒中对乙酰氨基酚和绿原酸的同时定量测定。 本专利技术解决其技术问题所采用的技术方案为(I)色谱条件与系统适用性试验以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以体积比为23 24 8 9 65 67的甲醇-乙腈-I. 5%甲酸水溶液为流动相；检测波长为300nm;理论板数按丹酚酸B峰计算应不低于2000 ；(2)对照品溶液制备取二苯乙烯苷与丹酚酸B对照品适量，精密称定，加甲醇制成原液，再取原液加70%甲醇制成每Iml含二苯乙烯苷20 μ g、丹酚酸B30 μ g的溶液，即得；(3)供试品溶液制备取归丹沙棘胶囊内容物适量，研细，取约O. lg，精密称定，置25ml容量瓶中，加入70%甲醇20ml，以功率250w、频率25kHz，超声处理30分钟，放冷，用70%甲醇稀释至刻度，摇匀，滤过，精密量取续滤液5ml，置IOml量瓶中，加70%甲醇稀释至刻度，摇匀，用O. 45 μ m的微孔滤膜滤过，取续滤液，即得；(4)测定法分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各20 μ 1，注入液相色谱仪，测定，即得；本品每粒含何首乌以二苯乙烯苷C2tlH22O9计，不得少于2. 5mg ;含丹参以丹酹酸BC36H30O16 计,不得少于 3. Omg。本专利技术的原理如下依据二苯乙烯苷和丹酚酸B都是偏水溶性化合物，极易溶于含水甲醇的性质，用70%甲醇超声提取；再借助二成分在300nm处都有吸收，且吸收波峰面积，二成分相当，选择300nm，作为二苯乙烯苷和丹酚酸B的检测波长，二者的波峰面积，在一定的范围内，又与进样量呈现良好的线性关系，而用于定量测定。再通过流动相的组分与比例探讨，使二化合物不但波峰分离良好，而且波峰保留时间适宜，二苯乙烯苷保留时间5分钟，丹酚酸B保留时间15分钟。本专利技术的创新点及有益效果如下(I)采用普通的等度洗脱，以体积比为23 24 : 8 9 : 65 67的甲醇-乙腈-I. 5%甲酸水溶液为流动相；在300±2nm处，同时测定了样品中二苯乙烯苷与丹酚酸B的含量，使二种性质与结构完全不同的中药有效成分，能够采用同一流动相，由一次定量测定完成。二成分的定量色谱图，波峰分离良好，二苯乙烯苷的波峰保留时间约5分钟，丹酚酸B的波峰保留时间约15分钟。方法无萃取、无浓缩、无蒸发，简便、快捷、准确、重现，易于普及掌握，有效提高了检测效率，降低了检测成本，减少了环境污染。(2) 二苯乙烯苷和丹酚酸B同时测定，使原本2天的工作量，缩短为一天完成，并节约了成倍的流动相与样品处理试剂。(3)本专利技术方法的问世，不单单为归丹沙棘胶囊中二苯乙烯苷和丹酚酸B的同时检测提供了方法，而且还为，二成分在其他复方制剂中的同时测定提供了参考依据与研究思路，具表帅与示范作用。附图说明图I 二苯乙烯苷的线性关系图 图2丹酚酸B的线性关系3 二苯乙烯苷和丹酚酸B对照品HPLC色谱4为归丹沙棘胶囊HPLC色谱5为不含何首乌的归丹沙棘胶囊HPLC色谱6为不含丹参的归丹沙棘胶囊HPLC色谱I、图2中，纵坐标为峰面积；横坐标为进样量(μ g)图3 图6中，I.为二苯乙烯苷波峰 2.为丹酚酸B波峰 本专利技术具体实施例方式实施例I(I)色谱条件与系统适用性试验以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以体积比为23 24 8 9 65 67的甲醇-乙腈-I. 5%甲酸水溶液为流动相；检测波长为300nm;理论板数按丹酚酸B峰计算应不低于2000 ；(2)对照品溶液制备取二苯乙烯苷与丹酚酸B对照品适量，精密称定，加甲醇制成原液，再取原液加70%甲醇制成每Iml含二苯乙烯苷20 μ g、丹酚酸B30 μ g的溶液，即得；(3)供试品溶液制备取归丹沙棘胶囊内容物适量，研细，取约O. lg，精密称定，置25ml容量瓶中，加入70%甲醇20ml，以功率250w、频率25kHz，超声处理30分钟，放冷，用70 %甲醇稀释至刻度，摇匀，滤过，精密量取续滤液5ml，置IOml量瓶中，加70 %甲醇稀释至刻度，摇匀，用O. 45 μ m的微孔滤膜滤过，取续滤液，即得；(4)测定法分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各20 μ 1，注入液相色谱仪，测定，即得；三批样品的测定结果见表8。本品每粒含何首本文档来自技高网...
【技术保护点】
本专利技术涉及一种归丹沙棘胶囊中二苯乙烯苷与丹酚酸B的同时定量方法，其特征在于：(1)色谱条件与系统适用性试验以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以体积比为23～24∶8～9∶65～67的甲醇？乙腈？1.5％甲酸水溶液为流动相；检测波长为300nm；理论板数按丹酚酸B峰计算应不低于2000；(2)对照品溶液制备？取二苯乙烯苷与丹酚酸B对照品适量，精密称定，加甲醇制成原液，再取原液加70％甲醇制成每1ml含二苯乙烯苷20μg、丹酚酸B30μg的溶液，即得；(3)供试品溶液制备？取归丹沙棘胶囊内容物适量，研细，取约0.1g，精密称定，置25ml容量瓶中，加入70％甲醇20ml，以功率250w、频率25kHz，超声处理30分钟，放冷，用70％甲醇稀释至刻度，摇匀，滤过，精密量取续滤液5ml，置10ml量瓶中，加70％甲醇稀释至刻度，摇匀，用0.45μm的微孔滤膜滤过，取续滤液，即得；(4)测定法分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各20μl，注入液相色谱仪，测定，即得；本品每粒含何首乌以二苯乙烯苷C20H22O9计，不得少于2.5mg；含丹参以丹酚酸BC36H30O16计，不得少于3.0mg。
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：韩桂茹，王智森，高飞，
申请(专利权)人：石家庄藏诺生物股份有限公司，
类型：发明
国别省市：
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