一种虫草素的提取方法技术

本发明专利技术涉及一种虫草素的提取方法，该方法包括以下步骤：虫草素发酵液减压浓缩，然后分别在微波和光波组合下超声提取，得到的提取液进一步分离纯化，即得。与传统的提取方法相比，本发明专利技术提供的提取方法提高了提取率，节省了提取时间，增加了纯度。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及有效成分的提取方法，具体涉及虫草素的提取方法。
技术介绍
虫草素(cordyc印in)又称3’ -脱氧腺苷、虫草品、蛹虫草菌素、虫草头孢菌丝体、3-脱氧酰苷、冬虫夏草素、冬虫夏草菌素。虫草素是北虫草中(尤其是核苷类)主要活性成分，也是第一个从真菌中分离出来的核苷类抗生素。虫草素(Cordyc印in)是腺苷的类似物，分子式=CltlH13N5O3,分子量251. 24，碱性， 针状或片状结晶，熔点230°C -231°C，最大吸收波长为259. Onm。1951年,德国的Cunningham等从北虫草的培养滤液中分离发现虫草素。上个世纪六十年代起，虫草素的合成与提取，在国内外科技界就引起了广泛关注与重视。虽然我国在1964年曾有过人工合成虫草素的报道，但未曾看到继续深入研究的报生口 ο在20世纪70年代虫草素就被发现有抑制肿瘤，抗疟原虫和抑制mRNA翻译的作用；九十年代研究专利技术，添加腺苷脱氨酶抑制剂对其抗肿瘤活性的表达起着重要作用，虫草素的研究从而获得突破性进展；美国1997年开始将虫草素用于一期临床实验，治疗急性前 B和前T淋巴细胞白血病患者；虫草素还表现出极强的抗真菌，抗HTV-I型病毒和选择性抑制梭菌属细菌活性。虫草素的作用机理虫草素能干扰细胞RNA和DNA的合成，抑制不正常细胞(癌细胞)的分裂，并能作为区别细胞中不同的RNA聚合酶的工具，具有修复基因，保护生命体遗传密码的特殊功效，现在虫草素在美国作为抗癌，抗病毒新药，已经进入三期临床。因为其功效较突出，对市场其需求旺盛，目前其价格相当昂贵，达每克数万元。综合分析国内外公开的专利和文献可知，目前获得虫草素的主要方法有有机合成，从人工培养的蛹虫草子实体中提取，从人工液态培养的冬虫夏草或蛹虫草菌丝体中提取，从子实体采收后长满菌丝体的蛹虫草固体培养基残基中提取等。目前，虫草素提取的方法主要有乙醇浸泡，乙醇回流提取CN00130376. 7公开了从虫草中提取虫草素的方法，包括干燥粉碎，浸泡，回流提取，回收乙醇，加水沉淀，过滤，上离子换柱，收集洗脱液，浓缩，冷藏、结晶，过滤，正丁醇结晶，虫草结晶。水浸泡，乙醇提取或水提醇沉CN02109887. 5公开一种复合虫草素的提取方法及中药制剂，将冬虫夏草菌粉用水浸泡8-14小时，加50-70%的乙醇进行提取，或用水煎醇沉法提取，过滤取药液，浓缩回流乙醇，上离子柱洗脱除掉杂质，收集洗液进行再浓缩为原体积的30%，(TC冷藏24小时，析出结晶，用正丁醇重结晶，得复合虫草素。水浸泡，过大孔吸附树脂柱CN200710170485. 9公开了一种虫草素的分离纯化方法，该方法采用蛹虫草固体干燥培养基为原料，用NKA-II型大孔树脂柱和C18柱进行纯化，最后用蒸馏水进行反复重结晶。醇冷渗、醇超声波提取，上离子交换柱CN200710122409. O涉及一种从蛹虫草中提取精制虫草素和虫草多糖的方法，该方法包括以下步骤将蛹虫草粉末以冷渗法提取过滤，滤渣与乙醇混合，超声波辅助提取、离心，上清液浓缩、醇析。醇析上清液减压浓缩、洗脱，洗脱液浓缩结晶，用正丁醇重结晶，得到精制虫草素；醇析沉淀进行酶解脱蛋白处理、离心，上清液浓缩、洗脱，流出液浓缩、醇析，冷冻干燥后得到精制多糖。水浸泡，醇超声提取CN200910037874. 3涉及一种从蛹虫草子实体中提取有效成分虫草素的方法，包括以下步骤蛹虫草子实体干燥、粉碎后加水浸泡；在粘稠状溶液中加入95%乙醇，利用超声波辅助提取，提取结束后，过滤，收集滤液，将滤饼进行第二次醇沉和超声处理，合并收集多次滤液；在一定条件下减压浓缩无乙醇味，得浓缩液；取浓缩液用盐酸或硫酸溶液调PH至酸性；上离子交换柱用氨水洗脱除掉杂质，收集洗脱液进行再浓缩， 冷藏析出晶体，用正丁醇重结晶，得到虫草素。与水用超声波提取、上大孔吸附树脂柱CN200910026113. 8提供了一种蛹虫草中虫草素提取纯化方法，该方法包括以下步骤将蛹虫草原料粉碎后以料水比I : 20比例加水混合，进行超声波提取，将提取液离心过滤上大孔树脂柱，吸附流速I. 8BV/hr ;以15%甲醇水溶液为洗脱剂洗脱树脂柱，用旋转蒸发器在温度60°C下减压浓缩洗脱液，制得虫草素浓缩物；另有CN201110004151. O也公开了采用超声波提取虫草素的方法。现有技术制备虫草素时间周期长、有效成分提取不完全，制备的虫草素含量比较低，成本特别高，工艺重现性比较差。微波/光波组合法是天然产物提取中一种非常有发展潜力的新型技术具有设备简单，适用范围广，提取效率高，重现性好，省时间，节省试剂，污染小等特点。目前，微波/光波组合法除主要用于环境样品预处理外，还用于生化，食品，工业分析和天然产物提取等领域。但在国内，微波/光波组合法提取技术用于天然药物提取的研究报道还比较少。 微波/光波组合法提取的原理是在微波场中，不同物质的吸收微波能力的差异，使得被处理体中的某些区域或某些组分被选择性的加热，从而使得被提取物质能够快速从被处理物体中分离，进入介电常数较小，微波吸收能力相对差的提取剂中。同时微波/光波组合法透入被处理物体时，能使被处理物体内部，外部几乎同时被加热升温，内外加热均匀一致，形成热源体状态，大大缩短了常规加热中的热传导时间。直到目前为止，尚未见到微波/光波在虫草素提取方面的报道。
技术实现思路
本专利技术的目的是克服现有技术的问题，而提供一种虫草素的新的提取方法。本专利技术提供的，该方法包括以下步骤虫草素发酵液减压浓缩，然后分别在微波和光波组合下超声提取，得到的提取液分离纯化，即得。所述虫草素的提取方法中所述虫草素发酵液采用现有的方法对虫草素进行发酵得到的，也可以采用以下方法制备在发酵罐中加入培养基，灭菌后接入菌种，接种量10%，发酵条件为22°C，150r/ min, pH6_7,使菌种在液体中悬浮生长,培养时间为6d,虫草素含量达到O. 5%以上，即得虫草素发酵液；所述发酵培养基为液体培养基，培养基中各成分的重量百分比为蔗糖4.0%、玉米汁 3. 0%、麸皮 3. 0%、全脂牛奶粉 I. 0%, VB O. 01%, KH2P041%、MgSO4O. 05%。目前虫草菌的品种很多，为了使得发酵培养液中虫草素含量增加，必须选择适宜的虫草菌，条件是纯度高、无杂菌、无老化、感染力强、适应范围广的菌种。所述微波和光波下超声提取是指在微波炉中55%微波和45%光波组合、福射功率为800W的条件下超声提取4-10min ；提取液分离纯化包括以下步骤离心、醇沉，离心，过大孔吸附树脂柱、高效液相色谱纯化。其中 所述两个离心步骤中两次离心的速度可以相同也可以不同离心的转速为4000-6000r/min，离心的时间为 10_30min ；所述过大孔吸附树脂柱步骤为以O. 5_3BV/h流速上样吸附，用3-5倍柱体积的蒸馏水洗脱杂质，再用浓度为20-30%的乙醇以2-6BV/h的流量洗脱1-5小时，收集乙醇洗脱液，即可；所述高效液相色谱纯化条件色谱柱为Kromasil 100-25, C18,4. 6mmX250mm ;流动相为甲醇-水体积比为15:85流速lmL/min ;检测波长为260nm。优选地，所述虫草素的提取方法，包括以下步骤I)取虫草素发酵液，减压浓缩至本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种虫草素的提取方法，其特征在于，该方法包括以下步骤：虫草素发酵液减压浓缩，然后分别在微波和光波组合下超声提取，得到的提取液分离纯化，即得。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：王智森，高飞，
申请(专利权)人：石家庄藏诺生物股份有限公司，
类型：发明
国别省市：