本发明专利技术公开了二苯乙烯苷防治骨质疏松的应用，TSG对成骨细胞前体细胞无毒性作用，不影响细胞增殖；对过氧化氢（H2O2）造成的成骨细胞前体细胞（MC3T3-E1）的凋亡具有保护作用；并且在其分化过程中改善H2O2诱导的氧化应激状态；对H2O2造成的MC3T3-E1成骨分化抑制具有保护作用；可以抑制骨吸收因子的表达，从而通过改善成骨细胞凋亡和分化抑制及间接抑制破骨细胞活化来对骨质疏松起保护作用。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于骨质疏松的防治
，涉及二苯乙烯苷防治骨质疏松的应用。
技术介绍
骨质疏松症(osteoporosis，0P)是退行性、全身性、代谢性骨骼疾病，是由多种病因导致的骨组织骨量丢失、结构改变和生物力学性能减退，容易发生骨折，严重威胁老年人的身体健康。氧化应激(oxidative stress)是机体内高活性物质如ROS (Reactive oxygenspecies)产生过多，超出了机体的清除能力，导致氧化和抗氧化失衡的一种状态。生理范围内的ROS在调节人体正常的功能如细胞凋亡、基因表达、信号转导等方面起着重要的作用。然而，高浓度的ROS可以导致核酸、蛋白质、脂质产生氧化反应，损害细胞的结构和功能，弓丨·起疾病的发生。近年来，研究发现氧化应激在骨质疏松发生发展中起重要作用。过量氧自由基(ROS)的产生可以抑制骨髓基质干细胞(MSCs)成骨分化，造成MSCs和成骨细胞(OB)凋亡，促进破骨细胞(OC)活化和功能增强，导致骨吸收和骨形成失衡，引起骨微结构改变和骨量降低。何首乌为寥科植物何首乌的干燥块根，其主要功效有补肝肾，益精血，乌须发，强筋骨。二苯乙烯苷(TSG)是何首乌中主要水溶性活性成分，具有多项生理功能抗氧化清除自由基；抗肿瘤；降低胆固醇；抑制动脉粥样状硬化；防治老年痴呆；提高记忆力等。
技术实现思路
本专利技术解决的问题在于提供二苯乙烯苷(TSG)防治骨质疏松的应用，TSG可应用于防治骨质疏松的药物的制备。本专利技术是通过以下技术方案来实现二苯乙烯苷防治骨质疏松的应用。二苯乙烯苷在防治骨质疏松药物的制备中的应用。二苯乙烯苷在改善成骨细胞前体细胞氧化应激状态药物的制备中的应用。二苯乙烯苷在成骨细胞前体细胞凋亡保护药物的制备中的应用。含二苯乙烯苷的何首乌提取物在防治骨质疏松药物的制备中的应用。与现有技术相比，本专利技术具有以下有益的技术效果二苯乙烯苷对成骨细胞前体细胞(MC3T3-E1)无毒性作用、对过氧化氢(H2O2)造成的MC3T3-E1的凋亡具有保护作用；并且可以改善H2O2造成的氧化应激状态；对H2O2造成的MC3T3-E1分化抑制具有保护作用；可以抑制骨吸收因子的表达。MC3T3-E1细胞是研究成骨细胞生长、分化的较常用的细胞模型，鉴于二苯乙烯苷对MC3T3-E1的作用，其对成骨细胞具有保护作用，促进骨形成，并通过抑制骨吸收因子来抑制破骨细胞的活化，来降低骨吸收，最终起到防治骨质疏松的作用。二苯乙烯苷为我国传统中药何首乌的有效提取物之一，为纯天然提取物，用药较安全，毒副作用小。因此，二苯乙烯苷可应用于骨质疏松的防治，尤其是在防治骨质疏松药物的制备中的应用。附图说明图I为过氧化氢有效浓度的筛选。观察不同浓度H2O2作用不同时间后，细胞的增殖情况。图2-1为不同浓度TSG对细胞增殖作用的影响，图2-2为TSG对H2O2造成细胞凋亡的保护作用，图2-3为TSG保护作用的显微镜下观察情况，图2-4为细胞凋亡的Hochest33258 染色结果。图3-1为TSG可以改善细胞氧化应激ROS水平的检测结果，图3_2为TSG可以改·善细胞氧化应激MDA水平的检测结果。图4-1为TSG在H2O2作用后，对细胞碱性磷酸酶(ALP)活性的作用，图4_2为TSG在H2O2作用后，对细胞基质钙盐沉积的作用，图4-3为TSG对三种细胞成骨分化基因表达水平的影响。图5为TSG在H2O2作用后对两种骨吸收因子表达的影响。具体实施例方式下面结合具体的实施方案对本专利技术做进一步的详细说明，所述是对本专利技术的解释而不是限定。MC3T3-E1为成骨细胞前体细胞系，可以向成骨细胞进行分化，是研究成骨细胞生长、分化的较常用的细胞模型，H2O2处理也是较常用的体外氧化应激模型，出于观察二苯乙烯苷对成骨细胞凋亡和分化的影响，及其抗氧化损伤的作用，所以选择MC3T3-E1作为细胞模型，H2O2处理为体外氧化应激模型。I、体外氧化应激模型的建立将MC3T3-E1细胞以2X IO3接种到96孔板上，待细胞长满后，弃掉培养基，加含100,200,300,400 u M/L H2O2的无血清的培养基至孔板中，分别作用2h，6h，12h, 24h,每组6个复孔。至观察点后，利用MTT比色法来筛选合适的过氧化氢作用浓度和时间，加20 Ul的5mg/ml的MTT溶液，孵育4小时后，加DMS0，震荡5分钟，在酶标仪上492nm波长读数。结果如图I所示，横坐标为不同浓度的H2O2作用时间，纵坐标为吸光度OD值，由图可见，伴随H2O2的浓度和作用时间的延长，MC3T3-E1细胞活性逐渐降低。具体选择300 u MH2O2作用24小时的处理作为体外氧化应激模型，在该处理下细胞存活率在50%左右。2、TSG对氧化应激导致MC3T3-E1凋亡的保护作用2. I单纯TSG对细胞的毒性作用将MC3T3-E1细胞以2X IO3接种到96孔板上，待细胞长满后，弃掉培养基，加含不同浓度0、0. UUlOuM/L TSG的无血清培养基至孔板中，培养24h和72h，观察TSG对细胞增殖作用的影响。在观察点，利用MTT法对细胞活性进行检测。 结果如图2-1所示，横坐标为不同浓度的TSG作用时间，该图的纵坐标为吸光度OD值，由图可见，不同浓度的TSG在观察时间内，对细胞的增殖并无明显影响。2. 2TSG对氧化应激导致MC3T3-E1凋亡的保护作用分组情况①空白对照组；②单纯H2O2处理组0. I ii M/L TSG+H202;④I ii M/LTSG+H202;⑤IOiI M/L TSG+H202;⑥阳性对照组ImM N-乙酰半胱氨酸(NAC) +H2O2处理组。在TSG预处理组，分别加入0、0. UUlOuM/L TSG无血清培养基至接种MC3T3-E1细胞的96孔板中，作用24h，阳性对照组加入ImM NAC，然后，加入H2O2 (300 iiM)，作用24h后，利用MTT法进行细胞活性检测。结果如图2-2所示，横坐标为各组的作用方式，纵坐标为 吸光度OD值，以各组的OD值同空白对照组的OD值进行比较的百分数来表述。由图可见，单纯H2O2作用后，细胞活性降低，经不同浓度TSG作用后细胞活性增加，同单纯H2O2作用组相比，具有统计学差异。图中的星号表示同单纯H2O2作用组相比，*P < 0. 05，林P < 0. 01。这表明用TSG处理后能够保护氧化应激导致MC3T3-E1的凋亡。2. 3显微镜观察TSG对氧化应激导致MC3T3-E1凋亡保护的细胞形态将MC3T3-E1细胞以4X IO5接种到6孔板上，待细胞长满后，弃掉培养基，加I和10 U M/L TSG的无血清培养基至孔板中，预处理24h，空白组加无血清培养基，然后，加入300 ii M的H2O2至孔板中，24h后，倒置显微镜下观察细胞形态。结果如图2-3所示，图①为正常对照组，图②为单纯H2O2作用组，图③④分别为I和IOii M/L TSG作用组。可见，单纯H2O2处理后，有较多的细胞死亡，细胞形态发生改变，经TSG处理后，状态有改善，死亡细胞比率下降。2. 4细胞凋亡的Hochest33258染色将MC3T3-E1细胞以4X IO5接种到6孔板上，待细胞长满后，弃掉培养基，加I和10 U M/L 本文档来自技高网...
【技术保护点】
二苯乙烯苷防治骨质疏松的应用。
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：张金康，刘建，杨柳，孟国林，袁志，罗卓荆，
申请(专利权)人：中国人民解放军第四军医大学，
类型：发明
国别省市：
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