甲状腺过氧化物酶抗体均相发光免疫分析试剂盒及其检测方法技术

技术编号:7896963 阅读:300 留言:0更新日期:2012-10-23 03:38
本发明专利技术公开一种甲状腺过氧化物酶抗体均相发光免疫分析试剂盒及其检测方法。本发明专利技术包括均相发光96孔测定板,甲状腺过氧化物酶抗体标准品,链霉亲和素包被供体微球溶液和生物素标记甲状腺过氧化物酶抗原,还包括甲状腺过氧化物酶抗体包被的受体微球溶液。本发明专利技术样本中的甲状腺过氧化物酶抗体和受体微球上甲状腺过氧化物酶抗体竞争结合生物素标记甲状腺过氧化物酶抗原。测量已知不同含量标准品的发光信号,绘制标准曲线并获得数学函数,未知样本含量通过数学函数获得。本发明专利技术集酶免疫分析和化学发光免疫分析的优点于一体,准确测定血清中甲状腺过氧化物酶抗体水平,应用于自身免疫性甲状腺疾病高危人群筛查、诊断和治疗效果评估。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及光激发偶联免疫检测技术,具体为。
技术介绍
甲状腺过氧化物酶(TPO)是一种含有血红素辅基的膜结合糖蛋白,整个分子分为膜内区、跨膜区和膜外区,伸向充满胶质滤泡腔的部分具有催化活性。TPO作为甲状腺激素合成过程中一种重要的酶,能催化碘的活化、甲状腺球蛋白上酪氨酸残基的碘化及碘化酪 氨酸残基的偶联,最终生成甲状腺素(T3、T4)。当甲状腺发生病变,滤泡细胞结构受到破坏时,TPO于甲状腺滤泡细胞腔的边缘即甲状腺细胞顶部向外周血溢漏,刺激机体免疫系统产生TPO抗体(anti-TPO抗体)。TPO抗体可通过激活补体系统引起甲状腺细胞损伤。因此,血清TPO抗体定量分析可用于自身免疫性甲状腺疾病的诊断、预测疾病发展等方面。目前有3种试剂用于TPO抗体的定量分析酶联免疫吸附试验、酶促发光免疫分析和化学发光免疫分析。①酶联免疫吸附试验以酶标反应板为固相载体,采用传统间接反应模式将已知抗原(TPO)吸附在固相载体上,加待测抗体,再加酶(如辣根过氧化物酶)标记抗人IgG,最终形成抗原一待测抗体一酶标记抗体复合物;加入酶显色底物(如四甲基联苯胺),借助酶标仪测定吸光度值,待测抗体的含量与吸光本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种甲状腺过氧化物酶抗体均相发光免疫分析试剂盒,包括均相发光96孔测定板,甲状腺过氧化物酶抗体标准品,链霉亲和素包被供体微球溶液和生物素标记甲状腺过氧化物酶抗原,其特征在于:该试剂盒还包括甲状腺过氧化物酶抗体包被的受体微球溶液。

【技术特征摘要】
1.一种甲状腺过氧化物酶抗体均相发光免疫分析试剂盒,包括均相发光96孔测定板,甲状腺过氧化物酶抗体标准品,链霉亲和素包被供体微球溶液和生物素标记甲状腺过氧化物酶抗原,其特征在于该试剂盒还包括甲状腺过氧化物酶抗体包被的受体微球溶液。2.根据权利要求I所述甲状腺过氧化物酶抗体均相发光免疫分析试剂盒,其特征在于甲状腺过氧化物酶抗体包被受体微球溶液是按照以下配比的原料制成的, a.将欲标记的甲状腺过氧化物酶抗体装入透析袋中,置于0.IM pH 8.0磷酸盐缓冲液透析,去除Tris、甘氨酸等含有氨基的成分,透析后的抗体溶液,用紫外分光光度计测定抗体含量,调整浓度至1-2毫克/毫升; b.受体微球加入0.IM pH 8. 0磷酸盐缓冲盐水溶液,离心洗涤1-2次,每次16000XG15分钟,吸干上清液,将微球浓度调整至10-20毫克/毫升待用; c.按受体微球透析后甲状腺过氧化物酶抗体为1:10的质量比混合于0.IM pH 8.0磷酸盐缓冲盐水溶液中,再依次加入体积百分比0. 6-0. 625%的10%吐温20溶液、4_5%新鲜配制的400 mM氰基硼氢化钠溶液,充分混匀置37°C温箱内反应48小时以上; d.用800mM氢氧化钠溶液配制溶度为65毫克/毫升的羧甲氨基胺溶液,加体积百分比为4-5%的羧甲氨基胺溶液于标记后的离心管...

【专利技术属性】
技术研发人员:李会强孙颖张明华王高升单立新苑凤君薛寒
申请(专利权)人:沃克天津生物科技有限公司
类型:发明
国别省市:

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