一种基因突变提高抗氧化性的葡萄糖氧化酶及其方法技术

本发明专利技术提出了一种基因突变提高抗氧化性的葡萄糖氧化酶及其方法，该葡萄糖氧化酶由GOD‐M524L‐M528L突变基因构成。方法为：计算机模拟分析葡萄糖氧化酶序列，设计葡萄糖氧化酶编码基因突变体为GOD‐M524L‐M528L；全基因合成该基因序列，通过重叠延伸PCR扩增；克隆到pPIC9K载体上，线性化后电转入毕赤酵母GS115菌株中，再经培养表达、检测筛选，摇瓶发酵，收集发酵上清液，将发酵上清液透析去除盐离子，经层析纯化得到纯酶样品，经过氧化处理3.5h后检测，对照组GOD的残留酶活只有20％，而突变葡萄糖氧化酶GOD‐M524L‐M528L的残留酶活则达到30％，提高了其抗氧化性。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及的是分子酶工程技术，特别是一种提高葡萄糖氧化酶抗氧化性的方 法。
技术介绍
葡萄糖氧化酶G0D是氧化还原酶（El. 1. 3. 4)，它能专一性的将葡萄糖氧化为葡萄 糖酸和过氧化氢，根据反应条件的不同，其反应式如下： 在没有过氧化氢酶存在下，每摩尔葡萄糖氧化酶氧化时消耗1摩尔氧气。 C6H1206+02- C 6H1207+H202 在有过氧化氢酶存在下，每摩尔葡萄糖氧化酶氧化时消耗0. 5摩尔氧气。 C6H1206+l/20 2-C 6H1207 在有乙醇和过氧化氢酶同时存在下，过氧化氢同时被用于乙醇的氧化作用，此时， 每摩尔葡萄糖氧化酶氧化时消耗1摩尔氧气。 C6H1206+C2H 50H+02- C 6H1207+CH3CH0+H20 甲硫氨酸（Met)是构成蛋白质必需氨基酸的一种，为蛋白质甲基化和转硫化所必 需，甲硫氨酸易被氧化，它易受到过氧化氢、次氯酸盐、羟基自由基的氧化而生成甲硫氨酸 亚砜，甲硫氨酸亚砜被进一步氧化可形成甲硫氨酸砜。甲硫氨酸亚砜可以在特定条件下可 以还原为甲硫氨酸，而甲硫氨酸被氧化为甲硫氨酸砜在生物学是不可逆的。 H202被认为本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种提高葡萄糖氧化酶抗氧化性的方法，其特征在于步骤为：1).计算机模拟分析葡萄糖氧化酶序列及分子对接在对葡萄糖氧化酶蛋白序列分析的基础上，设计葡萄糖氧化酶编码基因的三个突变体为GOD‑8，GOD‑M523L‑M524L和GOD‑M524L‑M528L，2).葡萄糖氧化酶及突变体表达载体的构建通过全基因合成突变体GOD‑8基因序列；并通过重叠延伸PCR扩增GOD‑M523L‑M524L、GOD‑M524L‑M528L突变体基因序列，具体如下：GOD‑M523L‑M524L通过两轮PCR扩增，突变位点设计引物为GOD‑M1‑F、GOD‑M1‑R、GOD‑F‑EcoR Ⅰ和GOD‑R‑Not Ⅰ；G...

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：江正兵，宋慧婷，赵勇，
申请(专利权)人：湖北大学，
类型：发明
国别省市：湖北;42