治疗系统性红斑狼疮(SLE)的人源化抗IL-10抗体技术方案

本发明专利技术提供了能够结合白细胞介素-10(IL-10)的人源化或嵌合的抗体或其片段，其中所述抗体或其片段：(i)与IL-10中IL-10受体α(IL-10Rα)所结合区域相同的区域结合，且在IL-10与IL-10受体结合时不能结合IL-10；和(ii)通过结合不连续表位与同源二聚体形式的IL-10结合，所述不连续表位包含两个单体的残基。此外，本发明专利技术提供了涉及所述抗体或其片段的使用的相关产品和方法。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】
本专利技术涉及白细胞介素-IO(IL-IO)和IL-10特异性试剂。特别地，本专利技术涉及人源化IL-10抗体及其应用。本专利技术还涉及治疗系统性红斑狼疮(SLE)的方法。
技术介绍
系统性红斑狼疮(SLE)据认为是自体免疫疾病，其中B淋巴细胞的异常机能亢进和免疫球蛋白Y(IgG)自体抗体的大量异常产生起着关键作用。该病理学过程导致Ig包覆的细胞的隐没和破坏、补体蛋白的固定和切割以及化学吸引素(chemotaxin)、血管活性妝和破坏性酶在组织中的释放(Hahn BH. Systemic Lupus Erythematosus. In:KasperDL, Braunwald E, Fauci AS, Hauser SL, Longo DL, Jameson, JL 编著 sPrinciples of Internal Medicine(第 16 版)，New York (US) : McGraw-Hi 11; 2005,第 1960-1967 页)。SLE的特征在于多样性表现形式。在疾病进程中，总共95%的患者诉有肌肉骨骼疾病，80%表现出皮肤损伤，85%有血液疾病，60%有神经紊乱，60%有心肺疾病，30% 50%有肾脏疾病，40%有胃肠道疾病，15%有血栓且15%有眼部疾病。大多数的患者(95%)还经受在大多数时候均存在的系统性症状，如疲倦、不适、发烧、厌食和体重减轻。多数患者经历突发与缓解交替的疾病期。永久性缓解(不治疗时没有症状)极为罕见。超过50年之前，多数诊断为SLE的患者存活少于5年。现在，10年存活超过90%，这主要是基于早诊断、对症抗炎和免疫抑制治疗。常见死因为免疫抑制造成的感染(Hahn 2005)。在SLE治疗中常规使用抗疟疾药、抗炎药和免疫抑制药物。当症状难以控制时，对非甾体抗炎剂补充以皮质激素。此外，主要器官受累的活跃的SLE需要采用环磷酰胺的激进性疗法。迄今为止，还没有可用于治愈SLE和/或在长期基础上改善患者的生活品质的病因性治疗。然而，近来在抗体技术中的发展和对引起该自体免疫疾病的因素的进一步鉴定已经开启了使用单克隆抗体作为治疗选择的可能性。特别地，治疗SLE的有利方法将是与导致多克隆自体抗体的大量过度产生的病理性免疫响应相互作用或将其纠正的特异性治疗。由于SLE的发病机理主要涉及失调的B细胞，特别受关注的是能够靶向B细胞的单克隆抗体。Robak 和 Robak(Current Drug Targets, 2009,第 10 期，第 26-37 页)注意到，潜在的B细胞表面抗原靶标是⑶19、⑶20、⑶21和⑶22。此外，IL-10、IL-lra、IL-12 (Capper 等，Clin. Exp. Immunol. 2004Nov; 138 (2) : 348-56)和 IL-6 (Chun 等，J. Clin.Immunol. 2007Sep; 27 (5) :461-6)是调节免疫响应的重要细胞因子，且尤其在SLE患者的突发期间升高。IL-10和抗双链DNA (dsDNA)的自体抗体的血浆水平往往反映患SLE的患者的疾病活跃性。升高的IL-10水平与SLE患者的疾病活跃性相关(Park等，Clin. Exp.Rheumatol. 1998年5月-6月;16⑶:283-8)。然而，IL-10是对免疫系统具有多效性的细胞因子，且已知其还参与降低促炎性响应。已对SLE患者进行了采用单克隆抗体的临床试验。特别地，几种试验涉及抗体利妥昔单抗(Rituximab)，一种用于治疗非霍奇金氏淋巴瘤的嵌合小鼠抗CD20单克隆抗体。Robak和Robak (2009)注意到，这些试验的结果显示出该抗体在SLE患者中较高的活性，且已开发了数种新的靶向⑶20的抗体(Ofatumumab、IMMU-106和GA-101)。其它报道了单克隆抗体在SLE中的活性的临床试验采用抗CD22抗体、依帕珠单抗(Epratuzumab)、抗TNF a 抗体、英夫利昔单抗(Infliximab)、抗 IL-10 抗体、B-N10 (Llorente 等,ArthritisRheum. 2000 年 8 月；43 (8) : 1790-800)、抗 CD40L 抗体、IDEC 131 和 BG 9588、BLYS 抑制剂、贝利单抗(Belimumab)、抗IL6受体抗体、妥克利母单抗(Toclimumab)和抗C5抗体依库珠单抗(Eculizumab)完成。本专利技术的目的在于提供在该领域具有功用的其他试剂、特别是抗体。因此，在第一方面，本专利技术提供了能够结合白细胞介素-IO(IL-IO)的人源化的或嵌合的抗体或其片段，其中所述抗体或其片段(i)与IL-IO中IL-IO受体a (IL-IORa)所结合区域相同的区域结合，且在IL-10与所述IL-10受体结合时不能结合IL-IO ;和(ii)与IL-10的同源二聚体形式结合，所述结合通过与包含两个单体的残基的不连续表位结合 而实现。本专利技术人已发现，本专利技术的抗体具有特别有利的结合模式，从而其适于治疗由IL-IO水平或活性升高所介导的医学状况、特别是自体免疫疾病。具体而言，本专利技术的抗体及其片段不能引发ADCC或⑶C响应，这是因为一旦IL-IO已经与IL-IORa结合则所述抗体及其片段无法与IL-10结合。这是一种特别有利的结合模式，因为其结果是本专利技术的抗体不能与其上IL-10与受体结合的细胞相结合，并因此不能引起ADCC或⑶C响应。以这种方式控制了所述抗体对免疫系统的其它部分的影响。此外，本专利技术的抗体及其片段结合IL-10同源二聚体的亲和力远远大于对ILlO单体的结合亲和力。如此，所述抗体优先与IL-10的功能活性形式结合而非单体或降解产物结合。这是特别有利的，因为减少了产生中和效果所需的IL-10抗体的量并且降低了由与非活性分子的非特异性结合而引起的副作用的风险。在第二方面，本专利技术提供了能够结合白细胞介素-IO(IL-IO)的人源化的或嵌合的抗体或其片段，其中所述抗体或其片段与IL-10中IL-10受体a (IL-IORa)所结合区域相同的区域结合，且在IL-10与所述IL-10受体结合时不能结合IL-10。在第三方面，本专利技术提供了能够结合同源二聚体形式的白细胞介素-IO(IL-IO)的人源化或嵌合的抗体或其片段，其中所述抗体或其片段与包含两个单体的残基的不连续表位结合。在第四方面，本专利技术提供了如权利要求I所述的人源化或嵌合的抗体或其片段，其中所述抗体或其片段包含与鼠抗体B-NlO可变轻链的CDR1、CDR2和CDR3的氨基酸序列具有至少80%同一性的氨基酸序列，和/或包含与鼠抗体B-NlO可变重链的⑶R1、⑶R2和CDR3的氨基酸序列具有至少80%同一性的氨基酸序列。在第五方面，本专利技术提供了能够结合白细胞介素-IO(IL-IO)的人源化或嵌合的抗体或其片段，其中所述抗体或其片段不会诱导抗体依赖性的细胞介导的细胞毒性和/或补体依赖性的细胞毒性。在第六方面，本专利技术提供了能够结合白细胞介素-IO(IL-IO)的人源化或嵌合的抗体或其片段，其中所述抗体或其片段能够阻止通过IL-IOa受体的IL-10信号转导。在第七方面，本专利技术提供了能够结合白细胞介素-IO(IL-I本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2009.11.30 GB 0920942.0;2009.11.30 GB 0920940.4;201.一种人源化的或嵌合的抗体或其片段，所述抗体或其片段能够结合白细胞介素-10 (IL-10)，其中所述抗体或其片段 (i)与IL-10中IL-10受体a(IL-IORa)所结合区域相同的区域结合，并且在IL-10与所述IL-10受体结合时不能结合IL-10 ;和 (ii)与同源二聚体形式的IL-10结合，所述结合通过与包含两个单体中的残基的不连续表位结合而实现。2.如权利要求I所述的人源化的或嵌合的抗体或其片段，其中，所述抗体或其片段包含与鼠抗体B-NlO可变轻链的⑶R1、⑶R2和⑶R3的氨基酸序列同性为至少80%的氨基酸序列，和/或包含与鼠抗体B-NlO可变重链的⑶R1XDR2和⑶R3的氨基酸序列同一性为至少80%的氨基酸序列。3.如权利要求2所述的人源化的或嵌合的抗体或其片段，其中，所述抗体或其片段包含鼠抗体B-NlO可变轻链和/或重链的⑶R1、⑶R2和⑶R3的氨基酸序列。4.如权利要求I所述的人源化的或嵌合的抗体或其片段，其中，所述抗体或其片段包含鼠抗体B-NlO可变轻链的⑶R1、⑶R2和⑶R3的氨基酸序列中的至少一个和/或鼠抗体B-NlO可变重链的⑶R1XDR2和⑶R3的氨基酸序列中的至少一个，且在这些序列中可选地具有不会显著改变所述人源化抗体或其片段的亲和力和/或特异性的变异。5.如前述权利要求中任一项所述的人源化的或嵌合的抗体或其片段，其中，所述抗体或其片段包含鼠抗体B-NlO可变轻链的氨基酸序列和/或鼠抗体B-NlO可变重链的氨基酸序列。6.如权利要求I 4中任一项所述的人源化的或嵌合的抗体或其片段，其中，所述抗体或其片段包含抗体BT-063的可变重链序列(SEQ ID No:70)和BT-063的可变轻链序列(SEQ ID No:69)。7.如前述权利要求中任一项所述的人源化的或嵌合的抗体或其片段，其中，所述抗体或其片段不与IL-10中IL-10受体P (IL-10RP)所结合区域相同的区域结合。8.如前述权利要求中任一项所述的人源化的或嵌合的抗体或其片段，其中，所述抗体或其片段与包含一个IL-10单体的螺旋A的残基和另一个IL-10单体的螺旋F’的残基的不连续表位结合。9.如前述权利要求中任一项所述的人源化的或嵌合的抗体或其片段，其中，所述不连续表位的残基处在一个单体的前55个氨基酸内，和另一个单体的最后20个氨基酸内。10.如权利要求9所述的人源化的或嵌合的抗体或其片段，其中，所述不连续表位的残基处在一个单体的第20位 55位氨基酸内，和另一个单体的最后20个氨基酸内。11.如前述权利要求中任一项所述的人源化的或嵌合的抗体或其片段，所述抗体或其片段能结合白细胞介素-10 (IL-10)，其中所述抗体或其片段不会引起抗体依赖性的细胞介导的细胞毒性和/或补体依赖性细胞毒性。12.如前述权利要求中任一项所述的人源化的或嵌合的抗体或其片段，所述抗体或其片段能结合白细胞介素-IO(IL-IO)，其中所述抗体或其片段能够阻止通过IL-10 a受体的I...

【专利技术属性】
技术研发人员：弗兰克·奥斯特罗斯，克里斯托夫·尤尔克，克里斯托夫·布鲁切尔，P·罗特根，本杰明·德尔肯，A·英格利恩，尚塔尔·祖伯，尼古拉斯·蔡洛特，
申请(专利权)人：生物测试股份公司，
类型：发明
国别省市：