P19/Ebi3复合物及其多克隆抗体在系统性红斑狼疮诊治中的应用技术方案

本发明专利技术公开了P19/Ebi3复合物及其多克隆抗体在系统性红斑狼疮诊断、治疗中的用途。实验证明，与正常小鼠相比，系统性红斑狼疮小鼠中的P19/Ebi3复合物高水平表达，且使用抗P19/Ebi3蛋白的多克隆抗体可以降低小鼠体内抗体的表达水平及免疫细胞的数目，表明可以通过制备抗P19/Ebi3的抗体来治疗系统性红斑狼疮，因此P19/Ebi3复合物及其抑制剂用于制备诊治系统性红斑狼疮药物，具有良好的开发前景。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及生物
，更具体地，本专利技术涉及P19/Ebi3复合物及其多克隆抗体在系统性红斑狼疮诊断、治疗中的用途。
技术介绍
系统性红斑狼疮(SystemicLupusErythematosus,SLE)是一种严重威胁人类健康与生命的自身免疫性疾病，有较高的致死率和致残率。其病因与发病机制尚不明了，普遍认为是环境因素作用于一定遗传背景的机体(包括组织相容性、细胞因子、细胞因子受体等表达的不同型别)而形成的结果。其免疫病理特征是体内产生多种高低度、致病性自身抗体，同时淋巴细胞凋亡。释放出大量细胞核内容物及核糖小体而成为自身抗原；抗原抗体结合形成免疫复合物，免疫复合物的沉积可导致靶细胞损伤和炎症，导致各个组织和器官发生病变。在该病理过程中，B细胞处于高度活化状态，且该过程与T细胞密切相关，有T细胞依赖性。复杂的细胞因子网络调节T细胞和B细胞的生长、分化和功能，这些细胞因子可以分为两大类：Th1型(主要诱导细胞免疫)和Th2型(主要促进抗体产生)。白细胞介素12(IL-12)在细胞因子网络调节中起着重要的作用，它主要由单核巨噬细胞分泌产生。IL-12家族由一个α-链(P19，P28或P35)和一个β-链(P40或Ebi3)异二聚体亚基组成(图1)，其与一些自身免疫疾病，尤其是Th1细胞介导的自身免疫病的发病有关。目前对于系统性红斑狼疮的临床诊断主要依靠临床表现、实验室检查、组织病理学和影像学检查。由于SLE临床表现病症因人而异，有时会出现误诊。而治疗系统性红斑狼疮的常规方法是使用抗疟疾药、抗炎药和免疫抑制药，当症状难以控制时，对非甾体抗炎剂补充以皮质激素；虽然在控制病情、阻止疾病发展中有显著作用，但多有明显不良反应，且对部分患者疗效不佳。B细胞和T细胞在SLE的发病机制中起着重要的作用，针对免疫细胞的生物学疗法将成为治疗SLE的焦点。
技术实现思路
为了弥补现有技术的不足，本专利技术的目的在于提供一种可用于系统性红斑狼疮诊治的复合物P19/Ebi3及其多克隆抗体。相比传统的系统性红斑狼疮的诊断和治疗方法，使用多克隆抗体与导致自体抗体过度产生的病理性免疫响应相互作用或将其纠正的特异性治疗将更有优势，如具有较高的特异性与准确性，较低的副作用，从而实现治愈系统性红斑狼疮和/或在长期基础上改善患者的生活品质的病因性治疗。为了实现上述目的，本专利技术采用如下技术方案：本专利技术提供了一种分离的P19/Ebi3复合物。进一步，上面所提到的复合物是由P19和Ebi3两个亚基组成的。进一步，上面所提到的P19亚基包括如SEQIDNO:1所示的氨基酸序列的蛋白，或其保守性变异蛋白。进一步，上面所提到的Ebi3亚基包括如SEQIDNO:2所示的氨基酸序列的蛋白，或其保守性变异蛋白。进一步，上面所述的亚基是由多核苷酸编码的，所述的P19亚基的核苷酸序列如SEQIDNO:3所示；所述的Ebi3亚基的核苷酸序列如SEQIDNO:4所示。本专利技术提供了一种重组载体，它含有上面所述的多核苷酸序列。进一步，所述的重组载体中还含有与所述的多核苷酸序列操作性相连的表达调控序列。本专利技术所述携带基因的载体是本领域已知的各种载体，如市售的载体、包括质粒、粘粒、噬菌体、病毒等。病毒载体可以是任何适当的载体，包括但不限于逆转录病毒载体、腺病毒载体、腺病毒相关病毒载体、疱疹病毒(例如单纯疱疹病毒、痘苗病毒及EB病毒)载体、甲病毒载体。真核表达载体可以是任何适当的表达载体，包括但不限于pCMV-Myc表达载体、pcDNA3.0表达载体、pcDNA3.1表达载体、pEGFP表达载体、pEFBos表达载体、pTet表达载体、pTRE表达载体、pReceiver-Lv18表达载体、pZE-LV122X表达载体或者在公知表达载体的基础上经改造的载体，比如pBin438、pCAMBIA1301等。优选地，所述表达载体为真核表达载体。优选地，所述真核表达载体为pReceiver-Lv18和pEZ-LV122X表达载体。本专利技术提供了一种宿主细胞，它含有所述的重组载体，或其基因组中整合有所述的多核苷酸。优选地，所述宿主细胞为CHO细胞。本专利技术提供了一种P19/Ebi3复合物的制备方法，它包括下列步骤:(a)培养所述的宿主细胞；(b)从培养物中分离出所述的复合物。本专利技术提供了一种抗体，所述抗体特异性识别和/或结合所述的复合物。优选地，所述的抗体为多克隆抗体。本专利技术提供了一种制备抗体的方法，所述方法包括：以所述的复合物免疫动物，从免疫后的动物体内分离出所述复合物的特异性抗体。优选地，所述抗体为多克隆抗体，用以下所述方法制备：用所述的复合物与完全弗氏佐剂混合(按照体积比1:2～2:1混合，优选地按照体积比1:1混合)后免疫小鼠，2周后用所述的复合物与不完全弗氏佐剂混合(按照体积比1:2～2:1混合，优选地按照体积比1:1混合)后强化免疫小鼠，按照相同的方式再次强化免疫2-3次，1-2周后从血清中分离出多克隆抗体。本专利技术提供了P19/Ebi3复合物在制备抑制B细胞向浆细胞分化药物中的应用。进一步，所述浆细胞为B细胞分化的(GL7+)浆细胞。进一步，P19/Ebi3复合物的特异性抗体、基于P19/Ebi3复合物的肿瘤疫苗、用于抑制P19/Ebi3复合物活性的蛋白质，抑制P19/Ebi3复合物活性的化合物。本专利技术提供了一种P19/Ebi3复合物在制备诊断系统性红斑狼疮产品中的应用。进一步，上面所提到的诊断产品包括：通过免疫检测、免疫共沉淀、ELISA或芯片来检测P19/Ebi3复合物的水平以诊断系统性红斑狼疮的产品。进一步，所述用免疫检测来诊断系统性红斑狼疮的产品包括：与P19/Ebi3复合物特异性结合的抗体；所述用免疫共沉淀来诊断系统性红斑狼疮的产品包括：与P19/Ebi3复合物中两个亚基同时特异性结合的抗体；所述用ELISA来诊断系统性红斑狼疮的产品包括：ELISA试剂盒；ELISA试剂盒包括与P19/Ebi3复合物特异性结合的抗体；所述用芯片来诊断系统性红斑狼疮的产品包括：蛋白芯片；其中蛋白芯片包括与P19/Ebi3复合物特异性结合的抗体。优选地，所述产品包括试剂盒和芯片。本专利技术提供了P19/Ebi3复合物抑制剂在制备治疗系统性红斑狼疮药物中的应用。进一步，本专利技术所述抑制剂包括：P19/Ebi3复合物的特异性抗体、基于P19\本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种分离的P19/Ebi3复合物，其特征在于，所述复合物是由P19和Ebi3蛋白组成的异二聚体。

【技术特征摘要】
1.一种分离的P19/Ebi3复合物，其特征在于，所述复合物是由P19和Ebi3
蛋白组成的异二聚体。
2.一种权利要求1所述的P19/Ebi3复合物的制备方法，包括下列步骤：
(a)培养宿主细胞；
(b)从培养物中分离出P19/Ebi3复合物。
3.一种抗体，所述抗体特异性识别和/或结合权利要求1所述的P19/Ebi3复合
物。
4.根据权利要求3所述的抗体，其特征在于，所述的抗体是多克隆抗体。
5.一种制备权利要求3或4所述的抗体的方法，其特征在于，所述方法包
括：以权利...

【专利技术属性】
技术研发人员：王仁喜，肖鹤，韩根成，陈国江，黎燕，沈倍奋，侯春梅，王小茜，魏寅祥，刘晓玲，张玉，
申请(专利权)人：中国人民解放军军事医学科学院基础医学研究所，
类型：发明
国别省市：北京;11