包含皂苷佐剂的疫苗组合物制造技术

本发明专利技术涉及包含皂苷佐剂的疫苗组合物。具体地，本发明专利技术提供了人类剂量的免疫原性组合物，包含与佐剂组合的抗原或抗原制剂，该佐剂包含以脂质体形式存在的来源于南美皂皮树的树皮的免疫活性皂苷级分和脂多糖，其中所述皂苷级分和所述脂多糖都以低于30μg的水平存在于所述人类剂量中。本发明专利技术进一步提供了人类剂量合适体积的佐剂组合物，包含1-30μg脂多糖和以脂质体形式存在的1-30μg免疫活性皂苷级分。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及改进的疫苗组合物、制备它们的方法，以及它们在医学中的用途。具体地，本专利技术涉及含佐剂的疫苗组合物，其中所述佐剂是脂质体制剂，包含皂苷和脂多糖。本专利技术进ー步涉及流感疫苗制剂和用于进行抗流感疾病免疫的免疫方案。
技术介绍
总是需要具有改进的免疫原性的新组合物或疫苗。作为ー种策略，已经用佐剂尝试和改进针对任何给定抗原产生的免疫应答。脂多糖(LPS)是革兰氏阴性细菌外膜的外小叶的主要表面分子，并且只存在于所述外小叶中。LPS通过血清补体和吞噬细胞阻止细菌破坏，并且參与用于集群的粘附。LPS是ー组结构上相关的复杂分子，大小是大约10，000道尔顿，并且由三个共价连接的区域组成⑴外部区域的O-特异性多糖链(O-抗原)(ii)核心寡糖中心区(iii)最内部的区域，其作为疏水性锚，包含携带长链脂肪酸的糖胺ニ糖单元。已经证明LPS的生物活性，例如致死毒性、致热性和佐剂性，与脂质A部分相关。相反，免疫原性与O-特异性多糖成分(O-抗原)相关。长期以来，已知LPS和脂质A都具有强佐剂作用，但这些分子的高毒性排除了将它们用于疫苗制剂。因此，为了減少LPS或脂质A的毒性而保持它们的佐剂性，进行了显著努力。1966年，从亲本(光滑)菌株的培养物分离了明尼苏达沙门氏菌突变体R595 (Luderitz 等，1966Ann. N. Y Acad. ScL 133 :349-374)。筛选了选择的菌落对一组噬菌体的裂解的易感性，仅仅选择了展示出窄范围敏感性(仅仅对ー种或两种噬菌体易感)的那些菌落进行进ー步研究。该努力导致分离了深粗糙(deep rough)突变菌株,其是LPS生物合成缺陷的，并且称作明尼苏达沙门氏菌R595。与其它LPS相比，由突变体明尼苏达沙门氏菌R595产生的那些具有相对简单的结构。(i)它们不含O-特异性区-这是导致从野生型光滑表型转变为突变的粗造表型并且导致失去毒力的特征(ii)核心区非常短-该特征增加菌株对多种化学物质的易感性(iii)脂质A部分由最多7个脂肪酸进行高度酰化。4'-单磷酰脂质A(MPL)可以通过从革兰氏阴性细菌的深粗糙突变株提取的LPS的酸水解获得，其保留LPS的佐剂特性，同时证明毒性减少超过1000的因数(由鸡胚卵中的致死剂量测量)(Johnson 等，1987Rev. Infect. Dis. 9Suppl :S512_S516)。LPS 典型地在、中等强度的无机酸溶液(如O. IM HCl)中回流大约30分钟。该过程导致在I位的去磷酸化，和在6’位的去糖化，产生MPL。3-0-脱酰基单磷酰脂质A(3D_MPL)可以通过MPL的温和碱水解获得，其具有进ー步减少的毒性，同时也保持佐剂性。參见US4, 912, 094(Ribi Immunochemicals)。碱水解典型地在有机溶剤,如氯仿/甲醇的混合物中通过用弱碱水溶液,如pH 10. 5的O. 5M碳酸钠饱和而进行。 关于制备3D-MPL的进ー步信息可以从例如US4, 912，094和W002/078637 (CorixaCorporation)犹得。阜苷是从阜树(Quillaja saponaria)的树皮提取的三職糖苷。粗阜苷已经广泛用作兽医佐剂。Quil-A是皂苷材料的ー种部分纯化的水性提取物。QS21是Quil A的Hplc纯化的无毒级分，其制备方法(作为QA21)公开于美国专利No. 5，057，540。举例说明，已经开发了具有佐剂的流感疫苗和抗人乳头瘤病毒(HPV)的疫苗。流感病毒是世界上最普遍存在的病毒之一，既可感染人类，也可感染家畜。流感产生重大的经济负担、发病率乃至死亡率。流感病毒是RNA包膜病毒，颗粒的直径大小约为125nm。流感病毒的基本组成为内部为与核蛋白缔合的核糖核酸(RNA)核衣壳或核心，其包绕着脂质双层结构和外层糖蛋白的病毒包膜。病毒包膜内层主要由基质蛋白组成，而外层主要是宿主来源的脂类物质。流感病毒包含两种表面抗原糖蛋白神经氨酸酶(NA)和血细胞凝集素(HA)，它们以10-12nm长的刺突显露在颗粒表面上。就是这些表面蛋白、尤其是血细胞凝集素，决定了流感亚型的抗原特异性。这些表面抗原渐进地、有时快速地经历某些导致流感病毒抗原性变异的改变。这些抗原性改变称为‘漂移’和‘转换’，是不可预见的，由免疫学观点看可能具有显著的影响，因为它们最终导致出现新流感株，能使病毒逃逸免疫系统，几乎毎年都引起众所周知的流行病。每个季节加入到流感疫苗中的流感病毒株由WHO协同国家卫生管理局以及疫苗生产商共同确定。HA是确定不同流感株的血清学特异性的最重要的抗原。此75_80kD的蛋白包含众多的抗原决定簇，其中几个位于在不同毒株中经历序列改变的区域中(毒株特异性决定簇)，其余的位于许多HA分子共有的区域中(决定簇所共有的)。流感病毒几乎毎年冬天都引起流行，甲型或こ型病毒的感染率在6周的时间段内高达40%。流感感染产生各种疾病状态，由亚临床感染至轻微的上呼吸道感染到严重的病毒性肺炎。典型的流感流行引起肺炎和下呼吸道疾病的发病率増加，证据是住院率或死亡率增加。疾病的严重性主要由宿主的年龄、其免疫状况和感染部位决定。65岁和以上的老年人尤其易受攻击，占发达国家所有流感相关死亡的80-90%。患有基础性慢性疾病的个体也非常有可能经历这种并发症。幼儿也可能患严重疾病。因此，这些群体尤其需要受保护。除了这些‘风险’群体以外，卫生当局还推荐对与老年人接触的健康成人接种。接种对控制毎年的流感流行起关键作用。目前可用的流感疫苗是灭活的流感疫苗或减毒活流感疫苗。灭活的流感疫苗包括3种可能形式的抗原制剂灭活的全病毒、纯化的病毒颗粒被去污剂或其它试剂破坏以溶解脂质包膜的亚病毒体(所谓的“分裂(split)疫苗”)或纯化的HA或NA(亚单位疫苗)。这些灭活的疫苗肌内(i.m.)或鼻内(i. η.)施用。所有种类的流感疫苗通常都是三价疫苗。一般来说，它们含有的抗原得自两种甲型流感病毒株和一种こ型流感病毒株。据单辐射免疫扩散(SRD) (J. Μ. Wood等An improved single radial immunodifiusion tecnnique ior the assay 01influenza haemaggiutinin antigen :adaptation for potency determination ofinactivated whole virus and subunit vaccines. J. Biol. Stand. 5(1977)237-247 ；J.M.Wood 等，International collaborative study of single radial diffusion andImmunoelectrophoresis techniques for the assay of haemaggiutinin antigen ofinfluenza virus. J. Biol. Stand. 9 (1981) 317-330)的检测，在大多数情况下，标准 O. 5ml注射剂量含有每种毒株的15 μ g血细胞凝集素抗原组分。目前可用的流感疫苗被认为在所有年龄组都是安全的(De D本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
...

【专利技术属性】
技术研发人员：P·范德帕佩利耶，
申请(专利权)人：葛兰素史密丝克莱恩生物有限公司，
类型：发明
国别省市：