一种制备鱼藤素的方法技术

本发明专利技术公开了一种制备鱼藤素的方法，方法是以澳氏灰毛豆为原料，采用热回流提取、双水相萃取、凝胶柱层析及制备液相色谱分离等步骤得到鱼藤素。该方法操作简单、得率高、产品纯度高。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于植物提取
，涉及。
技术介绍
鱼藤素(Deguelin),分子式C23H22O6,分子量为394. 42,主要分布于丑科植物中，为黄色结晶，mp. 180-182 °C。初钊辉等通过药理研究表明，鱼藤素可能通过抑制PTEN (Ser380)和TOKl (Ser241)蛋白的磷酸化，进而抑制Akt (Thr308)的磷酸化，间接抑制其下游GSK-3 β (Ser9)的磷酸化，最终诱导MCF-7细胞凋亡和抑制其增殖。管永光比较并分析了鱼藤素对人急性白血病细胞系K562细胞株、人结肠癌细胞系BEL-7402细胞株、人肺癌细胞系A549细胞株的细胞增殖抑制测定，结果表明，鱼藤素能显著抑制人急性白血病细胞系K562细胞株和人肺癌细胞系A549细胞株，但对人结肠癌细胞系BEL-7402细胞株抑制率较低。另外鱼藤素对Daudi细胞具有明显的增殖抑制作用，而对正常人外周血单个核细胞(PBMC)抑制作用不明显。目前现有技术主要采用乙醇浸提，提取时间长，提取效率低，且溶剂消耗量大，成本高；另有采用二氯甲烷、二氯乙烷、氯仿浸提，试剂毒性较大，对操作人员健康构成威胁，环境污染严重。中国专利申请号200610135408. 5采用超临界流体萃取、硅胶柱分离，该方法分离成本高。
技术实现思路
为克服现有技术的缺陷和不足，本专利技术提供，该方法操作简单、得率高、产品纯度高。为实现上述目的，本专利技术采用以下技术方案 ，其特征在于包括以下步骤 取澳氏灰毛豆叶组织破碎，采用丙酮加热回流提取，提取液浓缩得浸膏，再按比例加入乙醇和硫酸铵双水相系统加热混匀，分为上下两相，取出富含黄酮的乙醇相，加乙酸乙酯、水和氯化钠，混合均匀，取上相减压浓缩，通过凝胶柱层析，二氯甲烷-甲醇洗脱，洗脱液减压浓缩干燥，注入制备型高效液相色谱分离纯化，得到鱼藤素。所述丙酮提取中，丙酮体积百分比为50-80%。所述双水相系统中，乙醇体积占浸膏和乙醇体积之和的为10_30%(V/V)，硫酸铵的加入量为10-22% (W/V)，分相温度为40-50°C，静置3-5小时。所述乙酸乙酯反萃取中，分相温度为25_35°C，静置时间为1-3小时。所述制备高效液相色谱的流动相为甲醇乙腈水=8:22:70。本专利技术的优点在于本专利技术利用双水相萃取富集有效成分，继而采用凝胶柱层析和制备液相色谱分离分离纯化，环境污染小、产品纯度高，既适合小型试验，也可放大产业化生产。下面将结合具体实施方式进一步说明本专利技术，但本专利技术要求保护的范围并不局限于下列实施方式。具体实施方式 实施例I : 取澳氏灰毛豆叶组织破碎成粗粉，称取2kg用60%丙酮加热回流提取2小时，过滤除渣，将滤渣再用60%丙酮提取I次，提取I小时，合并两次滤液，减压浓缩得浸膏，加入硫酸铵和乙醇双水相系统，加入的乙醇体积占浸膏和乙醇体积之和的为13%，加入的硫酸铵质量分数为15%，加热混合均匀，在50°C条件下放置4h，静置，分为上、下两相，取上相加乙酸乙酯、水和氯化钠，其中乙酸乙酯的质量分数为23%，氯化钠的质量分数为11%，余量为水，混合均匀，系统在25°C下静置lh，分相，取上相，减压浓缩得浸膏，将浓缩浸膏加入葡聚糖凝胶柱，二氯甲烷-甲醇梯度洗脱，即用二氯甲烷-甲醇体积比分别为9:1、5:1、1:1、1:2的混合溶剂进行洗脱，收集含有鱼藤素的流分，减压回收试剂浓缩、干燥得粗品。取粗品用甲醇配制成20mg/ml浓度的溶液，用制备型高效液相色谱仪纯化，流动相为甲醇乙腈水=8:22:70，检测波长为271nm，收集主成分峰，旋转蒸发浓缩、真空冷冻干燥，得到鱼藤素纯品 4. 75g，含量 98. 4%。实施例2:取澳氏灰毛豆叶组织破碎成粗粉，称取2kg用50%丙酮加热回流提取2小时，过滤除渣，将滤渣再用50%丙酮提取2次，提取I小时，合并三次滤液，减压浓缩得浸膏，加入硫酸铵和乙醇双水相系统，加入的乙醇体积占浸膏和乙醇体积之和的为18%，加入的硫酸铵质量分数为11%，加热混合均匀，在45°C条件下放置3h，静置，分为上、下两相，取上相加乙酸乙酯、水和氯化钠，其中乙酸乙酯的质量分数为22%，氯化钠的质量分数为12%，余量为水，混合均匀，系统在28°C下静置I. 5h，分相，取上相，减压浓缩得浸膏，将浓缩浸膏加入葡聚糖凝胶柱，二氯甲烷-甲醇梯度洗脱，即用二氯甲烷-甲醇体积比分别为9:1、5:1、1:1、1:2的混合溶剂进行洗脱，收集含有鱼藤素的流分，减压回收试剂浓缩、干燥得粗品。取粗品用甲醇配制成15mg/ml浓度的溶液，用制备型高效液相色谱仪纯化，流动相为甲醇乙腈冰=8:22:70，检测波长为271nm，收集主成分峰，旋转蒸发浓缩、真空冷冻干燥，得到鱼藤素纯品 4. 58g，含量 98. 6%ο实施例3 取澳氏灰毛豆叶组织破碎成粗粉，称取2kg用80%丙酮加热回流提取2小时，过滤除渣，将滤渣再用80%丙酮提取I次，提取I. 5小时，合并两次滤液，减压浓缩得浸膏，力口入硫酸铵和乙醇双水相系统，加入的乙醇体积占浸膏和乙醇体积之和的为28%，加入的硫酸铵质量分数为22%，加热混合均匀，在40°C条件下放置5h，静置，分为上、下两相，取上相加乙酸乙酯、水和氯化钠，其中乙酸乙酯的质量分数为26%，氯化钠的质量分数为13%，余量为水，混合均匀，系统在35°C下静置3h，分相，取上相，减压浓缩得浸膏，将浓缩浸膏加入葡聚糖凝胶柱，二氯甲烷-甲醇梯度洗脱，即用二氯甲烷-甲醇体积比分别为9:1、5:1、1:1、1:2的混合溶剂进行洗脱，收集含有鱼藤素的流分，减压回收试剂浓缩、干燥得粗品。取粗品用甲醇配制成20mg/ml浓度的溶液，用制备型高效液相色谱仪纯化，流动相为甲醇乙腈冰=8:22:70,检测波长为271nm，收集主成分峰，旋转蒸发浓缩、真空冷冻干燥，得到鱼藤素纯品 4. 63g，含量 98. 1%。实施例4: 取澳氏灰毛豆叶组织破碎成粗粉，称取2kg用70%丙酮加热回流提取I. 5小时，过滤除渣，将滤渣再用70%丙酮提取I次，提取I. 5小时，合并两次滤液，减压浓缩得浸膏，加入硫酸铵和乙醇双水相系统，加入的乙醇体积占浸膏和乙醇体积之和的为21%，加入的硫酸铵质量分数为17%，加热混合均匀，在40°C条件下放置3h，静置，分为上、下两相，取上相加乙酸乙酯、水和氯化钠，其中乙酸乙酯的质量分数为20%，氯化钠的质量分数为10%，余量为水，混合均匀，系统在30°C下静置2h，分相，取上相，减压浓缩得浸膏，将浓缩浸膏加入葡聚 糖凝胶柱，二氯甲烷-甲醇梯度洗脱，即用二氯甲烷-甲醇体积比分别为9:1、5:1、1:1、1:2的混合溶剂进行洗脱，收集含有鱼藤素的流分，减压回收试剂浓缩、干燥得粗品。取粗品用甲醇配制成10mg/ml浓度的溶液，用制备型高效液相色谱仪纯化，流动相为甲醇乙腈冰=8:22:70，检测波长为271nm，收集主成分峰，旋转蒸发浓缩、真空冷冻干燥，得到鱼藤素纯品 4. 52g，含量 98. 7%。权利要求1.，其特征在于包括以下步骤取澳氏灰毛豆叶组织破碎，采用丙酮加热回流提取，提取液浓缩得浸膏，再按比例加入乙醇和硫酸铵双水相系统加热混匀，分为上下两相，取出富含黄酮的乙醇相，加乙酸乙酯、水和氯化钠，混合均匀，取上相减压浓缩，通过凝胶本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：刘东锋，郭琴，
申请(专利权)人：南京泽朗医药科技有限公司，
类型：发明
国别省市：