一种测定水中叶绿素a的方法，涉及一种测定水中叶绿素a的方法。是要解决现有的乙醇冷冻法测定叶绿素a的方法需要盐酸酸化，盐酸使用量不好控制，导致测定稳定性差、重现性差的问题。方法：取水样进行过滤，将截留有藻细胞的滤膜剪碎放入乙醇溶液中，冷藏后离心，收集上清液，再补加乙醇溶液，离心，收集上清液，合并上清液，加入乙醇溶液定容至10ml，得萃取液；将萃取液离心，得萃取液上清液，测定萃取液上清液在630nm、647nm、664nm和750nm波长下的吸光度值，计算水体中叶绿素a的含量。本发明专利技术无需研磨，可大大节省人力，并避免因转移萃取液而造成的叶绿素损失；不受盐酸酸化程度的影响；提取更完全，结果重现性好。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及。
技术介绍
目前水体中叶绿素的测定方法主要有国家环境保护局公布的《水和废水监测分析方法》(第四版)中推荐的丙酮研磨法测定叶绿素a，该方法是用醋酸纤维滤膜过滤水样，截留藻类的滤膜低温干燥6 8h后，加90%丙酮反复研磨提取，离心，用分光光计测定并计算chla含量。该方法缺点是①反复研磨提取中，叶绿素暴露在环境中，易发生光解；②丙酮易溶解乙酸显微滤膜，使滤膜上的叶绿素a粘滞于研磨器具；③丙酮对人体有毒，且挥发性强，对工作人员身体健康不利；④在反复添加溶剂和反复转移中，溶剂易粘与研磨器壁上， 造成叶绿素的流失。中国专利文献CN1631117公开了一种叶绿素a的测定方法，即乙醇研磨法。该方法是用O. Sum的醋酸纤维滤膜过滤水样，用90%乙醇浸泡研磨，离心萃取，用分光光度法测定chla，该方法使用90%乙醇代替丙酮，增加了方法的安全性，但也有不足之处①仍然需要研磨，过程繁琐，叶绿素易流失；②使用O. Sum的滤膜，孔径过大，会使部分藻类无所截留而流失。文献《乙醇法测定浮游植物叶绿素a含量的讨论》中使用了乙醇冷冻法，该方法是用O. 45 μ m醋酸纤维滤膜过滤水样，用90%乙醇冷冻浸泡截留有藻细胞的滤膜12h，之后离心萃取，用分光光度法分酸化前和酸化后两步测定水样在665nm和750nm处得吸光度值，根据公式计算。该方法优点是使用乙醇做萃取剂安全性高，并且不需要研磨；缺点是需要盐酸酸化，盐酸使用量不好控制，重现性差。
技术实现思路
本专利技术是要解决现有的乙醇冷冻法测定叶绿素a的方法需要盐酸酸化，盐酸使用量不好控制，导致测定稳定性差、重现性差的问题，提供。本专利技术测定水中叶绿素a的方法，按以下步骤进行一、取50 200ml水样，采用O. 45 μ m醋酸纤维滤膜进行过滤，真空泵压力控制在 O. 05MPa，获得截留有藻细胞的滤膜；二、将截留有藻细胞的滤膜剪碎放入装有6ml体积浓度为90%的乙醇溶液的离心管中，置于4°C冷藏12 24h ;三、然后将离心管于8000r/min 离心15min，收集上清液，再向离心管中补加4ml体积浓度为90%的乙醇溶液，再于8000r/ min离心5min，收集上清液，合并两次离心获得的上清液，并加入质量浓度为90%的乙醇溶液定容至10ml，得萃取液；四、将萃取液于8000r/min离心5min，得萃取液上清液，以质量浓度为90%的乙醇溶液做参比，用分光光度计测定萃取液上清液在630nm、647nm、664nm和 750nm波长下的吸光度值，按以下公式计算水体中叶绿素a的含量Chla = Ve/V ;其中 Chla 为水样中叶绿素 a 的含量，μ g/ L ;D630、D647、D664和D750分别为萃取液上清液在630nm、647nm、664nm和750nm波长下的吸光度值；Ve为萃取液的总体积，ml ；V为抽滤的水样体积，L0本专利技术无需研磨，可大大节省人力，并避免因转移萃取液而造成的叶绿素损失；本专利技术使用乙醇作为萃取液，对人体安全无毒害；测定步骤不需要盐酸酸化，因此不受盐酸酸化程度的影响；提取更完全，结果重现性好。具体实施例方式本专利技术技术方案不局限于以下所列举具体实施方式，还包括各具体实施方式间的任意组合。具体实施方式一本实施方式测定水中叶绿素a的方法，按以下步骤进行—、取50 200ml水样,采用O. 45 μ m醋酸纤维滤膜进行过滤,真空泵压力控制在 O. 05MPa，获得截留有藻细胞的滤膜；二、将截留有藻细胞的滤膜剪碎放入装有6ml体积浓度为90%的乙醇溶液的离心管中，置于4°C冷藏12 24h ;三、然后将离心管于8000r/min 离心15min，收集上清液，再向离心管中补加4ml体积浓度为90%的乙醇溶液，再于8000r/ min离心5min，收集上清液，合并两次离心获得的上清液，并加入质量浓度为90%的乙醇溶液定容至10ml，得萃取液；四、将萃取液于8000r/min离心5min，得萃取液上清液，以质量浓度为90%的乙醇溶液做参比，用分光光度计测定萃取液上清液在630nm、647nm、664nm和 750nm波长下的吸光度值，按以下公式计算水体中叶绿素a的含量Chla = Ve/V ;其中 Chla 为水样中叶绿素 a 的含量，μ g/ L ;D630、D647、D664和D750分别为萃取液上清液在630nm、647nm、664nm和750nm波长下的吸光度值；Ve为萃取液的总体积，ml ；V为抽滤的水样体积，L0本实施方式无需研磨，可大大节省人力，并避免因转移萃取液而造成的叶绿素损失；本实施方式使用乙醇作为萃取液，对人体安全无毒害；测定步骤不需要盐酸酸化，因此不受盐酸酸化程度的影响；提取更完全，结果重现性好。具体实施方式二 本实施方式与具体实施方式一不同的是步骤一中取50ml水样。其它与具体实施方式一相同。具体实施方式三本实施方式与具体实施方式一不同的是步骤一中取200ml水样。其它与具体实施方式一相同。具体实施方式四本实施方式与具体实施方式一不同的是步骤一中取IOOml水样。其它与具体实施方式一相同。具体实施方式五本实施方式与具体实施方式一不同的是步骤一中取150ml水样。其它与具体实施方式一相同。具体实施方式六本实施方式与具体实施方式一至五之一不同的是步骤二中置于4°C冷藏12h。其它与具体实施方式一至五之一相同。具体实施方式七本实施方式与具体实施方式一不至五之一同的是步骤二中置于4°C冷藏24h。其它与具体实施方式一至五之一相同。具体实施方式八本实施方式与具体实施方式一至五之一不同的是步骤二中置于4°C冷藏16 20h。其它与具体实施方式一至五之一相同。具体实施方式九本实施方式测定水中叶绿素a的方法，按以下步骤进行一、取IOOml水样，采用O. 45 μ m醋酸纤维滤膜进行过滤，真空泵压力控制在O. 05MPa，获得截留有藻细胞的滤膜；二、将截留有藻细胞的滤膜剪碎放入装有6ml体积浓度为90%的乙醇溶液的离心管中，置于4°C冷藏24h ;三、然后将离心管于8000r/min离心 15min,收集上清液，再向离心管中补加4ml体积浓度为90%的乙醇溶液，再于8000r/min离心5min，收集上清液，合并两次离心获得的上清液，并加入质量浓度为90%的乙醇溶液定容至10ml，得萃取液；四、将萃取液于8000r/min离心5min，得萃取液上清液，以质量浓度为 90%的乙醇溶液做参比，用分光光度计测定萃取液上清液在630nm、647nm、664nm和750nm 波长下的吸光度值，按以下公式计算水体中叶绿素a的含量Chla = Ve/V ;其中 Chla 为水样中叶绿素 a 的含量，μ g/L ； D630、D647、D664和D750分别为萃取液上清液在630nm、647nm、664nm和750nm波长下的吸光度值；Ve为萃取液的总体积，ml ；V为抽滤的水样体积，L0实验I :为了验证本方法对不同叶绿素浓度水样的相关性，取实验室培养的铜绿微囊藻藻液，从同一瓶藻液中分别取4ml、8ml、14ml、20ml和26ml于IOOOml容量瓶中，并分别用超纯水稀释至1000ml，作为水样，按照本实施方式的方法进行测定。测定时，相同的水样重复本文档来自技高网...
【技术保护点】
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：张素春，舒坦，杜茂安，安众一，杨雪，
申请(专利权)人：哈尔滨工业大学，
类型：发明
国别省市：
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