本发明专利技术公开了一种同时测定白酒中10种挥发性酚类化合物的方法，建立了分散液液微萃取-FLD-HPLC测定白酒中的挥发性酚方法。当分散剂为四氢呋喃、乙醚、乙醇、丙醇、异丙醇、丙酮或它们的混合物，萃取剂为二氯甲烷或氯仿，当二者混合比例为7∶3、6∶4、5∶5，总体积用量为1.5和2ml时，对5ml稀释酒样进行萃取，测定10种挥发性酚类化合物的加标回收率为81.0％～103.4％，RSD值为0.9％～3.1％，检测限为0.0025～0.0506μg/mL。该方法与传统液液萃取比较，具有样品用量少，有机溶剂用量小，前处理时间短等优点。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及，属于白酒检测
技术介绍
饮料酒中通常含有一些酚类物质。它们已经被发现存在于啤酒，葡萄酒还有蒸馏酒中。挥发性酚类化合物是饮料酒的重要香味组分，由于这一类组分对于酒的闻香、口味以及稳定性等方面均具有重要的作用，因此引起了许多研究者的注意。国内轻工业部食品发酵研究所1978年以茅台酒为主要研究对象，采用化学衍生法结合GC-FID/GC-MS对白酒中挥发性酚元化合物进行的分析研究中，前处理较繁琐，需要衍生化步骤，并且其中4-甲基愈创木酚、4-乙基愈创木酚的加标回收率只有40%左右。1990年青岛大学、中国医科院药研所和山东大学陆懋荪、刘春胜、阎长泰用溶剂萃取法提取白酒中的6种挥发酚(青岛大学学报，1990，3 (I)，102 105)，使用摸拟酒样 500mL，经过加抗氧化剂硫代亚硫酸钠，加2M NaOH溶液调节PH = 12. 5，使酚形成酚盐进入水相，蒸馏除去乙醇，用CH2Cl2萃取除去碱性和中性成分，再用4M HCl和6% NaHCO3水溶液调节PH = 8. 0，最后用CH2Cl2萃取酚，进行GC-FID分析。可见其前处理步骤繁琐，而且只在摸拟酒样进行了实验，6种挥发酚平均回收率为79%，苯酚的回收率为65%，6种挥发酚平均RSD值为6. 1%，不能达到检测方法回收率为80 120%，RSD值< 5%的要求，因此没有建立白酒中挥发性酚的分析检测方法。2010年江南大学生物工程学院朱燕.范来文.徐岩.应用浸入固相微萃取 (DI-SPME)与气相色谱-质谱联用(GC-MS)技术(DI-SPME和GC-MS分析白酒中游离酚类化合物，食品与发酵工业，2010,36(10) : 138-143，对白酒中挥发性酚类化合物进行了分析，该方法回收率达到85% 115%。但是采用DI-SPME和GC-MS技术，设备较昂贵，操作要求较高，推广普及应用会受到局限，而且该方法只分析了 7种挥发性酚类化合物。2006年，Assadi小组开发了新颖的液相微萃取技术，称作分散液-液微萃取 (DLLME)，该方法是建立在三元溶剂系统基础上的，是微型的液-液萃取，使用萃取剂的量可减少至微升级，该方法的优点是操作简单，快速，成本低，回收率高，富集倍数高，对环境友好，现多应用于水中微量物质的分析检测中。对于分散液-液微萃取应用到中国白酒中挥发性酚类物质测定的方法，未见报道。
技术实现思路
本专利技术的目的在于，提供，即建立分散液-液微萃取-高效液相色谱分析白酒中挥发性酚类物质的方法，用于我国白酒中挥发性酚类物质分析。本专利技术的技术方案。，包括下述步骤，将酒样按酒和水的体积比=I 0.5 I稀释后，取稀释酒样5mL装入塑料锥形离心管中，用2mL注射器向酒样中快速注入l-2mL由分散剂和萃取剂组成的混合溶剂，其中分散剂与萃取剂的体积比为7 3,6 4，或5 5，超声5-20min后，以3000-6000r/min离心5min，使有机相沉淀分离，下层有机相作为萃取液转入25mL梨形瓶中，在35°C 0. 075MPa 下旋转蒸发浓缩，到浓缩液的体积为0. 7 0. 9mL即可，所得浓缩液最后用I %冰醋酸水溶液定容至I 2. OmL,过0. 45 ii m滤膜，供高效液相色谱检测仪分析；高效液相色谱检测色谱条件色谱柱Synergi 4u Hydro-RP 80A, 150X4. 6mm ； 流动相由流动相A和流动相B组成，流动相A :冰醋酸/ 3 -环糊精水溶液=1/100 ;流动相 B :冰醋酸/乙腈/￠-环糊精水溶液=1/40/60，￠-环糊精水溶液的￠-环糊精浓度为 7. 05X10^-8. 81X lO-W/L ;梯度洗脱流动相设置:按体积计算，Omin :含流动相A 80%, 流动相B 20% ;30min :流动相A 40*%，流动相B 60% ;40min :流动相A30*%,流动相B 70% ； 柱流速1. 5mL/min ;柱温25°C ;进样量20uL ；突光检测器条件Ex= 270nm, Em = 315nm ；用外标法定量计算出HPLC进样中10种酚的浓度，再换算成酒样中10种酚的浓度。上述的同时测定白酒中10种挥发性酚类化合物的方法，所述P -环糊精水溶液的 ^ -环糊精浓度为7. 05X l(T3mol/L。上述的同时测定白酒中10种挥发性酚类化合物的方法，所述萃取剂为二氯甲烷或三氯甲烷。上述的同时测定白酒中10种挥发性酚类化合物的方法，所述分散剂为四氢呋喃、乙醚、乙醇、正丙醇、异丙醇或丙酮。上述的同时测定白酒中10种挥发性酚类化合物的方法，所述分散剂为以下混合溶剂四氢呋喃和乙醇、四氢呋喃和正丙醇、四氢呋喃和异丙醇、乙醇和正丙醇、乙醇和异丙醇、四氢呋喃和丙酮、丙醇和丙酮、或者异丙醇和丙酮。上述的同时测定白酒中10种挥发性酚类化合物的方法，所述分散剂与萃取剂的比例为6 4或5 5。上述的同时测定白酒中10种挥发性酚类化合物的方法，所述分散剂和萃取剂组成的混合溶剂的量为I. 5或2mL。上述的同时测定白酒中10种挥发性酚类化合物的方法，所得萃取液加入1%冰醋酸溶液或超纯水作为阻挡层，萃取液和阻挡层的体积比=I 0.1-0. 25，再旋转蒸发浓缩。上述的同时测定白酒中10种挥发性酚类化合物的方法，所述阻挡层为1%冰醋酸溶液，萃取液和阻挡层的体积比=I 0.2。上述的同时测定白酒中10种挥发性酚类化合物的方法，酒样用乙醇或超纯水调整其酒精度为20 35度。上述的同时测定白酒中10种挥发性酚类化合物的方法，白酒中10种挥发性酚类物质为苯酚、愈创木酚、对-甲酚、间-甲酚、邻-甲酚、4-甲基愈创木酚、4-乙烯基苯酚、 4-乙基苯酚、4-乙烯基愈创木酚和4-乙基愈创木酚。上述的同时测定白酒中10种挥发性酚类化合物的方法，所述白酒为中国特有的一种蒸馏酒。以曲类、酒母为糖化发酵剂，利用淀粉质原料，经蒸煮、糖化、发酵、蒸馏、陈酿和勾兑而酿制而成的各类酒。专利技术人为了采用分散液-液微萃取(DLLME)高效液相色谱-荧光检测(HPLC-FLD) 法对中国白酒中挥发性酚类物质的测定，进行了大量的实验，具体如下I实验部分I. I仪器与试剂Agilent 1100高效液相色谱仪；Agilent 1100突光检测器;Mttler AE200电子天平(感量0. lmg) ；MILLIP0RE Direct Q5型超纯水系统；旋转蒸发仪(上海亚荣生化仪器)，2. 5ml医用注射器(江西洪达医疗器械集团有限公司)，25ml锥形旋蒸瓶(江凌玻璃仪器)乙酸(分析纯，成都金山化学试剂有限公司)，二氯甲烷、三氯甲烷(分析纯，天津市富宇精细化工有限公司)，乙腈(色谱纯，MERCK公司)，乙醇(95%，分析纯，广东光华化学厂有限公司)，￠-环糊精(生化试剂，天津市科密欧化学试剂有限公司)，愈创木酚， 4-乙烯基愈创木酚,4-乙烯基苯酚,4-甲基愈创木酚,4-乙基愈创木酚(Aldrich公司)， 4-乙基苯酚(Fluka公司)，邻、对-甲酚(成都市科龙化工试剂厂)，间-甲酚(上海科丰化学试剂有限公司)，苯酚(重庆茂业化学试剂有限公司)，甲醇(成都市科龙化工试剂厂)， 四氢呋喃(成都市科龙化工试剂厂)，乙腈(成都市科龙化工试本文档来自技高网...
【技术保护点】
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：寻思颖，杨敏，冯永渝，彭黔荣，耿平兰，张倩，孙棣，董睿，黄卫红，吴力菊，
申请(专利权)人：贵州省产品质量监督检验院，贵州大学，
类型：发明
国别省市：
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