肺腺癌易感基因无创检测试剂盒制造技术

本发明专利技术提供了一种检测肺腺癌易感基因无创检测试剂盒。该试剂盒包括检测CYP1A1基因上Ile462Val及MSPI位点多态性，XRCC1基因上Arg399Gln位点多态性，MTHFR基因上C677T位点多态性，GSTM1基因缺失与否(Present/Null)位点多态性，GSTT1基因缺失与否(Present/Null)位点多态性的6个单核苷酸多态性位点基因型的特异性引物与DNA测序引物、PCR反应组件、PCR产物纯化组件、DNA测序反应组件等。本发明专利技术的试剂盒通过检测与肺腺癌发生密切相关的6个单核苷酸多态性位点的基因型来评估受检者肺腺癌患病的风险级别，并最终根据每一位受检者的基因检测结果从基因层面指导受检者有针对性的预防肺腺癌的发生，降低肺腺癌的发病几率。本发明专利技术采样方法是口腔黏膜细胞采样，无痛、无创、避免了交叉感染。测序检测结果准确，可靠，不必购置价格昂贵的进口专用仪器，方法易普及推广。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于分子生物学领域，涉及医学和生物技术，具体涉及一种肺腺癌易感基因检测试剂盒，根据检测结果从基因层面评估肺腺癌发病的风险级别，并作为预防和治疗肺腺癌的方向指导。
技术介绍
肺腺癌在各类肺癌中约占20% -30%。肺腺癌大多数起源于较小的支气管黏膜分泌粘液的上皮细胞，因此大多数腺癌位于肺的周围部分，呈球形肿块，靠近胸膜。女性病人较为多见，发病年龄亦较小。肺腺癌与吸烟无密切关系，一部分病例癌肿发生在肺纤维疤痕病变的基础上。腺癌在早期一般没有明显的临床症状，往往在胸部X线检查时才发现，因此通过一定检测手段筛查出易患肺腺癌的高危人群，指导这类人群提早预防肺腺癌的发生至关重要。研究表明，CYPlAl基因上Ile462Val及MSPI位点多态性，XRCCl基因上Arg399Gln 位点多态性，MTHFR基因上C677T位点多态性，GSTMl基因缺失与否(Present/Null)位点多态性，GSTTl基因缺失与否(Present/Null)位点多态性的6个单核苷酸位点多态性与肺腺癌的发生密切相关，可以作为预测受检者是否属于易患肺腺癌高危人群的科学依据。CYPlAl基因编码细胞色素P4501A1。该蛋白是重要的活化多环芳烃类致癌物的主要酶类。被激活的CYPlAl能够将多种环境中的有机物质如多环芳烃转化为细胞毒素或其他致癌物质，从而早呢更加癌症发生的危险。分子生物学研究表明，CYPlAl第462号氨基酸由Ile变为Val，以及CYP1A1MSPI位点T — C，会增加CYPlAl酶活性，可产生高诱导活性的CYPlAl酶，使多环芳烃类化合物活化速率加快，导致多种癌症的发生风险增高。国内外研究表明CYPlAl基因多态性与肺癌相关，大样本的中国人群的关联分析显示，该位点的多态现象是中国人群中重要的肺癌遗传易感因素之一。因此该位点可以作为肺癌易感性的遗传检测因子。XRCCl是人类X射线交错互补修复基因I。XRCCl基因编码的蛋白对因电离辐射和烷基化物引起的DNA单链断裂能起到有效的修复作用。XRCCl编码的蛋白与DNA连接酶 III、聚合酶β、多聚ADP核糖转移酶交互作用，参与DNA的碱基切除通路。分子生物学研究表明，XRCCl基因上第399号氨基酸Arg-Gln的替代，可引起XRCCl活性降低，导致个体的 DNA修复能力下降。MTHFR基因编码5，10-亚甲基四氢叶酸还原酶。在叶酸代谢过程中是叶酸活化的核心酶，研究发现MTHFR基因上C677T多态性位点突变可以导致酶的热稳定性和酶活性的下降，从而引起DNA甲基化出现异常，这种甲基化异常可能导致癌基因和抑癌基因表达异常，影响对细胞生长和功能的调控，促进癌症的发生。GSTMl全称Glutathione S-transferase Ml,中文名为谷胱;甘妝硫转移酶Ml。该基因最为常见的变异为整个基因的缺失，该缺失型导致整个基因的功能丧失，与多种癌症的发病相关，会大大提高癌症的发病率。原因可能就是对环境毒物和致癌物质的易感性提高导致的。分子生物学研究也表明，GSTTl缺失型的个体整个基因缺失并丧失功能，从而也相当于增加了环境毒素和致癌物质的浓度，提高了个体易患一系列类型癌症的风险。综上所述，鉴于CYPlAl基因，XRCCl基因，MTHFR基因，GSTMl基因，GSTTl基因在肺腺癌变过程中有着不可忽视的作用，可以将上述基因作为遗传易感因素来检测出受检者在肺腺癌发生相关的基因单核苷酸位点基因型，及时筛查出易患肺腺癌的高危人群，从而有针对性的预防和治疗肺腺癌，这对于降低肺腺癌的发病率有非常重要的意义。
技术实现思路
基于CYPlAl基因上Ile462Val及MSPI位点多态性，XRCCl基因上Arg399Gln位点多态性，MTHFR基因上C677T位点多态性，GSTMl基因缺失与否(Present/Null)位点多态性，GSTTl基因缺失与否(Present/Null)位点多态性的6个单核苷酸多态性位点基因型可作为评估肺腺癌发病的危险因子的基础上，本专利技术提供一种肺腺癌易感基因检测试剂盒。该试剂盒包括检测CYPlAl基因上Ile462Val及MSPI位点多态性，XRCCl基因上Arg399Gln位点多态性，MTHFR基因上C677T位点多态性，GSTMl基因缺失与否(Present/Null)位点多态性，GSTTl基因缺失与否(Present/Null)位点多态性的6个单核苷酸多态性位点基因型的特异性弓I物对及DNA测序引物； PCR反应组件(包括Taq酶、dNTP混合液、反应缓冲液、ddH20等)；PCR产物纯化组件(包括SAP酶、ExoI酶、ddH20等);DNA测序反应组件(包括BigDye mix，EDTA溶液、100%乙醇溶液、70%乙醇溶液、 HIDI 溶液、ddH20 等)。本专利技术试剂盒的组分和含量包括PCR 反应体系10 X PCR 反应缓冲液 2. 5ul ；25mM dNTP 混合液 O. 2ul ；5U/ul Taq DNA聚合酶O. 125ul ;20uM特异性引物对(每条引物各O. 25ul) ；ddH2019. 175ul。PCR 产物纯化体系lU/ul SAP 酶 O. 75ul ;10U/ul ExoI 酶 O. 375ul ; ddH203. 875ul。测序反应体系25%BigDye mix Iul ；3. 2uM DNA 测序引物 Iul ;125mMEDTA 溶液 Iul ; 100% 乙醇溶液 15ul ;70% 乙醇溶液 30ul ;HIDI 溶液 8ul ;ddH202ul。本试剂盒供一人份检测应用，试剂盒的保存温度为_20°C。具体实施例方式下面结合具体实施例，进一步阐述本专利技术。应理解，这些实施例仅用于说明本专利技术而不用于限制本专利技术的范围。下列实施例中未注明具体条件的实验方法，或按照制造厂商所建议的条件。除非另外说明，否则百分比和份数按重量计算。除非另行定义，文中所使用的所有专业与科学用语与本领域熟练人员所熟悉的意义相同。此外，任何与所记载内容相似或均等的方法及材料皆可应用于本专利技术中。文中所述的较佳实施方法与材料仅作示范之用。实施例I.检测试剂盒的使用I、抽提DNA模板刮取受检者口腔黏膜上皮细胞，用酚氯仿法抽提基因组DNA。2、PCR扩增反应使用检测试剂盒中的PCR反应组件，其中，含有下列引物对(I)CYPlAl (Ile462Val)正向引物5' CTTGCCTGTCCTCTATCCTTTG3'CYPlAl (Ile462Val)反向引物5' CAGGCTGAACCTTAGACCACA3'(2)CYP1A1 (MspI)正向引物5' GGGAGGAAGAAGAGGAGGTAG3'CYPlAl (MspI)反向引物5' AGGTTCTTGAAAGCAGGGACT3'(3)XRCCl(Arg399Gln)正向引物5' TGACCTTGCGGGACCTTAG3'XRCCl(Arg399Gln)反向引物5' CCAAGACCCTTTCACTCCTATC3'(4)MTHFR(C677T)正向引物5' AGGGAGGCTTCAACTACGC3'MTHFR(C677T)反向引物5' GCGGTTGAGGGTGTAGAAGT3'(5)G本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：潘加奎，姜丽，
申请(专利权)人：解码上海生物医药科技有限公司，
类型：发明
国别省市：