本发明专利技术提供了一种设计试剂盒，用于检测和筛选那些适于使用ES和其他新生血管生成抑制剂类药物治疗的癌症种类或癌症个体。本发明专利技术同时提供了筛选新生血管生成抑制剂的方法，特别是作用与ES相似的抑制剂。此外本发明专利技术提供了通过导入外源性NL至目标内皮细胞使它们更易被新生血管生成抑制剂(例如ES)杀死，从而增加内皮细胞对于新生血管生成抑制剂(例如ES)的敏感度的方法。
【技术实现步骤摘要】
本申请是申请日为2005年5月12日，申请号为200510011707. 3，专利技术名称为“”的中国专利申请的分案申请。
本项专利技术提出了一种新方法，可以用来寻找适于接受抗新生血管生成癌症疗法的癌症主体，特别是人类患者。本专利技术还提出一种能够搜索并筛选新生血管生成抑制剂的方法。新生血管生成抑制剂可以有效抑制细胞恶性增殖，尤其对新生血管生成依赖型的癌症效果更为显著。本项专利技术建立了用Nucleolin (以下简称“NL”)筛选新生血管生成抑制剂的方法。特别指出的是，该方法可以筛选出与End0Statin(血管内皮抑制素，以下简称“ES”) 作用机理相似的新生血管生成抑制剂。本项专利技术基于下列事实NL是ES的特异性受体，并参与ES抑制新生血管生成活性相关的信号传导途径。
技术介绍
对于不同的患者来说，癌症疗法的效果差异很大，这取决于一系列内在或外在因素。外在因素包括实施治疗时癌症的发展阶段，越早发现越有利于治疗和恢复，以及疗法相对强度，例如手术，化疗或放疗。内在因素包括病人免疫系统的健康程度，强健的免疫系统可以支撑时间长和强度大的疗法，从而帮助病人快速康复。在癌症疗法中，甚至整个医学界中，正在被探讨的一个关键问题是个体化用药。不同个体可能对同样的癌症药物有不同的忍耐度和敏感度，上述认识促使人们去努力寻找提高特定癌症疗法效果的方法。因此，由于个体差异，对某一个病人有效的药物未必对另外一个病人也有效。在癌症疗法领域中，人们试图通过病人的基因型来了解某一特定的药物是否对具有特定遗传特征的病人有效。一种新近发现的癌症疗法是通过ES来抑制肿瘤新生血管生成，阻断肿瘤供血从而达到抑制肿瘤生长的目的。为了实现ES疗法的个体化应用，最近有人试图通过基因芯片技术获得基因表达谱来研究ES为什么能够抑制内皮细胞新生血管生成，参考 M. Mazzanti, et al. , Genome Research, 14 1585-1593 (2004)。ES被认为是一种有效的癌症治疗药物，因为ES通过抑制新生血管生成来杀死肿瘤。肿瘤细胞需要通过新生血管进行扩散。肿瘤细胞群体的每一次增长都必须是汇集在肿瘤处的新毛细血管生成之后方可发生。这一现象几乎是普遍的多数人类的固体肿瘤或者血癌都是新生血管生成依赖型的。抗新生血管生成疗法还有其他的优势，包括低毒性，极小的耐药性，以及反复使用该疗法后可能会有较长时期的肿瘤休眠，在此期间便不需要继续治疗，参考 Boehm et al. , Antiangiogenic therapy of experimental cancer does not induce acquired drugresistance. Nature (1997) 390 :404-407o 然而，ES 的作用机理至今仍不明确。因此，ES疗法被同样地用在每一个癌症病人身上，而并未考虑到个体对该疗法的敏感性。人们进行了很多临床实验以期望找到有效的抗新生血管生成药物。如果能够以客观的标准选择出适合接受ES疗法的病人，那将是一个显著的进步。本项专利技术提出的一些方法和诊断试剂盒正是为了达到这一目标。
技术实现思路
本项专利技术提供了一种可以确定癌症主体对ES癌症疗法敏感度的试剂盒，包括可以标记NL的试剂以及使用说明。该试剂盒可以通过标记从主体身上采集的样品中的NL来检测样品中NL的含量。合适的主体应当是哺乳动物，更理想的选择是人类。在本专利技术的具体实现中，被标记的NL是细胞表面NL。一种情况下，用来标记NL的试剂是抗体，可以是多克隆抗体，若是单克隆抗体则更为理想。另外一种情况下，标记NL的试剂是核酸探针，可以是DNA探针，若是RNA探针则更为理想。本专利技术进一步提供了一种方法，可以用来确定对主体实行ES癌症疗法成功的可能性，包括检测从该主体采集的样品中NL的表达水平。确定该主体是否对ES癌症疗法敏感主要是依据上述检测到的NL的表达水平。本项专利技术提供了筛选血管生成抑制剂的方法，尤其是筛选那些与ES作用机理相似的分子。本项专利技术是以NL作为靶分子，运用传统的方法学，鉴定出可以和NL特异性结合的分子，同时该分子有抗新生血管生成的活性。基于NL是ES在细胞表面的受体这一事实， 用上述方法发现的分子应该具有与ES相似的作用机理。本项专利技术还提出了可以增加内皮细胞对ES的敏感度的方法。该方法是将外源的 NL引入靶向内皮细胞，使得NL在内皮细胞中相对于野生型过量表达，理想的靶向细胞应当是在正常情况下没有高水平的内源NL表达。该方法进一步提出，向靶向细胞中引入NL，可以使这些细胞对ES的抗新生血管生成活性更敏感而被ES有效杀伤。本项专利技术还提出可以用NL的抗体去检测细胞表面表达大量NL的靶向癌细胞(或内皮细胞)，这种癌症适宜用 ES去治疗。一个具体体现是，本项专利技术提供了一种得到有效的特异性针对NL的新生血管生成抑制剂的方法，包括如下步骤运用合适的结合试验在候选的分子库中筛出一系列能与 NL特异性结合的分子；用抑制新生血管生成的分析方法去验证这些分子对于抑制新生血管生成的有效性；最后，根据活性试验的结果在这些能与NL特异性结合的分子中筛选出能有效抑制新生血管生成的分子。另一个具体体现是，本项专利技术提供了一个筛选可以在体外抑制内皮细胞增殖的新生血管生成抑制剂的方法，包括如下步骤运用药学手段去发现特异性以NL作为靶向的分子；验证上一步获得的分子在抑制内皮细胞增殖中的有效性；确定上述步骤获得的能够抑制内皮细胞增殖的分子，并与ES比较它们在抑制新生血管生成中的效果。更进一步的体现是，本项专利技术提供一种可以增强靶细胞对新生血管生成抑制剂敏感度的方法，包括如下步骤将外源的NL导入靶细胞，从而获得一些能够表达外源NL的改造过的细胞，并且检测ES对这些细胞的致死率。另外一个体现是，本项专利技术提供了一种增强新生血管生成抑制剂针对内皮靶细胞的抗新生血管生成效果的方法，包括如下步骤将有效剂量的外源NL基因导入上述的靶细胞，NL就可以在细胞中表达，同时将上述新生血管生成抑制剂与经转化的靶细胞一起孵育， 就可以抑制靶细胞的生长。一个具体体现是，本项专利技术提供一种方法可以提高新生血管生成抑制剂控制病人肿瘤生长的效果，包括如下步骤用可行的手段，检测癌症病人内源NL的表达水平；根据该病人的NL表达水平来评价新生血管生成抑制剂对其有效程度，NL表达水平越高表明新生血管生成抑制剂疗法越有可能取得成功的治疗效果。该新生血管生成抑制剂的理想选择是 ES。另一个具体体现是，本项专利技术提供一种诊断试剂盒，可以确定对新生血管生成抑制剂疗法敏感的靶向癌细胞，试剂盒包括NL的抗体和制药学上有效的载体。还有一个具体体现是，本项专利技术提供了一种诊断试剂盒，可以确定对新生血管生成抑制剂疗法敏感的癌症主体，包括可以结合并显示NL的标记物以及说明书，可以用来测试从癌症主体收集的样品中NL的水平。附图说明图1显示Human Microvascular Endothelial Cell (人微血管内皮细胞，以下简称 “HMEC”)是一株迁移和增殖对ES敏感的细胞系。a，在标示浓度的ES的处理下，进行HMEC 迁移试验，PBS作为对照。b，在标示浓度的ES的处理下，进行HMEC增殖试验，PBS作为对照。细胞的数目用MTT法进行分析。结果的误差士 s本文档来自技高网...
【技术保护点】
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：罗永章，石虎兵，张卓兵，
申请(专利权)人：清华大学，北京普罗吉生物科技发展有限公司，
类型：发明
国别省市：
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