一种测定微囊藻上浮百分比的方法，配制BG11培养基，灭菌后置于超净工作台中冷却；采用无菌操作的方法对微囊藻进行接种，接种量为104～105cells/mL，然后将其置于设定温度为25℃，光照强度为100μmol/m2·s的光照培养箱中进行培养；待微囊藻生长到对数期后，实验温度范围为0～30℃，光照强度范围为0～500umol/m2·s，将其转至设定为实验所需要的温度和光照强度的光照培养箱中进行培养，隔一段时间取一次样；用移液枪吸取藻液，滴一滴在细胞计数板，计数板为细胞计数板(CELL-VU)，细胞计数板的计数室深度为0.02mm；将细胞计数板置于显微镜下，分别对上浮的微囊藻和总藻进行计数。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及，该方法有助于研究蓝藻水华的暴发机理，属于水环境污染防治机理研究领域。
技术介绍
随着我国工农业的迅猛发展以及城市化进程的加快，大量的含N、P等营养物质的工业废水、生活污水、农业污水排入到水体中，使中国的湖泊普遍呈现富营养化状态。在过去10多年中，全国许多地区出现水体污染、富营养化等问题。2010中国环境状况公报表明， 26个国控重点湖泊(水库)中，营养状态为重度富营养的1个，占3. 8% ；中度富营养的2 个，占7. 7% ；轻度富营养的11个，占42. 3% ；其他均为中营养，占46. 2%，总体形势不容乐观。湖泊富营养化严重阻碍了社会、经济的可持续发展。富营养化是指水体接纳过量的氮、磷等营养性物质，使水体中藻类以及其他水生生物异常过度繁殖，水体透明度和溶解氧下降，造成水质恶化，使水域生态和水功能受到阻碍和破坏的现象。当水体的富营养化发展到一定程度，就会引发蓝藻水华，它是水体中浮游生物暴发性繁殖，使水面呈现蓝色、红色、棕色、乳白色等异常颜色的现象。发生蓝藻水华后，往往会带来一系列的问题，如水体散发难闻气味、影响景观、危害供水安全等，有些藻种如微囊藻还会产生藻毒素，藻毒素对人畜具有严重的危害作用。因此，控制蓝藻水华具有重要的社会、经济、生态意义，而控制蓝藻水华首先要弄清水华暴发的机理。蓝藻水华发生的主要原因可分为化学因素、物理因素、生物因素等1、化学因素包括湖泊水体富营养化阶段藻类生长所需要的主要营养元素氮、磷、 微量元素等。氮是藻类自身的组成元素，磷直接参与藻类光合和呼吸作用、酶系统活化和能量转化等过程，两者都是藻类生长和水华发生不可缺少的；微量元素也是藻类生长的必要条件。2、物理因素适宜的温度、光照、风力、湖流。蓝藻水华一般在温度较高、风力较小、 湖流较缓的夏秋季节暴发，一般认为蓝藻生长的最佳水温是^°C。研究表明，光照强度和光暗比对蓝藻的生长有很大的影响。光照时间越长，蓝藻获得能量越多，有利于合成各种细胞组成成分，促进细胞生长繁殖。3、生物因素蓝藻具有较强的与其它水生植物、生物竞争机制，也具有休眠机制和二氧化碳浓缩机制等。休眠机制有的形成厚壁孢子，有的形成藻殖段，有的形成非专性结构的休眠体；环境适宜时，在底泥中生长，并由底泥上升到水体中，这些休眠体就复苏，繁殖，上浮形成水华。水华蓝藻还具有高效吸收利用外源无机碳的二氧化碳浓缩机制。在低浓度的(X)2介质中，蓝藻可以通过主动吸收、高效利用外源无机碳，在细胞内积累比介质高几百到几千倍的(X)2浓度。蓝藻具有的浮力调控机制让它们能够打破光和营养在位置上的分离，在竞争中处于有利地位，因此蓝藻的浮力调控被认为是蓝藻水华暴发的重要生物因素之一，研究蓝藻水华的暴发机理就必然不能缺少浮力调控方面的研究。研究浮力调控时一般需要测定蓝藻的上浮百分比这一指标。唐忠波等人(环境科学，2008，孟氏浮游蓝丝藻在模拟水体中的垂直分布与浮力规律)采用Sedgwick-Rafer沉积腔测定了这一指标，但Sedgwick-Rafer沉积腔计数室深度达1mm，只能测定群体生长的蓝藻的上浮百分比，对于单细胞蓝藻，由于其细胞直径极小，沉降与上浮速度缓慢，需要很长的时间才能沉降和上浮Imm的距离，给测定带来很大的误差；吴凯等人(生态环境学报，2011，水华蓝藻上浮特征与机理的试验研究) 采用通过测定上层水体中叶绿素a含量和总叶绿素a含量来计算出上浮百分比，该种方法也只适宜群体生长的蓝藻的上浮百分比的测定。因此目前还缺少一种准确测定室内生长的单细胞藻的上浮百分比的方法，这一点限制了蓝藻水华爆发机理的研究。微囊藻是很多蓝藻水华的优势藻种，一种有效的测定微囊藻的上浮百分比的方法对于蓝藻水华的暴发机理的研究具有重要意义。
技术实现思路
本专利技术目的是针对现今缺少测定微囊藻上浮百分比的方法的现状，本专利技术提供一种测定该指标的方法，可以有效的测定微囊藻上浮百分比，从而促进微囊藻水华发生的浮力调控机制研究。本专利技术技术方案是，，采用如下步骤①配制BGll培养基，倒入锥形瓶中，灭菌后置于超净工作台中冷却；②采用无菌操作的方法对微囊藻进行接种，接种量为IO4 105cellS/mL，然后将其置于设定温度为25°C，光照强度为lOOymol/m2 · s的光照培养箱中进行培养，每天用血球计数板进行计数，观察其生长情况；③待微囊藻生长到对数期后，实验温度范围为0 30°C，光照强度范围为0 500umol/m2 · s，取样时采用无菌手法；将其转至设定为实验所需要的温度和光照强度的光照培养箱中进行培养，隔一段时间取一次样。取样所用的移液枪在超净工作台中用紫外灭菌，移液枪头在高压灭菌锅中于120°C灭菌30min，取样在超净工作台中采用无菌操作方法进行。④取样前将微囊藻摇勻，然后用移液枪吸取藻液，滴一滴在细胞计数板，计数板为细胞计数板(CELL-VU)，细胞计数板的计数室深度为0. 02mm ；滴在细胞计数板(CELL-VU)的盖玻片边缘，使藻液缓缓渗入，多余的藻液用吸水纸吸去；⑤将细胞计数板置于冰箱中于4 6°C静置，30-40min后取出；⑥将细胞计数板置于显微镜下，分别对上浮的微囊藻和总藻进行计数；⑦上浮百分比权利要求1.，其特征是采用如下步骤①配制BGll培养基，倒入锥形瓶中，灭菌后置于超净工作台中冷却；②采用无菌操作的方法对微囊藻进行接种，接种量为IO4 105cellS/mL，然后将其置于设定温度为25°C，光照强度为lOOymol/m2 · s的光照培养箱中进行培养，每天用血球计数板进行计数，观察其生长情况；③待微囊藻生长到对数期后，实验温度范围为0 30°C，光照强度范围为0 500umol/m2 · s，取样时采用无菌手法，将其转至设定为实验所需要的温度和光照强度的光照培养箱中进行培养，隔一段时间取一次样；取样所用的移液枪在超净工作台中用紫外灭菌，移液枪头在高压灭菌锅中于120°C灭菌30min，取样在超净工作台中采用无菌操作方法进行。④取样前将微囊藻摇勻，然后用移液枪吸取藻液，滴一滴在细胞计数板，计数板为细胞计数板(CELL-VU)，细胞计数板的计数室深度为0. 02mm ；滴在细胞计数板(CELL-VU)的盖玻片边缘，使藻液缓缓渗入，多余的藻液用吸水纸吸去；⑤将细胞计数板静置；⑥将细胞计数板置于显微镜下，分别对上浮的微囊藻和总藻进行计数；⑦上浮百分比=^1K 100 ,其中，和π^、分别代表上浮和总共的藻数目。2.根据权利要求1测定微囊藻上浮百分比的方法，其特征是步骤⑤静置时的温度为 4 6°C，静置时间为30 40min。3.根据权利要求1测定微囊藻上浮百分比的方法，其特征是步骤⑥中的计数方法为对所有格子中的藻进行计数。全文摘要，配制BG11培养基，灭菌后置于超净工作台中冷却；采用无菌操作的方法对微囊藻进行接种，接种量为104～105cells/mL，然后将其置于设定温度为25℃，光照强度为100μmol/m2·s的光照培养箱中进行培养；待微囊藻生长到对数期后，实验温度范围为0～30℃，光照强度范围为0～500umol/m2·s，将其转至设定为实验所需要的温度和光照强度的光照培养箱中进行培养，隔一段时间取一次样；用移液枪吸取藻液，滴一滴在细胞计数板，计数板为细胞计数本文档来自技高网...
【技术保护点】
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：李正魁，周涛，赵琳，吴宁梅，
申请(专利权)人：南京大学，
类型：发明
国别省市：
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