弓形虫IgG抗体与总抗体联合检测试剂条制造技术

弓形虫IgG抗体与总抗体联合检测试剂条，涉及弓形虫IgG抗体与总抗体联合检测试剂。设2条试剂条，2条试剂条均设载体板、加样垫、胶体金垫、硝酸纤维膜、对照线和吸收垫；2条试剂条分别设弓形虫IgG抗体检测线和总抗体检测线。制备弓形虫重组抗原SAG1(P30)、SAG2(P22)、ROP2和GRA7；硝酸纤维素膜的点样；制备胶体金；胶体金与SAG1(P30)、SAG2(P22)、ROP2和GRA7的标记；制备免疫层析检测条。用于全血、血清、血浆及脑脊液等标本中弓形虫IgG抗体和总抗体的检测。标本量极小，不需特殊仪器，肉眼直接判读，简便快速，特异性强，灵敏度高，准确可靠，成本低，应用广泛。（*该技术在2021年保护过期，可自由使用*）

【技术实现步骤摘要】

本技术涉及一种弓形虫IgG抗体与总抗体联合检测试剂，尤其是涉及一种采用胶体金免疫层析技术(immimochromatography)进行的弓形虫IgG抗体与总抗体联合检测试剂条。
技术介绍
弓形虫病(Toxoplasmosis)是刚地弓形虫(Toxoplasmagondii)引起的一种严重危害人类健康的人兽共患寄生虫病，其病原体弓形虫可寄生在人及多种动物的有核细胞内，人群及动物普遍易感。该病广泛分布于世界各地，据统计全球约有10亿人被弓形虫感染(奚琳琳，李威.弓形虫致病机理，毒力及基因型研究进展.中国病原生物学杂志，2009,4(11) :859-861.)。弓形虫病在我国分布很广泛，全国各省、市、自治区均有弓形虫感染的报道，我国正常人群平均感染率在4% 9%左右(刘敏，陈晓光.中国人群弓形虫病的流行特征分析.寄生虫与医学昆虫学报，2010，17(3) :131-134.),特殊人群如肿瘤患者、精神病患者、先天缺陷婴幼儿、免疫抑制、免疫缺陷患者感染率更高。所幸的是极大多数免疫功能正常的成人或儿童被弓形虫感染后常无症状或仅有轻微症状，且多能自愈并获永久免疫力。但先天感染的胎儿、儿童以及免疫缺陷者被感染后，则预后极为严重，是造成艾滋病患者死亡的一个重要并发病。人类免疫缺陷病毒(HIV)感染者约有20% 80% 合并弓形虫感染，更重要的是它也是造成人类先天畸形、缺陷、智力低下、死胎、早产的重要病原体之一。弓形虫病的的诊断方法包括直接从脏器、血液、脑脊液等组织分离弓形虫进行病原学诊断，需要几天甚至几周时间，费时费力，在实际应用中价值不大。临床上常规检测主要是应用各种血清学方法，检测其特异IgG和IgM (周彬，张珏，王柯，等.弓形虫IgG和 IgM抗体双标记时间分辨荧光免疫分析的建立及其初步临床应用.中华检验医学杂志， 2010,33(010) :957-959.),血清学方法可以诊断先天性、急性和慢性弓形虫病，但由于大多数免疫缺陷的人或动物其抗弓形虫的IgG滴度不会上升或不会出现高的IgM滴度，所以不能有效地用血清学方法对患有免疫缺陷的人或动物诊断弓形虫病。另外，在抗原消失相当长时间后血清抗体滴度才会逐步下降，所以也不能应用于治疗效果评价。目前，检测IgG抗体存在较高的假阳性，而IgM抗体检测普遍灵敏度差等问题(韩靖云，刘倩，郭健.弓形虫感染实验室诊断的技术进展.检验医学，2009，M (5) :393-395.)。因此，对疾病的早期诊断帮助不大，急需建立一种具有高度敏感性，且价廉、快速、操作简单、不需特殊设备， 更适合于临床的早期诊断方法。弓形虫病的诊断与流行病学调查主要依赖于血清学试验，正常人体感染弓形虫多为隐性感染，当机体免疫力下降时，虫体大量繁殖，侵入除红细胞外的各组织细胞内寄生，造成各种组织的广泛炎症，从而出现临床症状。人类感染弓形虫后能诱导产生特异性抗体。感染早期IgM抗体增高，IgM在感染4个月后逐渐消失，在感染1个月后出现高浓度 IgG 抗体(KASPER D C, PRUSA A R, HAYDE Μ, et al. Evaluation of the vitroseciq immunodiagnostic system for detection of anti-toxoplasma immunoglobulin g and immunoglobulin m antibodies for confirmatory testing for acute toxoplasma gondii infection in pregnant women. Journal of clinicalmicrobiology,2009， 47(1) :164-168.)。因此，弓形虫IgG抗体是弓形虫病诊断和流行病学调查的一项重要指标。早期的血清学方法使用弓形虫循环抗原。研究和诊断用的弓形虫循环抗原是以弓形虫感染小鼠腹腔获得，这种方法花费大、获得的抗原量少且不纯(常混有宿主蛋白)， 因此假阳性也时有发生。随着分子生物学技术的普及及弓形虫抗原的相继克隆，将重组抗原应用于弓形虫实验已经越来越多。目前研究比较多的弓形虫的表面抗原(SAG1(P30)、 SAG2(P22)、SAG3(P43)、SAG4(P18))、虫体棒状体抗原(R0P1、R0P2)、致密颗粒蛋白(GRA1、 GRA7)等(熊美华，王秀珍，刘露霞，等.弓形虫速殖子抗原的提取及蛋白分析.中国寄生虫病防治杂志，2001，14(3) :237-238.)。采用重组DNA技术制备的重组抗原可以克服完整弓形虫抗原的缺点，能快速、经济地制备无限量特异重组弓形虫抗原。弓形虫抗体检测方法包括ELISA、Western-blot等，其特异性均较高。然而，面对严峻的防制形式，不但需要特异准确的检测手段，还需要一种更简便快捷的试剂来筛查，以便为临床和疾病防控提供对策。
技术实现思路
本技术的目的是提供一种弓形虫IgG抗体与总抗体联合检测试剂条。本技术设有第1试剂条和第2试剂条；所述第1试剂条设有第1载体板、第 1加样垫、第1胶体金垫、第1硝酸纤维膜(NC膜)、弓形虫IgG抗体检测线、第1对照线和第1吸收垫；所述第1加样垫、第1胶体金垫、第1硝酸纤维膜和第1吸收垫依次粘贴在第 1载体板上表面，第1加样垫的一端设在第1胶体金垫的一端上，第1胶体金垫的另一端设在第1硝酸纤维膜的一端上，第1吸收垫的一端设在第1硝酸纤维膜的另一端上，弓形虫 IgG抗体检测线和第1对照线依次设在第1硝酸纤维膜上；在弓形虫IgG抗体检测线处包被抗人IgG特异性片段γ链单克隆抗体，在第1对照线处包被羊抗弓形虫抗原SAGl (P30)、 SAG2 (P22)、R0P2 和 GRA7 的 IgG 抗体；所述第2试剂条设有第2载体板、第2加样垫、第2胶体金垫、第2硝酸纤维膜(NC 膜)、总抗体检测线、第2对照线和第2吸收垫；所述第2加样垫、第2胶体金垫、第2硝酸纤维膜和第2吸收垫依次粘贴在第2载体板上表面，第2加样垫的一端设在第2胶体金垫的一端上，第2胶体金垫的另一端设在第2硝酸纤维膜的一端上，第2吸收垫的一端设在第2硝酸纤维膜的另一端上，总抗体检测线和第2对照线依次设在第2硝酸纤维膜上；在总抗体检测线处包被抗人Ig单克隆抗体，在第2对照线处包被羊抗弓形虫抗原SAGl (P30)、 SAG2 (P22)、R0P2 和 GRA7 的 IgG 抗体。所述第1试剂条的第1加样垫与第2试剂条的第2加样垫之间可用玻璃纤维膜连接再放入试剂盒中(称单孔加样)，也可以不经玻璃纤维膜连接或搭桥(称双孔加样)。所述第1载体板和第2载体板可采用PVC板。以下给出本技术的制备方法1)制备弓形虫重组抗原 SAGl (P30)、SAG2 (P22)、R0P2 和 GRA74采用基因克隆技术，PCR扩增编码弓形虫抗原的DNA，并插入大肠杆菌中使其表达，得弓形虫重组抗原SAGl (P30)、SAG2 (P22)、R0P2和GRA7 ；2)硝酸纤维素膜的点样在弓形虫IgG抗体检测线上包被抗人IgG特异性片段Y链单克隆抗体，在总抗体检测线处包被抗人Ig单克隆抗体，在第1试剂条的第1对照线和第2试剂条的第2对照线处分别本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：刘莉莉，林丽蓉，张忠英，杨天赐，张长弓，
申请(专利权)人：厦门大学附属中山医院，
类型：实用新型
国别省市：