TTK肽及包含它们的疫苗制造技术

本文中描述了针对癌症的肽疫苗。特别地，提供了自TTK基因衍生的引发CTL的表位肽。还提供了抗原呈递细胞和分离的靶向这样的肽的CTL，以及用于诱导抗原呈递细胞或CTL的方法。本发明专利技术进一步提供了含有自TTK衍生的肽或编码这样的肽的多核苷酸作为活性组分的药物组合物。另外，本发明专利技术提供了使用本发明专利技术的自TTK衍生的肽、编码这样的肽的多核苷酸、或呈递这样的肽的抗原呈递细胞、或药物组合物来治疗和/或预防(即防范)癌症(肿瘤)、和/或防止其手术后复发的方法、以及诱导CTL的方法、用于诱导抗肿瘤免疫的方法。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】
优先权本申请要求2009年5月11日提交的美国临时申请No.61/216,017的权益，通过述及将其全部内容收入本文。本专利技术涉及生物科学领域，更具体的说是癌症治疗领域。特别地，本发明涉及作为癌症疫苗极其有效的新肽及用于治疗和预防肿瘤的药物。
技术介绍
已经证明，CD8阳性CTL可识别在主要组织相容性复合物(MHC)I类分子上找到的肿瘤相关抗原(TAA)所衍生的表位肽，然后杀死肿瘤细胞。从TAA的第一个例子——黑素瘤抗原(MAGE)家族被发现起，人们主要通过免疫学手段已经发现了许多其它TAA(NPL 1/Boon T，Int J Cancer 1993 May 8，54(2)：177-80；NPL 2/Boon T & van der Bruggen P，J Exp Med 1996 Mar 1，183(3)：725-9)。这些TAA中的一些目前正在作为免疫治疗靶标接受临床开发。能够诱导强力且特异性的抗肿瘤免疫应答的新TAA的鉴定保证了进一步开发，而且针对各种类型癌症的肽疫苗接种策略的临床调查正在进行中(NPL 3/Harris CC，J Natl Cancer Inst 1996 Oct 16，88(20)：1442-55；NPL 4/Butterfield LH et al.，Cancer Res 1999 Jul 1，59(13)：3134-42；NPL 5/Vissers JL et al.，Cancer Res 1999 Nov 1，59(21)：5554-9；NPL 6/van der Burg SH et al.，J Immunol 1996 May 1，156(9)：3308-14；NPL 7/Tanaka F et al.，Cancer Res 1997 Oct 15，57(20)：4465-8；NPL 8/Fujie T et al.，Int J Cancer 1999 Jan 18，80(2)：169-72；NPL 9/Kikuchi M et al.，Int J Cancer 1999 May 5，81(3)：459-66；NPL 10/Oiso M et al.，Int J Cancer 1999 May 5，81(3)：387-94)。不幸的是，许多当前癌症疫苗试验只显示出低客观应答率(NPL 11/Belli F et al.，J Clin Oncol 2002 Oct 15，20(20)：4169-80；NPL 12/Coulie PG et al.，Immunol Rev 2002 Oct，188：33-42；NPL 13/Rosenberg SA et al.，Nat Med 2004 Sep，10(9)：909-15)。因而，仍然需要用作免疫治疗靶的新TAA。为此，使用基因组范围的cDNA微阵列经由基因表达谱分析鉴定了在小细胞肺癌(SCLC)(PTL 1/WO2007/013665)和食管癌(PTL 2/WO2007/013671)中上调的多种基因。人们已经对这些基因进行了大量的研究，希望从中鉴定优秀候选物作为免疫治疗靶。为了在免疫疗法中特异性靶向癌细胞，优选的TAA应当主要由癌细胞表达，而正常健康组织具有有限的表达或没有表达。优选作为免疫疗法靶标的TAA是癌细胞增殖和存活不可缺少的TAA。此类TAA可最大程度地减小广为记载的、可归于因治疗驱动的免疫选择而发生的TAA删除、突变、或下调癌细胞免疫逃避的风险。使用含有23,040种基因的基因组范围cDNA微阵列来测定基因表达谱，TTK蛋白激酶(TTK)鉴定为在肺癌中上调的基因之一(NPL3/Kikuchi at al.，Int J Oncol.2006 Apr；28(4)：799-805)。在超过80％的具有肺癌和食管癌的患者中，TTK的表达在肿瘤细胞中特异性上调。同时，TTK在除睾丸外的任何其它正常生命器官中不表达。总之，这些事实提示TTK可作为癌症免疫疗法靶标用于具有TTK上调的肿瘤的患者。先前已经公开了自TTK衍生的具有针对外源表达TTK和HLA-A*0201的靶细胞的特异性CTL诱导能力的肽(参见WO2008/102557(PTL3)，其结果复制于本文中图4)。引用表专利文献[PTL 1]WO2007/013665[PTL 2]WO2007/013671[PTL 3]WO2008/102557非专利文献[NPL 1]Boon T，Int J Cancer 1993 May 8，54(2)：177-80[NPL 2]Boon T & van der Bruggen P，J Exp Med 1996 Mar 1，183(3)：725-9[NPL3]Kikuchi at al.，Int J Oncol.2006 Apr；28(4)：799-805
技术实现思路
本专利技术至少部分地基于可充当免疫治疗靶标的新肽的发现。由于TAA有时被免疫系统察觉为“自身”并因此往往没有先天免疫原性，合适的靶标的发现是极为重要的。如上所述，TTK(典型氨基酸序列和基因序列分别显示于但不限于SEQ ID NO：40和SEQ ID NO：39，而且典型基因序列还可得自例如GenBank登录号NM_003318)已经被鉴定为在癌症中，包括但不限于肺癌、膀胱癌、乳腺癌、宫颈癌、胆管细胞癌、慢性髓细胞性白血病(CML)、结肠直肠癌、子宫内膜异位症、食管癌、胃癌、弥漫型胃癌、肝癌、非小细胞肺癌(NSCLC)、淋巴瘤、骨肉瘤、卵巢癌、胰腺癌、前列腺癌、肾癌、小细胞肺癌(SCLC)、软组织肿瘤和睾丸肿瘤中上调。因此，本专利技术聚焦于TTK作为癌症/肿瘤免疫疗法靶标的候选者。本专利技术进一步涉及TTK的基因产物的拥有诱导对TTK特异性的CTL的能力的特定表位肽的鉴定。如下文详细讨论的，使用自TTK衍生的HLA-A*0201结合候选肽刺激从健康供体获得的外周血单个核细胞(PBMC)。然后建立了具有针对经每一种候选肽冲激的HLA-A2阳性靶细胞的特异性细胞毒性的CTL系。在那些CTL系中，用具有SEQ ID NO：3的氨基酸序列的肽诱导的CTL系显示针对表达HLA-A*0201和TTK的细胞的显著的有力的特异性细胞毒性。这些结果证明，这些肽(尤其是具有SEQ ID NO：3的氨基酸序列的肽)是能诱导针对表达TTK的细胞的强力且特异性的免疫应答的HLA-A2限制表位肽。另外，结果指明，TTK具有强免疫原性，而且它的表位是癌症/肿瘤免...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2009.05.11 US 61/216,0171.一种分离的肽，其包含SEQ ID NO：3的氨基酸序列。
2.一种具有细胞毒性T淋巴细胞(CTL)诱导能力的分离的肽，其中所述肽包
含SEQ ID NO：3的氨基酸序列，其中替换、删除、或添加了1个、2个、
或几个氨基酸。
3.权利要求2的分离的肽，其中该肽具有下列特征之一或二者：
(a)自N端起的第二个氨基酸是选自下组的氨基酸，或被修饰成选自下
组的氨基酸：亮氨酸和甲硫氨酸；和
(b)C端氨基酸是选自下组的氨基酸，或被修饰成选自下组的氨基酸：
缬氨酸和亮氨酸。
4.权利要求1至3任一项的分离的肽，其中所述肽是九肽。
5.一种分离的多核苷酸，其编码权利要求1至4任一项的肽。
6.一种用于诱导CTL的作用剂，其中该作用剂包含一种或多种权利要求1
至4任一项的肽或者一种或多种权利要求5的多核苷酸。
7.一种用于治疗和/或预防癌症和/或防止其手术后复发的药物作用剂，其
中该作用剂包含一种或多种权利要求1至4任一项的肽或者一种或多种
权利要求5的多核苷酸。
8.权利要求7的药物作用剂，其配制为用于对HLA抗原为HLA-A2的受试者
施用。
9.权利要求8的药物作用剂，其中所述HLA-A2为HLA-A*0201。
10.权利要求7或8的药物作用剂，其中该作用剂配制为用于癌症治疗。
11.一种用于诱导具有CTL诱导能力的抗原呈递细胞(APC)的方法，其包括
选自下组的步...

【专利技术属性】
技术研发人员：中村佑辅，角田卓也，大泽龙司，吉村祥子，渡边朝久，
申请(专利权)人：肿瘤疗法科学股份有限公司，
类型：发明
国别省市：