包含具有非常规生物活性的天冬氨酰‑tRNA合成酶的组合物和方法技术

提供了具有非常规生物活性的分离的天冬氨酰‑tRNA合成酶多肽和多核苷酸，以及与其相关的组合物和方法。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】包含具有非常规生物活性的天冬氨酰-tRNA合成酶的组合物和方法相关申请的交叉引用本申请根据35U.S.C.§119(e)，要求于2009年3月31日提交的美国临时专利申请第61/165,194号的权益，通过引用的方式将其整体并入本文。关于序列表的声明以文本格式代替纸制版提供本申请相关的序列表，并且在此通过引用并入本说明书。含有序列表的文本文件的名称为120161_412PC_SEQUENCE_LISTING.txt。该文本文件为13KB，创建于2010年3月31日，并通过EFS-Web以电子方式提交。专利技术背景专利
本专利技术通常涉及天冬氨酰-tRNA合成酶(AspRS)多肽的形式、包含该多肽的组合物和使用该多肽的方法。相关技术的描述在翻译过程中，催化tRNA分子氨酰化的氨酰-tRNA合成酶对于遗传信息的解码是必不可少的。在高等真核生物中，氨酰-tRNA合成酶与其他多肽结合以形成超分子多酶复合物。每个真核生物的tRNA合成酶都由核心酶和附加于该核心酶氨基末端或羧基末端的另外的结构域组成，所述核心酶与原核生物的tRNA合成酶的对应部分密切相关。例如，人酪氨酰-tRNA合成酶(TyrRS)具有的羧基末端结构域不是原核生物和低等真核生物TyrRS分子的一部分。已经证实，数种氨酰-tRNA合成酶具有不同于其参与翻译的非常规功能。例如，小酪氨酰-tRNA合成酶(mini-tyrosyltRNA)(小TyrRS)，即对应于氨基酸残基1-364并且被多形核细胞弹性蛋白酶和纤维蛋白溶酶切割的TyrRS的N末端结构域，是氨酰tRNA合成酶“AARS”多功能细胞因子样蛋白和肽的一员。在体外，小TyrRS表现出刺激嗜中性粒细胞激活和趋化作用、内皮细胞增殖和迁移，并且在鸡胚绒毛尿囊膜(CAM)和小鼠基质胶分析中促进血管生成。小TyrRS具有ELR基序，所述ELR基序与诸如IL-8的CXC趋化因子相似，赋予其趋化因子或血管生成活性。与其它包含ELR的细胞因子相似，该基序的突变抑制小TyrRS结合并刺激白细胞和血管生成。此外，已经证实，TrpRS的截短形式具有血管生成的特性。在正常的人细胞中，可以检测到两种形式的TrpRS：由全长分子(氨基酸残基1-471)构成的主要形式和次要的截短形式。通过前mRNA的选择性剪接使氨基末端结构域缺失而产生所述次要形式。已经确定，小TrpRS的氨基末端是位于全长TrpRS分子的第48位的蛋氨酸残基。可选择地，可以通过蛋白质水解产生截短的TrpRS。例如，牛TrpRS在胰腺中高表达并被分泌进胰液中，由此产生截短的TrpRS分子。其他研究表明，小TrpRS抑制VEGF诱导的细胞增殖和迁移(Wakasugietal.,Proc.Natl.Acad.Sci.99:173-177(2002))。尤其是，鸡CAM分析表明，小TrpRS阻断VEGF的血管生成活性。相比之下，全长TrpRS不抑制血管生成。因此，移除前48个氨基酸残基可以暴露TrpRS的抗血管生成的活性。因此，与TyrRS一样，某些形式的TrpRS具有除tRNA的氨酰化之外的活性。鉴于对于其他形式的TyrRS和TrpRS相关的非常规活性和治疗相关活性的这些发现，有必要鉴定其他氨酰-tRNA合成酶蛋白的生物学相关的形式和/或活性，从而开发出该蛋白家族的全部治疗潜能。因此，本专利技术满足这些需要并且提供其他相关的优势。专利技术概述本专利技术源于下述发现：某些天冬氨酰-tRNA合成酶(AspRS)多肽具有治疗相关的非常规生物活性。因此，一方面，本专利技术提供具有至少一种非常规生物活性的分离的AspRS多肽，以及基本上保留所述非常规活性的所述AspRS多肽的活性片段和变体。本文使用的“非常规活性”通常是指本专利技术的AspRS多肽所具有的、除了氨酰化，且更具体地，除了将天冬氨酸添加至tRNAAsp分子以外的活性。如本文详述，在某些实施方案中，本专利技术的AspRS多肽表现出的非常规生物活性可以包括但不限于：细胞增殖的调节、凋亡的调节、炎症的调节、细胞分化的调节、血管生成的调节、细胞结合的调节、Akt介导的细胞信号转导的调节、细胞代谢的调节、细胞因子产生或活性的调节和toll样受体信号转导的调节等。在某些实施方案中，本专利技术的AspRS多肽是全长哺乳动物AspRS蛋白的连续片段。在更具体的实施方案中，所述AspRS多肽是SEQIDNO:1所示的人AspRS蛋白序列的连续片段。作为说明，所述片段基本上可以为任何长度，只要它们不是全长，并且进一步地，只要其保留至少一种目的非常规生物活性。在某些示例性实施方案中，本专利技术的AspRS多肽的大小在长度上为约20-50、20-100、20-200、20-300、20-400或20-500个氨基酸。在其他实施方案中，本专利技术的AspRS多肽的大小在长度上为约50-100、50-200、50-300、50-400或50-500个氨基酸。在其他实施方案中，本专利技术的AspRS多肽的大小在长度上为约100-200、100-300、100-400或100-500个氨基酸。在其他示例性实施方案中，本专利技术的AspRS多肽的大小在长度上为约200-300、200-400或200-500个氨基酸。在本专利技术的其他实施方案中，AspRS多肽包含AspRS蛋白序列的片段的活性变体(即，保留至少一种目的非常规生物活性)，所述AspRS蛋白序列例如SEQIDNO:1所示的人AspRS蛋白序列。在更具体的实施方案中，所述活性变体是这样的多肽，该多肽沿其长度与SEQIDNO:1所示的人天冬氨酰-tRNA合成酶序列具有至少70％、80％、90％、95％或99％的同一性。本专利技术的其他实施方案提供了天然存在的或非天然存在的、具有一种或多种非常规活性的AspRS剪接变体和点突变体。在某些实施方案中，所述AspRS包含两亲性螺旋结构域。在本专利技术更具体的实施方案中，AspRS多肽包含SEQIDNO:1所示的人AspRS序列的片段，所述片段基本上由氨基酸残基1-154、1-171、1-174、1-31、399-425、413-476或397-425、或以上的活性片段或变体组成，所述活性片段或变体基本上保留至少一种目的非常规生物活性。在其他具体实施方案中，所述AspRS多肽不是NCBI登录号NP001340所示的多肽。按照本专利技术的另一方面，提供了包含至少一种如本文所述的AspRS多肽和异源融合伴侣的融合蛋白。按照本专利技术的另一方面，提供了编码本文所述的多肽和融合蛋白的分离的多核苷酸、以及包含这些多核苷酸的表达载体和包含这些表达载体的宿主细胞。还包括与AspRS多核苷酸特异性杂交的寡核苷酸。在某些实施方案中，所述寡核苷酸是引物、探针或反义寡核苷酸。其他实施方案涉及靶向AspRS多核苷酸的RNAi试剂。按照本专利技术的另一方面，提供了结合剂(例如，抗体或其抗原结合片段)，其对于本专利技术的AspRS多肽或其细胞结合伴侣之一具有结合特异性。在某些实施方案中，所述结合剂是抗体、其抗原结合片段、肽、肽模拟物、小分子或适体。在某些实施方案中，所述结合剂拮抗所述AspRS多肽的非常规活性。在其他实施方案中，所述结合剂激动所述AspRS多肽的非常规活性。按照本专利技术的另一方面，提供了组合物，例如药物组合物，其包本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2009.03.31 US 61/165,1941.分离的天冬氨酰-tRNA合成酶AspRS多肽，其由SEQIDNO：1的氨基酸残基1-154组成，或者通过发生在(a)SEQIDNO：1的残基1-154的C-末端的1、2或3个氨基酸的添加、删除和/或(b)SEQIDNO：1的残基1-154的两亲性螺旋区的1、2或3个氨基酸的保守取代和/或(c)SEQIDNO：1的残基1-154的N-末端的1个氨基酸的删除而区别于SEQIDNO：1的残基1-154，并且其中所述AspRS多肽包含两亲性螺旋并具有抗炎活性。2.如权利要求1所述的分离的AspRS多肽，其通过在C-末端添加1、2或3个氨基酸而区别于SEQIDNO：1的残基1-154。3.如权利要求1所述的分离的AspRS多肽，其通过在C-末端删除1、2或3个氨基酸和/或通过在N-末端删除1个氨基酸而区别于SEQIDNO：1的残基1-154。4.如权利要求1所述的分离的AspRS多肽，其通过在所述两亲性螺旋区的1、2或3个氨基酸的保守取代而区别于SEQIDNO:1的残基1-154。5.如权利要求1所述的分离的AspRS多肽，其通过发生在SEQIDNO：1的残基1-154的C-末端的1或2个氨基酸的添加、或删除而区别于SEQIDNO：1的残基1-154。6.如权利要求5所述的分离的AspRS多肽，其通过在C-末端添加1或2个氨基酸而区别于SEQIDNO：1的残基1-154。7.如权利要求5所述的分离的AspRS多肽，其通过在C-末端删除1或2个氨基酸和/或在N-末端删除1个氨基酸而区别于SEQIDNO：1的残基1-154。8.如权利要求4所述的分离的AspRS多肽，其通过在所述两亲性螺旋区的1或2个氨基酸的保守取代而区别于SEQIDNO:1...

【专利技术属性】
技术研发人员：赖安·A·亚当斯，洪非，赵基，克瑞斯迪·佩耶尔，伊娃·R·阿莫尔，肯尼·达里格，莱斯利·A·格林尼，伊夫·马瑞曼，
申请(专利权)人：ATYR医药公司，
类型：发明
国别省市：