本发明专利技术公开了一种检测登革病毒抗体的胶体金试纸条及其制备方法和应用，胶体金试纸条包括反应支撑物、连接于反应支撑物上表面中部的硝酸纤维膜，硝酸纤维膜起始端的上表面与吸水垫部分连接、硝酸纤维膜末端的上表面与金标抗体保护膜部分连接，金标抗体保护膜的上表面部分连接有样品垫，金标抗体保护膜包括膜本体、及其上的胶体金标记的SPA或重组登革病毒E蛋白涂层，硝酸纤维膜上靠近其起始端处设置质控条带、靠近其末端处设置有检测条带。本发明专利技术建立登革病毒抗体的快速检测方法，建立的检测登革病毒的胶体金试纸条，能快速、灵敏、特异、准确地检测样品中的登革病毒抗体，并可实现定量检测、适用于现场的快速检测及监测。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于生物检测领域，具体涉及一种检测登革病毒抗体的胶体金试纸条及其制备方法和应用。
技术介绍
登革热是由登革病毒(Dengu e virus，DV)所致的一组虫媒性传染病，传播媒介主要是埃及伊蚊。感染DV后可发生登革热(Dengue fever, DF)、登革出血热(Dengu e hemorrhagic fever，DHF)、登革休克综合征(Dengue shock syndrome, DSS)。DV 有 4 种血清型，即DV1、2、3、4型。DV引起的感染广泛流行于全球热带和亚热带地区，特别是东南亚、 西太平洋、中南美洲、非洲，发病率和病死率均较高，是最为严重的一种虫媒病毒性疾病。全球有100多个国家有该病发生，每年约5 000万人感染，50万人需入院治疗，病死率高达 5%。DV感染的实验室诊断，主要有病毒分离、抗体和抗原检测、基因诊断等。WHO曾经把血凝抑制试验(H I)作为登革热的标准诊断方法。然而，病毒分离所需时间较长，达不到快速诊断的目的，而常规的血清学诊断又因存在广泛的交叉反应而受到干扰。胶体金标记的免疫层析方法具有快速、简便、不需要依赖重要装备、能够实现现场检测等特点，成为目前传染病快速诊断中研究的热点。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供一种使用方便、检测快捷的检测登革病毒抗体的胶体金试纸条，本专利技术的另一目的是提供一种上述试纸条的制备方法和应用。为实现上述目的，本专利技术一种检测登革病毒抗体的胶体金试纸条，包括反应支撑物、紧密连接于反应支撑物上表面中部的硝酸纤维膜，硝酸纤维膜起始端的上表面与吸水垫部分重叠连接、硝酸纤维膜末端的上表面与金标抗体保护膜部分重叠连接，金标抗体保护膜的上表面部分重叠连接有样品垫，其中，金标抗体保护膜包括膜本体、及均勻涂布在其上的胶体金标记的金黄色葡萄球菌A蛋白(Staphylococal Protein A，SPA)或重组登革病毒E蛋白涂层，硝酸纤维膜上靠近其起始端处设置有羊抗兔IgG或羊抗重组登革病毒E蛋白IgG包被的质控条带、靠近其末端处设置有重组登革病毒E蛋白包被的检测条带。进一步，所述反应支持物为PVC板，吸水垫为滤油纸。进一步，所述金标抗体保护膜为玻璃纤维膜、聚脂膜或滤纸纤维。进一步，所述样品垫为玻璃纤维膜、聚脂膜或滤纸纤维。进一步，所述试纸条整体的外部包裹设置有外壳，该外壳上对应于所述样品垫处设置有样品孔，外壳上对应于所述质控条带、检测条带处设置有观察窗。一种上述胶体金试纸条的制备方法，具体为1)制备胶体金；2)利用制得的胶体金标记SPA蛋白或重组登革病毒E蛋白；3)用隔流喷金划线机以设定喷膜速度将羊抗兔IgG或羊抗重组登革病毒E蛋白IgG喷涂到硝酸纤维膜的起始端以形成质控条带，将重组登革病毒E蛋白喷涂到硝酸纤维膜的末端以形成检测条带；4)将胶体金标记的SPA蛋白或重组登革病毒E蛋白均勻涂布在玻璃纤维膜上，并烘干或冷冻干燥，制成金标抗体保护膜；5)在反应支撑物上表面中部设置硝酸纤维膜，硝酸纤维膜起始端的上表面与吸水垫部分重叠连接，硝酸纤维膜末端的上表面与金标抗体保护膜部分重叠连接，金标抗体保护膜的上表面部分重叠连接样品垫；6)将步骤5)中形成的试纸切成规格大小的条，进行干燥、装壳，以形成试纸条。进一步，所述步骤1)中制备胶体金的具体步骤为1)制备HAuCl4水溶液磁力搅拌下加入HAuCl4,同时加入柠檬酸三钠水溶液，颜色稳定后继续加热，冷却至室温后加纯水补足至设定值，4 ！避光保存；2)用K2COjfpH 值为 6. 0-6. 4 ；3)将胶体金调至pH 6. 0-6. 4，用PB稀释SPA至0. 2 mg/ml ； 4)保持胶体金稳定。进一步，所述步骤3)中，喷膜速度为10-100mm/s;所述重组登革病毒E2蛋白的加入量为0. l_5mg/ml，该重组抗原的稀释液可以为PBS ；羊抗兔IgG或羊抗重组登革病毒E 蛋白IgG的浓度为0. 1-5 mg/ml。进一步，将胶体金标记的SPA蛋白或重组登革病毒E蛋白的pH为6. 0-6. 4 ；所述样品垫采用含有NP 40的磷酸盐缓冲液对玻璃纤维素膜进行预处理。一种上述胶体金试纸条的应用，将所述胶体金试纸条与胶体金生物传感器有机整合成胶体金定量检测系统，以正确判读该试纸条检测结果。本专利技术基于SPA蛋白或重组登革病毒E蛋白标记胶体金，构建间接法或双抗原夹心法检测抗体，并对该方法的敏感性、特异性、稳定性进行评价。通过对人为掺入兔抗重组登革病毒E2抗体的健康人血清模拟环境样品检测，评价该方法检测血清样品中登革病毒抗体的可行性。利用本专利技术提供的试纸条进行检测，具有操作简单，检测时间短，无需专业人员，适合快速现场检测。附图说明图1为本技术检测试纸条内部结构的正面示意图； 图2为本技术检测试纸条内部结构的侧面结构示意图； 图3为本技术检测试纸条的阳性检测结果示意图4为本技术检测试纸条的阴性检测结果示意图； 图5为本技术检测试纸条的无效检测结果示意图。具体实施例方式下面，参考附图，对本专利技术进行更全面的说明，附图中示出了本专利技术的示例性实施例。然而，本专利技术可以体现为多种不同形式，并不应理解为局限于这里叙述的示例性实施例。而是，提供这些实施例，从而使本专利技术全面和完整，并将本专利技术的范围完全地传达给本领域的普通技术人员。为了易于说明，在这里可以使用诸如“上”、“下” “左” “右”等空间相对术语，用于说明图中示出的一个元件或特征相对于另一个元件或特征的关系。应该理解的是，除了图中示出的方位之外，空间术语意在于包括装置在使用或操作中的不同方位。例如，如果图中的装置被倒置，被叙述为位于其他元件或特征“下”的元件将定位在其他元件或特征“上”。 因此，示例性术语“下”可以包含上和下方位两者。装置可以以其他方式定位(旋转90度或位于其他方位)，这里所用的空间相对说明可相应地解释。一种检测登革病毒抗体的胶体金试纸条，包括(1)反应支持物5；(2)吸水垫1；(3)硝酸纤维膜2，该膜包被有重组登革病毒E抗原和质控抗体的检测条带和质控条带；(4)金标抗体保护膜3，其中含有胶体金标记的SPA蛋白或重组登革病毒E蛋白；(5)样品垫4，采用含有NP40的磷酸盐缓冲液对玻璃纤维素膜进行预处理；如图1、图2、图3所示，其具体结构为反应支持物5位于底层，硝酸纤维膜2位于反应支持物5上的中部，硝酸纤维膜2的T处是重组E2蛋白包被的检测条带，C处是羊抗兔IgG 或羊抗重组登革病毒E蛋白IgG包被的质控条带；金标抗体保护膜3位于硝酸纤维膜2上部的一侧并与之部分重叠，该膜含有胶体金标记的重组登革病毒抗体；吸水垫1位于硝酸纤维膜2上部的相对于金标抗体保护膜3而言的另一侧、并与硝酸纤维膜2部分重叠；样品垫4位于硝酸纤维膜2上与吸水垫1相反的一侧并与金标抗体保护膜3部分重叠。其中反应支持物5为PCV板，吸水垫1为滤油纸，硝酸纤维膜2依次包被羊抗兔 IgG或羊抗重组登革病毒E蛋白IgG 0.5-5 mg/ml、重组登革病毒E抗原0. l_5mg/ml，金标抗体保护膜3为含有胶体金标记的SPA蛋白或重组登革病毒E蛋白的玻璃纤维膜或聚脂膜或滤纸纤维，样品垫4选用玻璃纤维膜或聚脂膜或滤纸纤维。试纸条整体的外部包裹设置有外壳6，外壳6上对应于样品本文档来自技高网...
【技术保护点】
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：王静，杨宇，杨永莉，秦成峰，张志华，
申请(专利权)人：中国检验检疫科学研究院，
类型：发明
国别省市：
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