一种从了哥王中提取西瑞香素的方法技术

本发明专利技术公开了一种从了哥王中提取西瑞香素的方法。该方法包括酶解、提取、萃取、分离和重结晶步骤，具体是将了哥王树皮粉碎并拌上纤维素酶后加蒸馏水浸泡24h，抽滤干燥得到酶解树皮粉，然后用甲醇或乙醇提取，浓缩成浸膏，经甲醇溶解后用二氯甲烷或氯仿萃取，萃取物经石油醚和乙酸乙酯混合液洗脱后结晶即得到西瑞香素纯品，纯度在99%以上。本发明专利技术的制备方法分离得到的西瑞香素纯度高，产率也高，同时本发明专利技术操作简便、工艺简单,原材料可循环使用且分离效率高,适合大规模工业化生产。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及化工医药
，具体涉及一种从了哥王中分离西瑞香素的方法。
技术介绍
J哥^AWikstroemia indica (L. ) C. A. Mey]为瑞香科荛花属植物，又名南岭荛花、山棉皮、哥春光、雀儿麻等，广泛分布于我国江西、广东、广西等省区，资源丰富。了哥王根、茎、叶和果实均可入药，性味苦寒、微辛，具有清热解毒、消肿散结、止痛等功效，主治跌打损伤、散瘀止痛，为民间常用中草药。现代药理及临床研究表明，了哥王具有抑菌、抗病毒、抗炎镇痛、抗癌、抗疟等功效，用于治疗支气管炎、肺炎、扁桃体炎、乳腺炎、蜂窝组织炎等症。了哥王中含有黄酮类和香豆素类等多种化合物，如芫花素、伞形花内酯、西瑞香素、西瑞香素-7-0-A-D-葡萄糖苷等成分，其中西瑞香素是了哥王的有效成分之一。文献报道西瑞香素不仅具有明显改善小鼠心肌营养血流量的作用，也可显著降低大鼠肾上腺内维生素 C的含量，可促进单核巨噬细胞的吞噬作用，有利于炎症的恢复，同时又具有较好的抗炎抗肿瘤作用。关于了哥王的研究，目前国内外对了哥王的化学成分，了哥王的药理作用以及了哥王中西瑞香素含量HPLC测定方法的研究较多，但是对了哥王中药物活性成分的分离提取研究较少。西瑞香素作为了哥王中的重要药理活性物质，至今未见针对西瑞香素简单高效提取分离方法的文献报道，因而严重制约了哥王和西瑞香素的进一步开发。尽管有作者在了哥王化学成分的系统分离与结构鉴定中获得了西瑞香素纯品，也有作者以西瑞香素为考察指标优化了哥王的提取工艺，但这些方法步骤繁琐，有机溶剂用量大，大设备无法实现，因而仅停留在实验室的研究水平，不能在大生产中应用，也无法大量获取西瑞香素纯品。因此同其它植物药如紫杉醇、青蒿素已形成工业化生产并已应用于临床相比，西瑞香素的研究开发要相对滞后得多，所以尽快解决从了哥王中高效分离提取药物活性功能因子-西瑞香素的问题，是本
面临的重要课题。关于了哥王中提取西瑞香素的方法文献有“ 了哥王中西瑞香素提取工艺的正交实验设计优选”(郭君阳，郝桂彤，孙立新，时珍国医国药2010年第21卷第9期，2190^2191) 公开了一种优选的提取方法，是将了哥王药材浸泡过夜后用75%乙醇回流提取2小时，共提取4次，热滤、合并滤液，减压浓缩。该方法提取得到的产物平均西瑞香素含量为4. 030mg/“了哥王中西瑞香素的提取分离及抗肿瘤作用研究”(杨振宇、郭薇、吴冬媛、杜智敏，天然产物研究与开发，2008，20:522飞沈)提供了另一种提取方法，是将了哥王干燥粉碎过10目筛，75%乙醇回流提取2次，每次4小时，趁热过滤，滤液减压浓缩，残渣加水成混悬液，依次经石油醚、乙酸乙酯、饱和正丁醇萃取，乙酸乙酯层减压干燥，取干燥后的乙酸乙酯层萃取物进行硅胶柱层析，以氯仿-甲醇(100 (Γ90 10)梯度洗脱，TLC检识，分段收集洗脱液，在98 2梯度下得到黄色絮状沉淀，减压干燥后再次进行硅胶柱层析，最后得到西瑞香素，提取物纯度达到99. 75%。酶法在中药提取中的应用主要在纤维素酶的作用上，由于大部分中药材的细胞壁都是由纤维素构成的，有效成分往往包裹在细胞壁内，选择相对应的酶，将细胞壁的组成成分降解，破坏细胞壁结构，使有效成分充分暴露出来，溶解、混悬或胶溶于溶剂中，从而达到提取细胞内有效成分的目的。常见的可用于植物细胞破壁的酶有纤维素酶、半纤维素酶、 果胶酶以及多酶复合体(如果胶酶复合体、各类半纤维素酶、葡聚糖内切酶等(酶技术在中药有效成分提取与转化中的研究现状，刘颖新，范业雪，王振月，辽宁中医药大学学报，2008 年9月:46 47)。纤维素酶是一种复合酶，主要由外切β-葡聚糖酶、内切β-葡聚糖酶和β-葡萄糖苷酶等组成，还有很高活力的木聚糖酶活力。微生物产生的纤维素酶复合物不一定都有前述三类酶，而是因种类不同，差异较大。酶复合物的组分及其比例决定了它对纤维素的水解程度，组分较齐，比例适当的酶复合物对纤维素的水解能力较强(纤维素酶在中药成分提取中的应用，杨吉霞，蔡俊鹏，祝玲，中药材第观卷第1期2005年1月64 67)。
技术实现思路
本专利技术的目的在于根据现有技术中提取方法的上述不足，提供一种新的从了哥王中分离西瑞香素的方法。本专利技术通过以下技术方案实现上述目的 ，步骤如下(1)酶解将了哥王树皮粉碎，拌上纤维素酶后加蒸馏水浸泡M小时，抽滤，烘干得到酶解了哥王树皮粉；(2)提取将酶解了哥王树皮粉加入到甲醇或乙醇中，回流提取2次，每次2小时，抽滤， 合并滤液，减压浓缩得浸膏；(3)萃取浸膏加入甲醇中，50°C下温热溶解，溶解后先用石油醚萃取3次后加水，再用二氯甲烷或氯仿萃取10次，收集萃取液，减压回收溶剂后得二氯甲烷或氯仿萃取物；(4)分离以和乙酸乙酯分别作为洗脱剂依次洗脱萃取物，收集洗脱液，旋转蒸发除去溶剂，得到西瑞香素粗品，所述八由石油醚和乙酸乙酯按体积比3:1组成，Φ2由石油醚和乙酸乙酯按体积比1:1组成；(5)重结晶西瑞香素粗品用有机溶剂溶解，抽滤除杂，滤液重新回流至澄清后析晶，收集白色絮状晶体，得到西瑞香素纯品。上述制备方法中，步骤(1)优选了哥王树皮粉碎至60目，纤维素酶加入量为了哥王树皮重量的1%，蒸馏水与了哥王树皮粉的质量比为3 8:1，烘干温度在80°C以下。甲醇或乙醇加入量为酶解了哥王树皮粉的4飞倍。步骤(3 )和(4 )中所用石油醚规格为馏程60-90 V，步骤(4 )洗脱流速彡lOmL/min。 步骤(4)的分离优选用硅胶柱色柱分离，如可以选择色谱柱规格015OmmXZ15OOmm，吸附剂100-150目，吸附剂用量2kg即可。在硅胶柱色谱分离工艺中，用洗脱剂Φλ、Φ2 乙酸乙酯洗脱色谱柱，收集洗脱液馏份段，是由于西瑞香素存留在洗脱液馏份段，而乙酸乙酯洗脱色谱柱是以乙酸乙酯使色谱柱再生。步骤(5 )所述有机溶剂优选为甲醇、乙醇或丙酮。与现有技术相比，本专利技术具有以下有益效果由于本专利技术釆用了纤维素酶室温酶解技术，使得了哥王树皮中大量存在的西瑞香素糖苷类物质先期全部生物转化为苷元-西瑞香素，这样大大提高了西瑞香素的提取得率； 同时萃取阶段萃取溶剂-二氯甲烷或氯仿的选用，可把大部分非西瑞香素类香豆素化合物排除在外，简化后面的硅胶柱色谱分离操作；在硅胶柱色谱分离过程中共使用三种洗脱剂， 洗脱剂去除极性小的非西瑞香素杂质，02洗脱剂洗脱得西瑞香素粗品，配合简单重结晶即得到高纯度西瑞香素产品，乙酸乙酯洗脱剂使色谱柱再生，实现吸附剂-硅胶的重复利用，同时三种洗脱剂使用后可通过减压蒸馏回收再利用。上述创新性成果使得本专利技术分离得到的西瑞香素纯度高，产率也高，同时本专利技术操作简便、工艺简单，原材料可循环使用且分离效率高，适合大规模工业化生产。经重结晶和干燥后得到的西瑞香素纯品，经过联合UV、IR、1H-NMK1V-NMRJS技术对产品进行综合定性分析后可知该产品是西瑞香素，利用HPLC技术对西瑞香素进行定量分析后可知产品纯度为99%以上。具体实施例方式下面结合实施例详述本专利技术，实施例中除作特殊说明外，均为本领域常规实验技术和试剂。实施例1(1)酶水解了哥王将了哥王树皮Ikg粉碎至60目左右，置于一 5L规格三角瓶中，加入3. 5L蒸馏水和IOg 纤维素酶(购于广州市前沿化工有限公司)，本文档来自技高网...

【技术保护点】
１．一种从了哥王中提取西瑞香素的方法，其特征在于步骤如下：（１）酶解：将了哥王树皮粉碎，拌上纤维素酶后加蒸馏水浸泡２４小时，抽滤，烘干得到酶解了哥王树皮粉；（２）提取：将酶解了哥王树皮粉加入到甲醇或乙醇中，回流提取２次，每次２小时，抽滤，合并滤液，减压浓缩得浸膏；（３）萃取：浸膏加入甲醇中，５０℃下温热溶解，溶解后先用石油醚萃取３次后加水，再用二氯甲烷或氯仿萃取１０次，收集萃取液，减压回收溶剂后得二氯甲烷或氯仿萃取物；（４）分离：以φ１、φ２和乙酸乙酯分别作为洗脱剂依次洗脱萃取物，收集洗脱液，旋转蒸发除去溶剂，得到西瑞香素粗品，所述φ１由石油醚和乙酸乙酯按体积比３：１组成，φ２由石油醚和乙酸乙酯按体积比１：１组成；（５）重结晶：西瑞香素粗品用有机溶剂溶解，抽滤除杂，滤液重新回流至澄清后析晶，收集白色絮状晶体，得到西瑞香素纯品。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：王定勇，陈燕忠，徐祖疆，喻文进，刘慧琼，肖玥，
申请(专利权)人：广东药学院，
类型：发明
国别省市：81