双齿围沙蚕金属结合蛋白基因的克隆方法技术

本发明专利技术公开一种双齿围沙蚕金属结合蛋白基因的克隆方法，是通过设计特异性片段扩增和RACE扩增的方法，从双齿围沙蚕体壁肌肉总RNA中克隆得到了双齿围沙蚕的金属结合蛋白基因，可利用实时荧光定量PCR技术检测双齿围沙蚕在受到重金属等污染物胁迫下MPⅡ基因表达的规律，为探讨重金属对双齿围沙蚕MPⅡ基因调控的作用机理提供依据，亦为筛选海洋沉积环境污染早期生态风险预测的分子生物标志物奠定基础，利于成本低、来源丰富的双齿围沙蚕在环境保护中广泛应用。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于基因工程领域，尤其涉及一种双齿围沙蚕金属结合蛋白(MP II)基因的克隆方法。
技术介绍
多毛类隶属于环节动物门，是广泛分布于海洋近岸和河口潮滩的优势底栖动物， 也是海洋生态系统能量流动和物质循环的重要环节。由于其具有体型大、生命周期长、行动缓慢、分布广泛，对许多持久性污染物具有较强的耐受性和生物利用性，因此一直作为海洋沉积环境污染评价的指示生物和毒理研究的模型动物。如Bryan等发现杂色沙蚕i^ereis diversicolor)暴露于Cd2+192 h LC50达到100 mg/L，远超过一般海洋无脊椎动物的耐受范围(0. 1 10mg/L)。有研究表明，在沉积环境中，杂色沙蚕对锌和镉的耐受浓度分别可达到100 3000 μ g/g和0. 2 9. 3 μ g/g，体内蓄积量亦可分别达到130 350 μ g/g和 0. 08 3. 6 μ g/g ο许多资料证实，几乎所有脊椎动物和大多数无脊椎动物，经重金属诱导后均能合成大量金属硫蛋白，参与细胞内金属水平的稳态调节、重金属解毒以及清除自由基等生物学功能。多毛类杂色沙蚕暴露于镉后可形成金属结合蛋白，分析表明，其本文档来自技高网...

【技术保护点】
１．一种双齿围沙蚕金属结合蛋白基因的克隆方法，其特征在于按下列步骤进行：ａ．　提取及纯化双齿围沙蚕总ＲＮＡ，合成ｃＤＮＡ第一链；ｂ．　应用一对引物通过聚合酶链式反应对双齿围沙蚕ｃＤＮＡ第一链进行扩增：所述正向引物５′－ＣＧＡＧＴＣＣＴＴＣＣＡＧＧＴＣＴＴＣ－３′，所述反向引物５′－ＴＣＧＧＴＣＴＴＣＴＴＣＴＴＧＴＧＧＧ－３′；ｃ．　应用５′　ＲＡＣＥ　ＰＣＲ引物对聚合酶链式反应产物，进行５′　ＲＡＣＥ扩增，得到双齿围沙蚕ｃＤＮＡ５′端序列；所述５′　ＲＡＣＥ　ＰＣＲ正向引物：５′－ＣＡＴＣＣＴＴＧＡＡＧＴＧＧＴＴＧＧＣＡＧＴＡ－３′；所述５′　ＲＡＣＥ　ＰＣＲ反向引物：５′－ＣＴＴＧＡＧＧＴＴ...

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：周一兵，杨大佐，何洁，王斌，陈雪，赵欢，
申请(专利权)人：大连海洋大学，
类型：发明
国别省市：91