竹根姜脱毒组培种苗工厂化繁育方法技术

本发明专利技术公开了竹根姜脱毒组培种苗工厂化繁育方法，包括茎尖丛生芽诱导、丛生芽继代增殖、生根培养和试管苗移栽共四个步骤，分别对诱导培养基、增殖培养基、生根培养基和移栽基质等进行了优化，所得方法茎尖丛生芽诱导率高；丛生芽继代增殖倍数高且玻璃化率低；芽苗生根率达100％，根系健壮且有侧芽萌发；移栽成活率高，且芽苗健壮，生长快；本发明专利技术方法周期短，成本低，完全能满足竹根姜大面积规模化栽培的需要，具有良好的应用前景。??

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及一种种苗繁育方法，特别涉及一种竹根姜脱毒组培种苗工厂化繁育方 法。
技术介绍
姜(Zingiber officinale Rose.)为姜科姜属多年生宿根草本，不仅是一种重要 的调味植物，且具有解表、驱寒湿、抗肿瘤、抗氧化等多种药用功效，出口量大、经济效益好， 近年来发展很快。由于开花和结籽障碍，姜以根状茎为繁殖材料，在长期的无性繁殖过程 中，易受病原物侵染，导致种性退化，产量和品质降低。竹根姜为我国特产地方姜种，具有肉质脆嫩、纤维少、品质优等特点，在四川、重庆 等省市广泛种植，市场需求量极大。但由于竹根姜不耐旱涝，而西南地区气温高、雨量充足， 导致其容易大面积感染青枯劳尔氏菌(Ralstoniasolanacearum )而引发姜瘟病，严重影响 了竹根姜的产业化发展。目前，利用茎尖脱毒与组织培养技术获得脱毒组培种苗是解决上述问题的根本途 径。近年来，有关姜茎尖脱毒与组织培养的研究已有文献报道，但大多数报道为脱毒程序及 组培体系建立等理论方面的成果，并未见形成产业化规模。而迄今为止，有关竹根姜的茎尖 脱毒与工厂化繁育的研究尚未见报道。
技术实现思路
有鉴于此，本专利技术的目的在于提供一种。为达到此目的，本专利技术的，包括以下步骤a、茎尖丛生芽诱导取竹根姜嫩芽，经消毒灭菌后，剥取茎尖作为外植体；将茎尖 接种于诱导培养基在光照条件下进行丛生芽诱导培养，获得丛生芽；所述诱导培养基以MS 培养基作为基本培养基，并添加浓度为30g/L的蔗糖、浓度为6g/L的琼脂、浓度为2. Omg/L 的细胞分裂素和浓度为0. lmg/L的生长素，pH为5. 6 6. 2 ；b、丛生芽继代增殖将步骤a所得丛生芽转接至增殖培养基在光照条件下进行丛 生芽继代增殖培养，获得继代增殖丛生芽；所述增殖培养基以MS(1/3NH4N03)培养基作为基 本培养基，并添加浓度为30g/L的蔗糖、浓度为6g/L的琼脂、浓度为1. 5mg/L的细胞分裂素 和浓度为0. lmg/L的生长素，pH为5. 6 6. 2 ；所述MS (1/3NH4N03)培养基中硝酸铵的浓度 为MS培养基中硝酸铵浓度的1/3，其余组分及其浓度与MS培养基相同；C、生根培养当步骤b所得继代增殖丛生芽生长至3 4cm高时，将丛生芽切成单 芽，转接至生根培养基在光照条件下进行生根培养，获得试管苗；所述生根培养基以1/2MS 培养基作为基本培养基，并添加浓度为20g/L的蔗糖、浓度为6g/L的卡拉胶、浓度为0. 5 1. 0mg/L的细胞分裂素和浓度为0. 2mg/L的生长素，pH为5. 6 6. 2 ；所述1/2MS培养基所 含组分种类与MS培养基相同，但各组分的浓度仅为MS培养基中浓度的1/2 ；d、试管苗移栽将步骤c所得试管苗移栽入体积比为3 7的珍珠岩-泥炭土混合基质中培养，即得脱毒组培种苗。进一步，步骤a c所述培养温度为25 士 1°C，光照强度为1500 25001ux，光照 时间为每天12 16小时；进一步，步骤a c所述光照强度为15001UX，光照时间为每天12小时；进一步，步骤b是将丛生芽分割至含有2 3个芽丛，再将其茎基部0. 5cm以上部 分切除，形成微型团块转接至增殖培养基，接种时先弃去培养基表面的水层，并使芽切口露 出培养基表面。本专利技术的有益效果在于本专利技术系统地进行了竹根姜茎尖丛生芽诱导、丛生芽 继代增殖、生根培养和试管苗移栽等研究工作，建立并优化了竹根姜脱毒组培种苗工厂 化繁育方法茎尖丛生芽诱导率高；丛生芽继代增殖倍数高且玻璃化率低；芽苗生根率达 100%，根系健壮且有侧芽萌发；移栽成活率高，且芽苗健壮，生长快；本专利技术方法周期短， 成本低，完全能满足竹根姜大面积规模化栽培的需要，具有良好的应用前景。 附图说明 为了使本专利技术的目的、技术方案和优点更加清楚，下面将结合附图对本专利技术作进 一步的详细描述，其中图1为种姜萌芽；图2为茎尖初代培养；图3为培养四代后增殖芽丛；图4为生根培养；图5为试管苗规模化移栽。具体实施例方式以下将参照附图，对本专利技术的优选实施例进行详细的描述。本专利技术以竹根姜为实验材料，系统地进行了茎尖丛生芽诱导、丛生芽增殖、生根培 养和试管苗移栽等研究工作，建立并优化了。1、茎尖丛生芽诱导培养基的优化取重庆文理学院花卉研究所温室大棚中通过催芽获得的竹根姜嫩芽(图1)，用水 洗净，消毒灭菌，无菌条件下剥取直径不大于Imm的茎尖作为外植体(图2)，分别接种于6 种不同激素浓度配比的诱导培养基，在光照条件下进行丛生芽诱导培养，获得初代丛生芽； 诱导培养基以MS培养基作为基本培养基，并添加浓度为30g/L的蔗糖、浓度为6g/L的琼 月旨、浓度为1. 5,2. 0或3. Omg/L的6-BA和浓度为0. 1或0. 2mg/L的NAA，pH为5. 8 ；培养温 度为25士 1°C，光照强度为15001UX，光照时间为每天12小时；观察不同激素浓度配比的诱 导培养基对竹根姜茎尖丛生芽诱导的影响，统计发芽数和芽生长情况。结果见表1。由表1可知，不同激素浓度配比的诱导培养基对茎尖丛生芽的诱导影 响较大。当NAA浓度为0. 2mg/L时，随着6-BA浓度的增加，茎尖丛生芽的诱导率逐渐升高， 但当6-BA.浓度增加至3. Omg/L时，诱导芽叶片偏黄且开始出现玻璃化现象；当NAA浓度为 0. lmg/L时，随着6-BA浓度的增加，茎尖丛生芽的诱导率先升高再下降，当6-BA浓度增加至 3. Omg/L时，诱导芽弱小且出现较严重的玻璃化现象。上述结果表明，茎尖丛生芽的诱导培养基中应添加相对较低浓度的激素，且6-BA和NAA的比例控制在15 20 1较好，综合 考虑诱导率和芽生长情况，本专利技术优选在诱导培养基中添加浓度为2. Omg/L的6-BA和浓度 为 0. lmg/L 的 NAA。表1不同激素浓度配比的诱导培养基对竹根姜茎尖丛生芽诱导的影响 2、丛生芽继代增殖培养基的优化将初代丛生芽转接至3种不同硝酸铵浓度的增殖培养基，在光照条件下进行继代 增殖培养，获得继代增殖丛生芽；增殖培养基分别以MS培养基、MS(1/2NH4N03)培养基(其 中硝酸铵的浓度仅为MS培养基中硝酸铵浓度的1/2，其余组分及其浓度与MS培养基相 同)、MS(1/3NH4N03)培养基(其中硝酸铵的浓度仅为MS培养基中硝酸铵浓度的1/3，其余组 分及其浓度与MS培养基相同)作为基本培养基，并添加浓度为30g/L的蔗糖、浓度为6g/L 的琼脂、浓度为1. 5mg/L的6-BA和浓度为0. lmg/L的NAA，pH为5. 8 ；培养温度为25士 1°C， 光照强度为15001UX，光照时间为每天12小时；观察不同硝酸铵浓度的增殖培养基对竹根 姜丛生芽继代增殖和玻璃化的影响，每种培养基接种芽数为30，实验重复3次，40天后统计 增殖芽数和玻璃化苗数。结果见表2。由表2可知，不同硝酸铵浓度的增殖培养基对丛生芽继代增殖的影响 较小，随着硝酸铵浓度的逐渐降低，增殖倍数逐渐下降但变化很小；但不同硝酸铵浓度的增 殖培养基对丛生芽玻璃化的影响较大，全量浓度的硝酸铵玻璃化率高达20. 96%, 1/3浓度 的硝酸铵玻璃化率最低为4. 57% ；本专利技术还曾用含有更低浓度硝酸铵的增殖培养基进行丛 生芽本文档来自技高网...

【技术保护点】
竹根姜脱毒组培种苗工厂化繁育方法，其特征在于：包括以下步骤：ａ、茎尖丛生芽诱导：取竹根姜嫩芽，经消毒灭菌后，剥取茎尖作为外植体；将茎尖接种于诱导培养基在光照条件下进行丛生芽诱导培养，获得丛生芽；所述诱导培养基以ＭＳ培养基作为基本培养基，并添加浓度为３０ｇ／Ｌ的蔗糖、浓度为６ｇ／Ｌ的琼脂、浓度为２．０ｍｇ／Ｌ的细胞分裂素和浓度为０．１ｍｇ／Ｌ的生长素，ｐＨ为５．６～６．２；ｂ、丛生芽继代增殖：将步骤ａ所得丛生芽转接至增殖培养基在光照条件下进行丛生芽继代增殖培养，获得继代增殖丛生芽；所述增殖培养基以ＭＳ（１／３ＮＨ↓［４］ＮＯ↓［３］）培养基作为基本培养基，并添加浓度为３０ｇ／Ｌ的蔗糖、浓度为６ｇ／Ｌ的琼脂、浓度为１．５ｍｇ／Ｌ的细胞分裂素和浓度为０．１ｍｇ／Ｌ的生长素，ｐＨ为５．６～６．２；所述ＭＳ（１／３ＮＨ↓［４］ＮＯ↓［３］）培养基中硝酸铵的浓度为ＭＳ培养基中硝酸铵浓度的１／３，其余组分及其浓度与ＭＳ培养基相同；ｃ、生根培养：当步骤ｂ所得继代增殖丛生芽生长至３～４ｃｍ高时，将丛生芽切成单芽，转接至生根培养基在光照条件下进行生根培养，获得试管苗；所述生根培养基以１／２ＭＳ培养基作为基本培养基，并添加浓度为２０ｇ／Ｌ的蔗糖、浓度为６ｇ／Ｌ的卡拉胶、浓度为０．５～１．０ｍｇ／Ｌ的细胞分裂素和浓度为０．２ｍｇ／Ｌ的生长素，ｐＨ为５．６～６．２；所述１／２ＭＳ培养基所含组分种类与ＭＳ培养基相同，但各组分的浓度仅为ＭＳ培养基中浓度的１／２；ｄ、试管苗移栽：将步骤ｃ所得试管苗移栽入体积比为３∶７的珍珠岩－泥炭土混合基质中培养，即得脱毒组培种苗。...

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：刘奕清，陈泽雄，吴中军，廖林正，黄登艳，唐建民，黄科，
申请(专利权)人：重庆市澳桉花木种植有限公司，
类型：发明
国别省市：85