一种大丽花脱毒种苗的高效扩繁方法技术

本发明专利技术公开了一种大丽花脱毒种苗的高效扩繁方法，包括以下步骤：1）大丽花脱毒苗前处理；2）不定芽的诱导；3）切割不定芽继代增殖；4）炼苗；5）水培生根处理；6）水培壮苗；7）移栽。本发明专利技术的高效扩繁方法解决了大丽花脱毒苗扩繁过程中效率低下、易再次污染的问题，不仅能在短时间内扩繁出大量优良大丽花脱毒种苗，而且还避免了大丽花分株繁殖和种子繁殖所带来的品种退化问题，而且操作简单、易于工厂化推广，具有较高的生产实用价值。

【技术实现步骤摘要】
一种大丽花脱毒种苗的高效扩繁方法
本专利技术涉及一种大丽花脱毒种苗的高效扩繁方法，具体涉及一种能够在短时间扩繁大量优良大丽花脱毒种苗的扩繁方法，属于农业科学

技术介绍
大丽花（DahliapinnataCav）为菊科大丽花属多年生球根花卉，全属约27种，又名大理菊、天竺牡丹、西番莲、洋芍药、大丽菊、地瓜花、红苕花等，原产墨西哥、哥伦比亚及危地马拉等国，后传到欧洲、日本和我国。大丽花茎杆粗壮，叶片肥大，花形与牡丹相似，花大而色彩艳丽，具有花姿优美、花型多样、花期长、品种繁多等特点，被誉为花卉中的宠儿。大丽花系天然种间杂交，人工选育的历史不长，世界各国普遍栽培，目前在东北、西北、华北等地栽培较广泛，其中在广东秋、冬两季栽培比较多。经过人工杂交选择，成为异源八倍体，新品种层出不穷，花色娇艳，花期长，适应性强，易于栽培，故一跃成为世界名花。目前大丽花是墨西哥的国花，西雅图的市花，我国吉林省的省花，张家口、赤峰、包头（小丽花）等城市的市花，大丽花象征大方、富丽，大吉大利，是世界著名的观赏花卉。大丽花通常采用分根和扦插繁殖，但分根和扦插繁殖繁殖系数低，但每株每年仅可分出5-6个新株，无法满足产业化生产的要求，并且一直用分株繁殖，容易使病毒逐代积累，从而造成大丽花品种退化严重。利用组织培养、离体快繁等技术可以解决大丽花病毒病积累和快速推广的问题。国内一些研究者采用大丽花外植体，进行了一些组织培养研究，获得了一些研究进展，但是大丽花的组织培养技术国内研究起步较晚，研究积累少，大丽花脱毒之后的快繁方法存在诱导率较低、诱导苗质量差且多弱苗、幼苗增殖效率低、苗移栽成活率低等问题，严重制约了大丽花种苗工厂化、规模化生产。因此，建立健全简单经济的大丽花脱毒种苗扩繁技术，对促进大丽花脱毒种苗工厂化、规模化生产，对大丽花优良品种的推广具有广阔的市场前景。
技术实现思路
为解决目前大丽花脱毒苗扩繁方法存在的诱导率较低、诱导苗质量差且多弱苗、幼苗增殖效率低、苗移栽成活率低等问题，本专利技术提供了一种大丽花脱毒种苗的高效扩繁方法，通过建立健全了培养程序、培养条件和培养组分的配比，提高了诱导苗的质量和增殖效率、移栽成活率，从而建立了高品质和高数量快繁体系。本专利技术的目的是通过以下技术方案解决的：一种大丽花脱毒种苗的高效扩繁方法，其特征在于：该方法步骤如下：1）大丽花脱毒苗前处理：将大丽花脱毒苗清洗干净并表面消毒，在无菌条件下切取叶柄和花托，移入装有配制好的不定芽诱导培养基广口瓶中；2）不定芽的诱导：将接种有脱毒苗外植体的不定芽诱导培养基广口瓶置于消毒处理过的培养室中光培养，诱导出不定芽；3）切割不定芽继代增殖：在无菌条件下将不定芽切下，移入装有增殖培养基的广口瓶中培养，得到大量大丽花幼苗；4）炼苗：逐步采用增强培养光照、降低培养温度的方法进行炼苗；5）水培生根处理：将炼苗后的脱毒试管苗从广口瓶中取出，保留原有根系，再将组培苗栽于水培盘中的栽培板上，水培盘中加入生根营养液；6）水培壮苗：生根培养7天后，倒掉生根营养液，加入壮苗营养液；7）移栽：将脱毒苗移栽到消过毒的基质上，置于室外自然光下生长。该方法的详细步骤如下：1）大丽花脱毒苗前处理：将大丽花脱毒苗先用自来水反复冲洗，用毛刷蘸取洗洁精洗一遍后接着用超纯水冲洗干净，用70%酒精浸泡15s，再用无菌水冲洗两次，0.1%升汞内加数滴吐温20溶液浸泡5min，用无菌水冲洗4-5次，滤纸吸干，将大丽花脱毒苗的叶柄和花托移入装有不定芽诱导培养基的广口瓶中；2）不定芽的诱导：为防大丽花脱毒苗在生产过程中被病毒再浸染，培养室先经过消毒，消毒剂选用40%甲醛10ml/m3、高锰酸钾5g/m3，对整个培养室进行熏蒸2小时，熏蒸后，再采用75%乙醇擦拭培养架进行表面消毒，然后将接种有大丽花脱毒苗外植体的不定芽诱导培养基广口瓶置于消毒处理过的培养室中光培养，培养室温度控制为26±1℃，以荧光灯为光源，光照强度控制为1500-2000Lx，光周期控制为光14h/暗10h，25-30天诱导出不定芽；3）切割不定芽继代增殖：在无菌条件下将诱导2-3cm的不定芽从外植体上完整的切下，转接到装有增殖培养基的广口瓶中，培养室温度控制为24±1℃、光照强度控制为1500-2000Lx、光周期控制为光12h/暗12h下培养，培养15-25天后可得到大量大丽花幼苗；4）炼苗：筛选5-8cm的大丽花脱毒试管苗，转移到光照强度为2500-3500lx的条件下，3-5天后，将培养温度降低为20-22℃，再过3-5天，打开广口瓶封口，继续炼苗3-5天；5）水培生根处理：为减少转接对脱毒试管苗根系带来的伤害，转接前向广口瓶内加入少量水，并用镊子轻轻搅动培养基，以免把苗子倒出时损伤根，试管苗倒出后洗净根上的培养基，移栽到装有生根培养液的水培盘中的栽培板上，栽培密度1000-1200苗/m2，株距2-3cm，行距2-3cm，水培器皿用盆底长×宽=44×32cm，盆高=15cm的塑料盆作为栽培盆，每盆放2L营养液，并有定植孔间距为2cm-3cm的栽培板漂浮在营养液上，将脱毒苗上方搭上一层透明的塑料薄膜，使其处于温度22-25℃、湿度≥90%、光照强度为2000-3000lx的清洁的温室内环境生长；6）水培壮苗：生根培养7天后，脱毒苗根系基本发育完全，此时，撤掉塑料薄膜，倒掉生根营养液，给幼苗浇施壮苗营养液；7）移栽：当大丽花脱毒苗长到12-15cm时，移栽到消过毒的基质上，移栽密度为行距15cm、株距10cm，塑料薄膜覆盖保湿，10-15天后逐步除去薄膜，置于室外自然光下生长。步骤1）和2）中的不定芽诱导培养基配方为：MS+2.5mg/L6-BA+0.08NAA+3%蔗糖+6.5g/L植物凝胶，pH为5.8。步骤3）中的增殖培养基配方为：MS+3.0mg/L6-BA+0.5mg/LNAA+0.5mg/LGA+2.5mg/L氯化胆碱+4%蔗糖+6.0g/L琼脂，pH为5.8。步骤5）和6）中的生根培养液配方为：500mg/LKNO3，500mg/LNH4NO3，92.5mg/LMgSO4·7H2O，173mg/LCa(NO3)2·4H2O，150mg/LKH2PO4，32mg/LKCl，17mg/LMnSO4·7H2O，19mg/LNa2-EDTA，14mg/LFeSO4·7H2O，2.2mg/LMnSO4·4H2O，0.8mg/LZnSO4·7H2O，0.8mg/LH3BO3，0.4mg/LKI，50mg/L肌醇，1mg/L甘氨酸，0.05mg/LVB1，0.05mg/LVB6，混合制成生根营养液。步骤5）和6）中的生根培养液的另一种可选配方为：950mg/LKNO3，825mg/LNH4NO3，85mg/LKH2PO4，220mg/LCaCl2·2H2O，185mg/LMgSO4·7H2O，19mg/LNa2-EDTA，14mg/LFeSO4·7H2O，11mg/LMnSO4·4H2O，0.4mg/LKI，3.1mg/LH3BO3，4.3mg/LZnSO4·7H2O，0.125mg/LNa2MoO4，0.0125mg/LCuSO4，0.0125mg/LCoCl2·6H2O，50mg/L肌醇，1mg/L甘氨酸，0.05mg/LVB1本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种大丽花脱毒种苗的高效扩繁方法，其特征在于：该方法步骤如下：1）大丽花脱毒苗前处理：将大丽花脱毒苗清洗干净并表面消毒，在无菌条件下切取叶柄和花托，移入装有配制好的不定芽诱导培养基广口瓶中；2）不定芽的诱导：将接种有脱毒苗外植体的不定芽诱导培养基广口瓶置于消毒处理过的培养室中光培养，诱导出不定芽；3）切割不定芽继代增殖：在无菌条件下将不定芽切下，移入装有增殖培养基的广口瓶中培养，得到大量大丽花幼苗；4）炼苗：逐步采用增强培养光照、降低培养温度的方法进行炼苗；5）水培生根处理：将炼苗后的脱毒试管苗从广口瓶中取出，保留原有根系，再将组培苗栽于水培盘中的栽培板上，水培盘中加入生根营养液；6）水培壮苗：生根培养7天后，倒掉生根营养液，加入壮苗营养液；7）移栽：将脱毒苗移栽到消过毒的基质上，置于室外自然光下生长。

【技术特征摘要】
1.一种大丽花脱毒种苗的高效扩繁方法，其特征在于：该方法步骤如下：1）大丽花脱毒苗前处理：将大丽花脱毒苗清洗干净并表面消毒，在无菌条件下切取叶柄和花托，移入装有配制好的不定芽诱导培养基广口瓶中；2）不定芽的诱导：将接种有脱毒苗外植体的不定芽诱导培养基广口瓶置于消毒处理过的培养室中光培养，诱导出不定芽；3）切割不定芽继代增殖：在无菌条件下将不定芽切下，移入装有增殖培养基的广口瓶中培养，得到大量大丽花幼苗；4）炼苗：逐步采用增强培养光照、降低培养温度的方法进行炼苗；5）水培生根处理：将炼苗后的脱毒试管苗从广口瓶中取出，保留原有根系，再将组培苗栽于水培盘中的栽培板上，水培盘中加入生根营养液；6）水培壮苗：生根培养7天后，倒掉生根营养液，加入壮苗营养液；7）移栽：将脱毒苗移栽到消过毒的基质上，置于室外自然光下生长；该方法的详细步骤如下：1）大丽花脱毒苗前处理：将大丽花脱毒苗先用自来水反复冲洗，用毛刷蘸取洗洁精洗一遍后接着用超纯水冲洗干净，用70%酒精浸泡15s，再用无菌水冲洗两次，0.1%升汞内加数滴吐温20溶液浸泡5min，用无菌水冲洗4-5次，滤纸吸干，将大丽花脱毒苗的叶柄和花托移入装有不定芽诱导培养基的广口瓶中；2）不定芽的诱导：为防大丽花脱毒苗在生产过程中被病毒再浸染，培养室先经过消毒，消毒剂选用40%甲醛10ml/m3、高锰酸钾5g/m3，对整个培养室进行熏蒸2小时，熏蒸后，再采用75%乙醇擦拭培养架进行表面消毒，然后将接种有大丽花脱毒苗外植体的不定芽诱导培养基广口瓶置于消毒处理过的培养室中光培养，培养室温度控制为26±1℃，以荧光灯为光源，光照强度控制为1500-2000Lx，光周期控制为光14h/暗10h，25-30天诱导出不定芽；3）切割不定芽继代增殖：在无菌条件下将诱导2-3cm的不定芽从外植体上完整的切下，转接到装有增殖培养基的广口瓶中，培养室温度控制为24±1℃、光照强度控制为1500-2000Lx、光周期控制为光12h/暗12h下培养，培养15-25天后可得到大量大丽花幼苗；4）炼苗：筛选5-8cm的大丽花脱毒试管苗，转移到光照强度为2500-3500lx的条件下，3-5天后，将培养温度降低为20-22℃，再过3-5天，打开广口瓶封口，继续炼苗3-5天；5）水培生根处理：为减少转接对脱毒试管苗根系带来的伤害，转接前向广口瓶内加入少量水，并用镊子轻轻搅动培养基，以免把苗子倒出时损伤根，试管苗倒出后洗净根上的培养基，移栽到装有生根培养液的水培盘中的栽培板上，栽培密度1000-1200苗/m2，株距2-3cm，行距2-3cm，水培器皿用盆底长×宽=44×32cm，盆高=15cm的塑料盆作为栽培盆，每盆放2L营养液，并有定植孔间距为2cm-3cm的栽培板漂浮在营养液上，将脱毒苗上方搭上一层透明的塑料薄膜，使其处于温度22-25℃、湿度≥90%、光照强度为2000-3000lx的清洁的温室内环境生长；6）水培壮苗...

【专利技术属性】
技术研发人员：不公告发明人，
申请(专利权)人：宋立胜，
类型：发明
国别省市：山东;37