一种绿色球状体途径的泽泻蕨种苗组培快繁方法，包括诱导培养基：1/6MS～1/4MS+TDZ0.4～1.0mg/L+NAA0.1～0.3mg/L+水解酪蛋白400～800mg/L；增殖培养基：1/6MS～1/4MS+TDZ0.1～0.3mg/L+6-BA0.5～1.0mg/L+NAA0.1～0.3mg/L+水解酪蛋白400～800mg/L；分化培养基：1/4MS～1/2MS+活性炭3～6g/L；各培养基加有蔗糖和琼脂，pH为5.80。其绿色球状体诱导率88％以上，增殖倍数11～12.5倍，分化率98％以上，一个绿色球状体一年内可繁出种苗150～200万株，成活率95％以上。
【技术实现步骤摘要】
【专利摘要】，包括诱导培养基：1/6MS?1/4MS+TDZ0.4?1.0mg/L+NAA0.1?0.3mg/L+水解酪蛋白400?800mg/L;增殖培养基：1/6MS?1/4MS+TDZ0.1?0.3mg/L+6-BA0.5?1.0mg/L+NAA0.1?0.3mg/L+水解酪蛋白400?800mg/L;分化培养基：1/4MS?1/2MS+活性炭3?6g/L;各培养基加有蔗糖和琼脂，pH为5.80。其绿色球状体诱导率88%以上，增殖倍数11?12.5倍，分化率98%以上，一个绿色球状体一年内可繁出种苗150?200万株，成活率95%以上。【专利说明】
本专利技术本专利技术属植物组织培养
，具体涉及一种绿色球状体途径的泽泻蕨 组培快速繁殖方法。 技术背景 泽泻蕨（Hemionitis arifolia)隶属于裸子蕨科泽泻蕨属，商品名：心愿蕨、心愿 叶、心叶蕨。泽泻蕨属共8种，仅泽泻蕨1种产于亚洲，中国是该种分布的北界，主要分布于 海南及云南南部。泽泻蕨叶片心形，叶型独特，具有良好的市场应用前景。 自然条件下，蕨类植物主要依靠孢子进行繁殖，但孢子繁殖的周期较长，通常需要 6-18个月，甚至更长。 蕨类植物绿色球状体是指由蕨类植物外植体诱导得到的由众多绿色颗粒组成的 球状体，其本质是分生组织集合体，接种于分化培养基上可以获得大量蕨类植物幼苗。蕨类 植物的绿色球状体途径的组培繁殖方法是指：外植体一绿色球状体一植株，一旦诱导 得到绿色球状体，其繁殖系数将高于孢子繁殖途径。 目前，大多数蕨类植物直接从地栽的活体植株上很难获得合适的外植体，诱导难 度极大，获得蕨类植物绿色球状体的也较困难。到目前为止，蕨类植物中已获得绿色球状体 的种类十分有限，这主要由于不同种类的蕨类植物绿色球状体的获得对于外植体的选取以 及植物激素的种类和浓度具有一定的专一性，需经过大量筛选试验才能获知特定蕨类植物 种类适宜的外植体种类以及植物激素种类和浓度。目前，尚无泽泻蕨绿色球状体途径组培 繁殖技术的相关报道。
技术实现思路
本专利技术要解决的技术问题是克服现有技术存在泽泻蕨通过孢子繁殖周期较长，缺 乏新途径快速繁殖的缺陷，因此，本专利技术目的是提供一种通过绿色球状体途径组培快速繁 殖泽泻蕨种苗的新方法。本专利技术技术方案如下： -种绿色球状体途径的泽泻蕨种苗组培快繁方法，其特征在于步骤如下： (1)泽泻蕨无菌外植体的获得 将泽泻蕨无菌孢子接种在1/2MS+蔗糖30. 0g/L+琼脂7. Og/L，pH为5. 80的培养 基上，培养条件为：20?25°C、每天的光照时间为12小时，光照强度为20001x，得到幼嫩的 无菌苗，以幼嫩无菌苗作为泽泻蕨无菌外植体； (2)泽泻蕨绿色球状体的诱导 将步骤（1)获得的泽泻蕨无菌外植体接种于诱导培养基上进行培养，培养条件与 步骤（1)相同，无菌苗茎尖和叶柄基部膨大形成原始的绿色球状体即为诱导得到的泽泻蕨 绿色球状体；所述的诱导培养基为：1/6MS?1/4MS+TDZ0. 4?1. 0mg/L+NAA0. 1?0. 3mg/L+ 水解酪蛋白400?800mg/L+蔗糖30. 0g/L+琼脂7. 0g/L，pH为5. 80 ; (3)泽泻蕨绿色球状体的增殖 将步骤（2)诱导得到的泽泻蕨绿色球状体分割为直径2?5mm的球状体，接种 于增殖培养基上进行培养，培养条件与步骤（1)相同；所述的增殖培养基为：1/6MS? 1/4MS+TDZ0. 1 ?0· 3mg/L+6-BA0. 5 ?1. 0mg/L+NAA0· 1 ?0· 3mg/L+ 水解酪蛋白 400 ? 800mg/L+ 蔗糖 30. 0g/L+ 琼脂 7. Og/L，pH 为 5. 80 ; (4)泽泻蕨绿色球状体的分化 将步骤（3)增殖后的泽泻蕨绿色球状体分割为直径2?5mm的球状体，接种于 分化培养基上进行培养得到分化幼苗，培养条件与步骤（1)相同；所述的分化培养基为： 1/4MS ?1/2MS+ 活性炭 3 ?6g/L+ 蔗糖 30. 0g/L+ 琼脂 7. Og/L，pH 为 5. 80 ; (5)分化幼苗的培养 将步骤（4)得到的分化幼苗接种于分化幼苗培养基上进行培养得到组培苗，培养 条件与步骤（1)相同；分化幼苗培养基为：MS+活性炭3-6g/L+蔗糖30. 0g/L+琼脂浓度 7. Og/L，pH 为 5. 80 ; (6)组培苗移栽培育 待步骤（5)所述组培苗苗高达到2?3cm时，在20?25°C、每天的光照时间为12 小时、光照强度20001x条件开盖炼苗2?3天，将炼苗后的组培苗除去根部的培养基，并用 质量分数为〇. 1?〇. 125%百菌清溶液清洗根部，种植于装有基质的育苗盒内，育苗盒内所 用基质为草炭：河沙：珍珠岩的体积比为3:1:1的混合基质，再将育苗盒放置塑料棚里，控 制棚内温度为20?25°C，在自然光照下生长10?15天即得到泽泻蕨商品种苗。 与现有技术相比，本专利技术的有益效果是： 1、本专利技术方法繁殖效率特别高。 本专利技术方法绿色球状体诱导时间为2周，平均诱导率可达88. 33%?98. 33%，绿 色球状体增殖倍数为11倍?12. 5倍，绿色球状体分化率为98. 33 %?100%，用一个绿色 球状体一年内可繁殖出优质泽泻蕨种苗150?200万株。而采用常规的孢子组培快繁出的 原叶体簇增殖倍数为2?3倍，孢子体幼苗形成率为63. 33%，表明本专利技术方法的绿色球状 体诱导率、绿色球状体增殖倍数和绿色球状体分化率均特别高、繁殖倍数比常规的孢子组 培快繁种苗的繁殖倍数提高了 3. 67倍?6. 25倍。 2、本专利技术方法繁育周期短。 由于本专利技术泽泻蕨绿色球状体的增殖倍数特别高（11?12. 5倍），获得泽泻蕨绿 色球状体后，一个绿色球状体一年内可繁殖出优质泽泻蕨种苗150?200万株，即用诱导出 的一个绿色球状体一年内可繁殖出百万至几百万株优质泽泻蕨种苗，因此，本专利技术以泽泻 蕨的绿色球状体作为一种重要的中间材料，从诱导泽泻蕨绿色球状体至繁育成泽泻蕨商品 种苗，其繁育周期比常规的孢子组培快繁种苗的繁育周期短缩68?89天（近2. 5月?3 个月）。 3、本专利技术生产的组培苗健壮，根系发达，组培苗成活率高，组培苗移栽后平均成活 率为95%?100%。 4、本专利技术生产的种苗健壮、根系发达、质量好，用本专利技术方法生产的种苗种植生产 盆栽观赏植物的成活率可达100%。 5、本专利技术方法通过培育出的泽泻蕨绿色球状体繁育种苗周年可生产，不受季节限 制，而常规的孢子组培快繁只能在夏秋季节收集泽泻蕨孢子，受季节影响较大。 综上所述，本专利技术方法以泽泻蕨的绿色球状体作为一种重要的中间材料，繁殖效 率特别高、繁育周期短、节约生产成本，生产的种苗健壮、种苗质量好、成活率高，与常规的 孢子组培快繁种苗相比，繁殖倍数提高了 3. 67倍?6. 25倍，繁育周期短缩68?89天（近 2. 5月?3个月），且种苗周年可生产，不受季节限制，产生了预料不到的技术效果，本专利技术 为泽泻蕨商品种苗的规模化和标准化生产提供了重要的新方法、新途径。本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种绿色球状体途径的泽泻蕨种苗组培快繁方法，其特征在于步骤如下：(1)泽泻蕨无菌外植体的获得将泽泻蕨无菌孢子接种在1/2MS+蔗糖30.0g/L+琼脂7.0g/L，pH为5.80的培养基上，培养条件为：20～25℃、每天的光照时间为12小时，光照强度为2000lx，得到幼嫩的无菌苗，以幼嫩无菌苗作为泽泻蕨无菌外植体；(2)泽泻蕨绿色球状体的诱导将步骤(1)获得的泽泻蕨无菌外植体接种于诱导培养基上进行培养，培养条件与步骤(1)相同，无菌苗茎尖和叶柄基部膨大形成原始的绿色球状体即为诱导得到的泽泻蕨绿色球状体；所述的诱导培养基为：1/6MS～1/4MS+TDZ0.4～1.0mg/L+NAA0.1～0.3mg/L+水解酪蛋白400～800mg/L+蔗糖30.0g/L+琼脂7.0g/L，pH为5.80；(3)泽泻蕨绿色球状体的增殖将步骤(2)诱导得到的泽泻蕨绿色球状体分割为直径2～5mm的球状体，接种于增殖培养基上进行培养，培养条件与步骤(1)相同；所述的增殖培养基为：1/6MS～1/4MS+TDZ0.1～0.3mg/L+6‑BA0.5～1.0mg/L+NAA0.1～0.3mg/L+水解酪蛋白400～800mg/L+蔗糖30.0g/L，琼脂浓度7.0g/L，pH为5.80；(4)泽泻蕨绿色球状体的分化将步骤(3)增殖后的泽泻蕨绿色球状体分割为直径2～5mm的球状体，接种于分化培养基上进行培养得到分化幼苗，培养条件与步骤(1)相同；所述的分化培养基为：1/4MS～1/2MS+活性炭3～6g/L+蔗糖30.0g/L+琼脂7.0g/L，pH为5.80；(5)分化幼苗的培养将步骤(4)得到的分化幼苗接种于分化幼苗培养基上进行培养得到组培苗，培养条件与步骤(1)相同；分化幼苗培养基为：MS+活性炭3‑6g/L+蔗糖30.0g/L+琼脂浓度7.0g/L，pH为5.80；(6)组培苗移栽培育待步骤(5)所述组培苗苗高达到2～3cm时，在20～25℃、每天的光照时间为12小时、光照强度2000lx条件，开盖炼苗2～3天，将炼苗后的组培苗除去根部的培养基，并用质量分数为0.1～0.125％百菌清溶液清洗根部，种植于盛有基质的育苗盒内，育苗盒内所用基质为草炭：河沙：珍珠岩的体积比为3:1:1的混合基质，再将育苗盒放置塑料棚里，控制棚内温度为20～25℃，在自然光照下生长10～15天即得泽泻蕨种苗。...
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：余蓉培，吴学尉，李绅崇，李涵，田敏，蒋亚莲，卢珍红，周旭红，
申请(专利权)人：云南省农业科学院花卉研究所，
类型：发明
国别省市：云南;53
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