温度对刺参胚胎发育和生长的影响研究方法技术

本发明专利技术涉及一种温度对刺参胚胎发育和生长的影响研究方法，步骤如下：性腺发育成熟的亲参经升温刺激后排放精和卵，4h后取样观察，选择受精率>99%，直径大于160μm受精卵的用于实验；实验开始时受精卵已于22.5°C的水体中孵化约6–7h，处于囊胚初期；将囊胚分别放入预先准备好的各温度梯度海水中，盐度~31，pH7.8~8.2；各温度梯度设置如下：5、10、12、15、19、21、25、28、31和34°C；白天室内自然光照，夜间无光照；各组培养密度为0.5ind/ml，两天换水一次，每次1/2，不充气，胚胎发育至小耳幼虫后以海洋红酵母为饵料；隔天取样15~30只幼虫进行观察和测量。本发明专利技术的方法设计合理，温度梯度设置巧妙，可以方便、有效的测定出温度变化对刺参胚胎发育和生长的影响。

Effect of temperature on embryonic development and growth of sea cucumber

The invention relates to a step effect of temperature on the research methods, development and growth of sea cucumber embryos as follows: gonadal maturation of Ginseng by heating after the stimulation of Pro discharge sperm and eggs were observed after 4H sampling, choose the fertilization rate of > 99%, the experiment for the diameter of more than 160 Mu m fertilized eggs start hatching water experiment; the fertilized egg has 22.5 DEG C in about 6 - 7h, at the blastocyst stage; the blastocyst into each of the temperature gradient seawater prepared, salinity ~31, pH7.8~8.2; the temperature gradient is set as follows: 5, 10, 12, 15, 19, 21, 25, 28, 31 and 34 degrees C indoor natural light; day and night without light; the density of 0.5ind/ml were cultured for two days, changing the water once every 1/2, not inflation, embryonic development to the small ear larvae to marine red yeast as bait; the next sampling 15~30 larvae were observed and measured. The method of the invention is reasonable in design, and the temperature gradient is ingeniously arranged so as to conveniently and effectively determine the influence of the temperature change on the embryonic development and the growth of the sea cucumber.

【技术实现步骤摘要】
温度对刺参胚胎发育和生长的影响研究方法
本专利技术属于海洋生物
，具体涉及一种温度对刺参胚胎发育和生长的影响研究方法。
技术介绍
刺参生态苗种繁育是一种基于生态学原理,充分利用自然环境条件,采用高效设施和生态增养殖模式,通过科学管理而生产出的优质健康苗种的方法。由于刺参从早期浮游幼虫阶段便进入到野生环境下生存,与室内培育条件相比更加复杂和多变。受到昼夜交替、潮汐、降水等环境因素的影响,水体的温度、盐度、浊度、浮游生物等的变化更为剧烈,对刺参幼虫发育和生长势必造成影响。因此在选择适宜生态苗种繁育的海区之前,首先需要弄清各种环境因子对刺参幼虫发育的影响,而在这些环境因子中,与室内培育相比温度、盐度、光照、浊度等环境因素差异最为明显。温度是影响刺参胚胎发育至关重要的一个环境因子。我国不少学者对刺参幼虫培育的最适温度进行过相关研究,隋锡林研究表明幼虫培育的最适温度为18~22°C，刘广斌和Li等研究指出幼虫生长和发育的最适温度为21~24°C,最适于幼虫变态附着的温度为18~21°C。温度升高到27°C时孵化率显著降低,而在19.7~24°C之间没有差异。最适温度的探讨对于室内苗种培育的温度选择提供了理论依据。然而,随着近年来刺参生态育苗模式的兴起,研究刺参幼虫发育的温度阈值对于生产实践意义重大,为此,申请人设计了一系列温度梯度实验,弥补了低温对刺参胚胎发育影响研究的缺失,并计算了胚胎发育的生物学零度,以期对刺参生态育苗的环境选择以及刺参胚胎发育研究提供借鉴。
技术实现思路
针对上述问题，本专利技术旨在提供一种方法，可以研究温度对刺参胚胎发育和生长的影响。一种温度对刺参胚胎发育和生长的影响研究方法，步骤如下：性腺发育成熟的亲参经升温刺激后排放精和卵，4h后取样观察，选择受精率>99%，直径大于160μm受精卵的用于实验；实验开始时受精卵已于22.5°C的水体中孵化约6–7h，处于囊胚初期；将囊胚分别放入预先准备好的各温度梯度海水中，所用海水为沙滤后又经800滤水袋过滤的自然海水，盐度~31，pH7.8~8.2；各温度梯度设置如下:5、10、12、15、19、21、25、28、31和34°C；实验各组培养于2L烧杯中，置于恒温培养箱内培养；每组设置两个平行，温度波动在0.5°C以内，白天室内自然光照，夜间无光照；各组培养密度为0.5ind/ml，两天换水一次，每次1/2，不充气，胚胎发育至小耳幼虫后以海洋红酵母为饵料；隔天取样15~30只幼虫进行观察和测量，观察使用Olympus-C21普通显微镜，拍照使用CannonPowershot-A4000数码相机。本专利技术的方法设计合理，温度梯度设置巧妙，可以方便、有效的测定出温度变化对刺参胚胎发育和生长的影响。具体实施方式下面结合具体实施例对本专利技术做进一步详细说明。一种温度对刺参胚胎发育和生长的影响研究方法，实验设计如下：性腺发育成熟的亲参经升温刺激后排放精和卵，4h后取样观察，选择受精率>99%，直径大于160μm受精卵的用于实验。实验开始时受精卵已于22.5°C的水体中孵化约6–7h，处于囊胚初期。将囊胚分别放入预先准备好的各温度梯度海水中，所用海水为沙滤后又经800滤水袋过滤的自然海水，盐度~31，pH7.8~8.2。各温度梯度设置如下:5、10、12、15、19、21、25、28、31和34°C。实验各组培养于2L烧杯中，置于恒温培养箱内培养。每组设置两个平行，温度波动在0.5°C以内，白天室内自然光照，夜间无光照。各组培养密度为0.5ind/ml，两天换水一次，每次1/2，不充气，胚胎发育至小耳幼虫后以海洋红酵母为饵料。隔天取样15~30只幼虫进行观察和测量，观察使用Olympus-C21普通显微镜，拍照使用CannonPowershot-A4000数码相机。经过一周的培养，结果表明：刺参囊胚在10°C及以上温度组中均能够发育，发育速度随温度的升高而加快，在25°C达到最快；温度继续升高到28°C时，虽然前期发育较快，但由于死亡率升高，平均体长快速增长后迅速减小；在温度31°C条件下，刺参幼虫经过一周的培养全部死亡;培养在34°C条件下的刺参幼虫在24h内全部死亡。培养于10°C中的囊胚发育很慢，但能够正常孵化并发育至耳状幼虫，在21°C条件下发育仅需约36h可以达到的小耳幼虫，在该温度下经历了约两周。处于囊胚初期(64~256细胞)的刺参胚胎在5°C条件下不能正常发育，囊胚胚层加厚，并逐渐萎缩，最终死亡消解。刺参幼虫在温度15~21°C条件下死亡率并没有明显变化，在25°C或更高的温度下死亡率明显升高。在低于15°C的各处理中，由于胚胎发育缓慢，畸形胚胎相对增多，难于界定死亡与存活以及正常与畸形，因而在本实验中未进行统计。本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种温度对刺参胚胎发育和生长的影响研究方法，其特征在于，步骤如下：性腺发育成熟的亲参经升温刺激后排放精和卵，4h后取样观察，选择受精率>99%，直径大于160μm受精卵的用于实验；实验开始时受精卵已于22.5°C的水体中孵化约6–7h，处于囊胚初期；将囊胚分别放入预先准备好的各温度梯度海水中，所用海水为沙滤后又经800滤水袋过滤的自然海水，盐度~31，pH7.8~8.2；各温度梯度设置如下：5、10、12、15、19、21、25、28、31和34°C；实验各组培养于2L烧杯中，置于恒温培养箱内培养；每组设置两个平行，温度波动在0.5°C以内，白天室内自然光照，夜间无光照；各组培养密度为0.5ind/ml，两天换水一次，每次1/2，不充气，胚胎发育至小耳幼虫后以海洋红酵母为饵料；隔天取样15~30只幼虫进行观察和测量，观察使用Olympus‑C21普通显微镜，拍照使用Cannon Power shot‑A4000数码相机。

【技术特征摘要】
1.一种温度对刺参胚胎发育和生长的影响研究方法，其特征在于，步骤如下：性腺发育成熟的亲参经升温刺激后排放精和卵，4h后取样观察，选择受精率>99%，直径大于160μm受精卵的用于实验；实验开始时受精卵已于22.5°C的水体中孵化约6–7h，处于囊胚初期；将囊胚分别放入预先准备好的各温度梯度海水中，所用海水为沙滤后又经800滤水袋过滤的自然海水，盐度~31，pH7.8~8.2；各温度梯度设置如下：5、10、12...

【专利技术属性】
技术研发人员：褚方强，
申请(专利权)人：青岛清泉生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：山东,37