促进内皮细胞的粘附或迁移的弹性蛋白原制造技术

本发明专利技术涉及用于促进内皮细胞的粘附或迁移的方法、组合物和装置。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】促进内皮细胞的粘附或迁移的弹性蛋白原相关申请本申请要求2005年2月25日提交的美国临时专利申请系列号 60/656,360的优先权，其公开的内容在此以其全文引为参考。飼體在心血管疾病和阻塞性血管病的治疗方面取得的进展导致产生了 对多种疾病和症状的治疗方法。这些治疗方法，包括大量各种不同的 药物流出和非药物流出装置的植入，已经极大地改善了病人的存活率 和生活质量。但是，这些治疗方法并不是没有局限性和副作用的。医学治疗方法聚焦于减少与阻塞性血管疾病相关的风险因素。抗 血栓、抗高血压和降低胆固醇药物治疗目的在于降低堵塞的风险，而 卩-阻断剂和血管紧张肽转化酶抑制剂的作用是减少心脏的工作负荷。尽 管这些药物的发展降低了血管堵塞和心脏事件的风险，对于来说，仍 然极大地需要介入心脏病学和心脏手术直接治疗心血管疾病和血管堵 塞。血管成形术是冠状动脉病的主要介入治疗方法，每年仅在美国就 有680，000例以上。简单来说，将气球放置在被阻塞的动脉内，然后使 其扩张以解除堵塞。在大多数情况下，将支架放置在装有仪器的动脉 内。但是，仅有70%的血管成形术能够长期(6个月)缓解血管的堵塞。 在被称为再狭窄的过程中，血管平滑肌细胞对由血管成形术引起的血 管损伤作出反应，重新阻塞了动脉。这种再狭窄过程在其它对身体管 道造成损伤的操作过程中也被观察到，包括在任何身体管道中(例如 在动脉、静脉、输尿管、尿道、输卵管、总胆管、胰腺导管、肾管、 食管、气管、膀胱、子宫、卵巢管、输精管、前列腺管或淋巴管中)放置支架、金属丝、导管、分流通管或其它管腔内装置的操作过程。 在支架的几何形状和组成方面的不断进展已经带来支架输送的极大便 利性，但没能减少再狭窄的并发。最近，使用放射活性和其它细胞毒 性药剂(例如paditaxil 、放线菌素D和雷帕霉素)来治疗再狭窄的策略受到了相当多的关注。这些策略依赖于阻断许多类型细胞的增殖的毒性药剂的暂时的和局部的投送。目前正在测试其长期有效性；但是 这些药剂的毒性带来了对于处理通常是慢性的心脏和心血管症状来说 它们是否能够作为长期的治疗选择的严肃的质疑。目前的心血管和阻塞性血管疾病的治疗方法目的在于防止或抑制 衬有血管平滑肌细胞的血管的过度增殖，从而防止或抑制管道的堵塞。 但是，许多用于抑制血管平滑肌细胞的增殖的治疗方法、包括雷帕霉 素和紫杉醇是通过细胞毒性机制起作用的。尽管这些疗法可以帮助防 止堵塞，但它们的细胞毒性抑制了管道中或其附近的内皮细胞。那些 通常用于投送这些和其它治疗药剂的管腔内装置的插入，进一步加剧 了对内皮细胞的生长或结构的损害。由治疗药剂引起的损伤和/或由各 种装置的插入引起的损伤一起，通常导致了再狭窄的发生。作为再狭 窄的结果，患有心血管和阻塞性血管疾病的病人必须经常被重复地放 入支架、导管，或进行其它治疗。这些重复的治疗将病人暴露于与住 院治疗或侵入性操作过程有关的增加的风险中。此外，需要重复这些 治疗过程极大地增加了处理这些病症的相关花费。减少或防止再狭窄 的方法和组合物在本
中将提供相当大的进步。除了再狭窄问题之外，血栓形成也是与目前许多心血管疾病和阻 塞性血管疾病的治疗方法相关的重要问题。事实上，只要将装置放置 并留在身体内，血栓形成的风险就存在，因此它是许多外科操作过程 的潜在并发症。因此，血栓形成这种严重的并发症不仅与心脏和血管 内操作过程相关，而且也与其它涉及在身体内或身体管道的腔内放置 装置的介入操作方法相关。特别是正如前文所述，许多当前的药物疗 法损害了内皮细胞，然后抑制了它们的增殖。这极大地抑制了插入装置的内皮化。结果，在使用药物流出或非药物流出装置治疗的病人中 可能发生后期的血栓形成。为了帮助防止潜在致命的血栓形成，病人 通常用抗血小板和/或抗凝血素疗法进行侵害性的治疗(有时在长期的 基础上)。这些治疗方法施加了它们自身的风险和花费。因此，促进 插入装置(例如血管内或其它管腔内装置)的内皮化、从而防止或降 低了血栓形成的可能性的方法和组合物，在本
中将是巨大的 进步。本专利技术提供了用于促进内皮细胞的粘附、例如促进内皮细胞与可 植入的生物相容的装置的粘附的方法和组合物。用于促进内皮细胞与 例如生物相容性装置的粘附的方法和组合物，可以用于治疗或预防再 狭窄和/或血栓形成。专利技术简述本专利技术提供了用于调节内皮细胞的粘附和/或迁移的组合物和方 法。本专利技术提供了用于治疗和预防再狭窄或血栓形成的组合物和方法， 这些再狭窄或血栓形成通常是用于多种心血管疾病和阻塞性血管疾病 的、基于药物和装置的治疗方法的具有潜在致命副作用的结果。本发 明还提供了被设计用于促进内皮粘附、从而防止再狭窄或血栓形成的 可植入的装置。第一方面，本专利技术提供了促进内皮细胞的的粘附的方法。该方法 包括将该内皮细胞与一定量的含有有效剂量的弹性蛋白原多肽或其生 物活性片段的组合物相接触，其中该有效剂量足以促进内皮细胞的粘 附。弹性蛋白原多肽或其生物活性片段具有天然的弹性蛋白原的一种 或多种生物学活性。在一个实施方案中，促进内皮细胞的粘附的方法是体外方法。在 另一个实施方案中，促进内皮细胞的粘附的方法是体内方法。在一个实施方案中，弹性蛋白原多肽或其生物活性片段含有与SEQ ID NO: 2、 SEQ ID NO: 3、 SEQ ID NO: 4、 SEQ ID NO: 5或SEQ IDNO: 6具有至少80%同一性的氨基酸序列。在另一个实施方案中，弹性 蛋白原多肽或其生物活性片段含有与SEQ ID NO: 2、 SEQ ID NO: 3、 SEQ ID NO: 4、 SEQ ID NO: 5或SEQ ID NO: 6相同的氨基酸序列。在 另一个实施方案中，组合物基本上由与SEQIDNO: 2、 SEQ ID NO: 3、 SEQ ID NO: 4、 SEQ ID NO: 5或SEQ ID NO: 6具有至少80%同一性的 氨基酸序列组成。在另一个实施方案中，组合物基本上由SEQ ID NO: 5 中描述的生物活性片段的至少一个重复组成。在另一个实施方案中， 组合物基本上由SEQIDNO:6中描述的生物活性片段组成。在另一个 实施方案中，该弹性蛋白原多肽或其生物活性片段含有由可以在包括 了 65。C下用0.2XSSC的清洗步骤的严格条件下与SEQIDNO: 1中描 述的核酸序列杂交的核酸所编码的氨基酸序列。在上述任何一种实施 方案中，组合物含有或基本上由保留了天然弹性蛋白原的一种或多种 生物学活性的弹性蛋白原多肽或其生物活性片段组成。被弹性蛋白原 多肽或其生物活性片段所保留的、可用于本专利技术的方法和装置中的天 然弹性蛋白原的生物学/功能活性的例子包括但不限于(i)在体外促进 内皮细胞的粘附；(ii)在体内促进内皮细胞的粘附；(iii)在体外促进人 主动脉内皮细胞(HuAEC)的粘附；(iv)在体外促进人主动脉平滑肌细 胞(HuAoSMC)的粘附；(v)在体外促进内皮细胞的迁移；(vi)在体外 促进人主动脉内皮细胞(HuAEC)的迁移；(vii)在体外促进A2058人 黑素瘤细胞的粘附；(viii)在体外促进A2058人黑素瘤细胞的迁移；(ix) 在体外促进人微管内皮细胞(HMVEC)的粘附。在另一本文档来自技高网...

【技术保护点】
促进内皮细胞粘附的方法，包括将该内皮细胞与含有有效促进内皮细胞粘附量的弹性蛋白原多肽或其生物活性片段的组合物相接触。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】US 2005-2-25 60/656,3601.促进内皮细胞粘附的方法，包括将该内皮细胞与含有有效促进内皮细胞粘附量的弹性蛋白原多肽或其生物活性片段的组合物相接触。2. 权利要求l的方法，其中该弹性蛋白原多肽或其生物活性片段 含有与SEQ ID NO: 2、 SEQ ID NO: 3、 SEQ ID NO: 4、 SEQ ID NO: 5 或SEQ ID NO: 6具有至少80%同一性的氨基酸序列。3. 权利要求l的方法，其中该弹性蛋白原多肽或其生物活性片段 含有与SEQ ID NO: 2、 SEQ ID NO: 3、 SEQ ID NO: 4、 SEQ ID NO: 5 或SEQ ID NO: 6相同的氨基酸序列。4. 权利要求l的方法，其中该组合物基本上由与SEQIDNO: 2、 SEQ ID NO: 3、 SEQ ID NO: 4、 SEQ ID NO: 5或SEQ ID NO: 6具有至少80%同一性的氨基酸序列组成。5. 权利要求4的方法，其中该组合物基本上由SEQ ID NO: 5所示 的生物活性片段的至少一个重复组成。6. 权利要求4的方法，其中该组合物基本上由SEQ ID NO: 6所示的生物活性片段组成。7. 权利要求l的方法，其中该弹性蛋白原多肽或其生物活性片段 含有可由核酸编码的氨基酸序列，该核酸在包括了 65。C下用0.2XSSC 清洗的步骤的严格条件下与SEQ ID NO: 1所述的核酸序列杂交。8. 权利要求l的方法，其中该弹性蛋白原多肽或其生物活性片段 被共价连接到装置上，其中该弹性蛋白原或其生物活性片段的量有效促进内皮细胞与装置的粘附。9. 权利要求8的方法，其中该装置由金属、塑料、硅酮、涤纶织 物或PTFE制成或被上述材料包被。10. 权利要求8的方法，其中该弹性蛋白原或其生物活性片段的 量在生理相关的流体流速和/或管道压力下有效促进和维持内皮细胞的 粘附。11. 权利要求10的方法，其中该生理相关的流体流速和/或管道压 力是相当于静脉或动脉流速或压力的流速或压力。12. 权利要求l的方法，其中该内皮细胞是内皮干细胞。13. 促进内皮细胞迁移的方法，包括将该内皮细胞与含有有效促 进内皮细胞迁移量的弹性蛋白原多肽或其生物活性片段的组合物相接 触。14. 权利要求13的方法，其中该弹性蛋白原多肽或其生物活性片 段含有与SEQ ID NO: 2、 SEQ ID NO: 3、 SEQ ID NO: 4、 SEQ ID NO: 5 或SEQ ID NO: 6具有至少80%同一性的氨基酸序列。15. 权利要求13的方法，其中该弹性蛋白原多肽或其生物活性片 段含有与SEQ ID NO: 2、 SEQ ID NO: 3、 SEQ ID NO: 4、 SEQ ID NO: 5 或SEQ ID NO: 6相同的氨基酸序列。16. 权利要求13的方法，其中该组合物基本上由与SEQ ID NO: 2、 SEQ ID NO: 3、 SEQ ID NO: 4、 SEQ ID NO: 5或SEQ ID NO: 6具有至少80%同一性的氨基酸序列组成。17. 权利要求16的方法，其中该组合物基本上由SEQ ID NO: 5 所示的生物活性片段的至少一个重复组成。18. 权利要求16的方法，其中该组合物基本上由SEQ ID NO: 6 所示的生物活性片段组成。19. 权利要求13的方法，其中该弹性蛋白原多肽或其生物活性片 段含有可由核酸编码的氨基酸序列，该核酸在包括了 65°C下用0.2X SSC清洗的步骤的严格条件下与SEQ ID NO: 1所述的核酸序列杂交。20. 促进内皮细胞与装置的粘附的方法，包括将该内皮细胞与包 含了含有一定量的弹性蛋白原多肽或其生物活性片段的组合物的装置 相接触，其中该量有效促进内皮细胞与该装置的粘附，以及其中该弹 性蛋白原多肽或其生物活性片段被共价结合到该装置上。21. 权利要求20的方法，其中该弹性蛋白原或其生物活性片段的 量在生理相关的流体流速和/或管道压力下有效促进和维持内皮细胞的 粘附。22. 权利要求21的方法，其中该生理相关的流体流速和/或管道压 力相当于静脉或动脉流速或压力。23. 权利要求20的方法，其中该装置是不锈钢装置。24. 权利要求20的方法，其中该装置由塑料、涤纶织物、硅酮或 PTFE制成或被上述材料包被。25. 权利要求20的方法，其中该装置从导管、支架、分流通管、 金属丝或其它管腔内装置中选择。26. 权利要求20的方法，其中该装置从起搏器、心脏复律器-除纤颤器、心室辅助装置、血管移植物、人工瓣膜、鼻胃管、通气管或胸 管中选择。27. 权利要求20的方法，其中该弹性蛋白原多肽或其生物活性片 段含有与SEQ ID NO: 2、 SEQ ID NO: 3、 SEQ ID NO: 4、 SEQ ID NO: 5 或SEQ ID NO: 6具有至少80%同一性的氨基酸序列。28. 权利要求20的方法，其中该弹性蛋白原多肽或其生物活性片 段含有与SEQ ID NO: 2、 SEQ ID NO: 3、 SEQ ID NO: 4、 SEQ ID NO: 5 或SEQ ID NO: 6相同的氨基酸序列。29. 权利要求20的方法，其中该组合物基本上由与SEQ ID NO: 2、 SEQ ID NO: 3、 SEQ ID NO: 4、 SEQ ID NO: 5或SEQ ID NO: 6具有至少80%同一性的氨基酸序列组成。30. 权利要求28的方法，其中该组合物基本上由SEQ ID NO: 5 所示的生物活性片段的至少一个重复组成。31. 权利要求28的方法，其中该组合物基本上由SEQ ID NO: 6 所示的生物活性片段组成...

【专利技术属性】
技术研发人员：狄恩Y李，布伦特D威尔逊，利塞瑟伦森布伦哈尔特，
申请(专利权)人：犹他大学研究基金会，
类型：发明
国别省市：US[美国]