细胞外基质组合物制造技术

本文提供了胎盘细胞外基质(ECM)组合物及其制备方法。本文还提供了本文中提供的胎盘ECM组合物的用途。在一个方面，本文提供了使用胎盘组织如人胎盘组织制备的细胞外基质(ECM)组合物。在某些实施方式中，本文提供的ECM组合物包含约30‑约60％的胶原蛋白和约10‑约35％的弹性蛋白。另外，这种ECM组合物包含(i)非常低量的纤连蛋白(例如，低于0.1％的纤连蛋白)，例如，通过ELISA测量的；(ii)没有或不可检测量的层粘连蛋白，例如，通过ELISA测量的；和/或没有或不可检测量的糖胺聚糖。

Extracellular matrix composition

Placental extracellular matrix (ECM) compositions and methods of making the same are provided. The use of the placental ECM composition provided herein is also provided. In one aspect, this paper provides an extracellular matrix (ECM) composition prepared using placental tissue such as human placenta. In some embodiments, the elastic protein ECM composition provided in this paper contains about 30 about 60% and about 10 to about 35% collagen. In addition, the composition of ECM (I) contains very low amounts of fibronectin (e.g., less than 0.1% of the fibronectin), for example, measured by ELISA; (II) no detectable amounts of laminin, for example, measured by ELISA; and / or not or not detectable glycosaminoglycan the amount of.

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】细胞外基质组合物本申请要求2014年8月25日提交的美国临时专利申请No.62/041,468的优先权，其公开内容通过引用全文合并于此。1.
本文提供了细胞外基质(ECM)组合物及其制备方法。本文还提供了本文所提供的ECM组合物的用途。2.
技术介绍
细胞外基质(ECM)包含形成身体中的许多结构(包括支持皮肤和内部器官的肌腱、韧带和鞘(sheets))的蛋白质。本领域中仍然需要新的和改进的ECM组合物及制备这种ECM组合物的方法。3.
技术实现思路
在一个方面中，本文提供了使用胎盘组织(例如，人胎盘组织)制备的细胞外基质(ECM)组合物。在某些实施方式中，本文提供的ECM组合物包含约30％-约60％的胶原蛋白和约10％-约35％的弹性蛋白。另外，这类ECM组合物包含(i)非常低量的纤连蛋白(例如，少于0.1％的纤连蛋白)，例如，如通过ELISA测量的；(ii)没有或不可检测量的层粘连蛋白，例如，如通过ELISA测量的；和/或没有或不可检测量的糖胺聚糖，例如，如通过ELISA测量的。在某些实施方式中，本文提供的ECM组合物包含约30％-约72％的胶原蛋白和约10％-约35％的弹性蛋白。另外，这类ECM组合物可包含(i)纤连蛋白(例如，少于0.1％的纤连蛋白)，例如，如通过ELISA测量的；(ii)层粘连蛋白(例如，少于0.1％的层粘连蛋白)，例如，如通过ELISA测量的；糖胺聚糖(例如，少于0.1％的糖胺聚糖)，例如，如通过ELISA测量的；(iii)没有或不可检测量的细胞因子；(iv)没有或不可检测量的生长因子；和/或(v)没有或不可检测量的脱氧胆酸。本文提供的ECM组合物具有使得它们非常适合于治疗/医学用途的特征。具体地，本文描述的ECM组合物是无菌的、无细胞的(例如，≥99％无细胞的)和/或不含细胞碎片的(例如，≥99％无细胞碎片的)。在特定实施方式中，本文提供的ECM组合物不包含细胞因子或包含不可检测量的细胞因子，如通过，例如，ELISA测量的。在某些实施方式中，本文提供的ECM组合物进一步缺乏试剂残留，即，最终ECM组合物包含不可检测量的用于制造该组合物的试剂。此外，在特定实施方式中，本文提供的ECM组合物包含最少量的核酸(例如，～41-171ng/mg干产物)和内毒素(例如，<0.25EU)。本文提供的ECM组合物的另一有利特征是其吸收水的能力。在某些实施方式中，本文提供的ECM组合物吸收150％-225％的其重量的水。这种特征在本文提供的ECM组合物的例如伤口愈合应用中是有利的。在具体的实施方式中，本文提供了包含约35-55％的胶原蛋白和约10-30％的弹性蛋白的ECM组合物。在具体的实施方式中，所述组合物包含34-53％的胶原蛋白和13-29％的弹性蛋白。在另一具体实施方式中，所述ECM组合物从胎盘组织，例如，人胎盘组织获得。在另一具体实施方式中，所述ECM组合物从胎盘的绒毛膜，例如，人胎盘的绒毛膜获得。在另一具体实施方式中，所述ECM组合物包含非常低量的纤连蛋白，例如，少于0.1％的纤连蛋白、少于0.01％的纤连蛋白或少于0.001％的纤连蛋白。在另一具体实施方式中，所述ECM组合物不包含或包含不可检测量的层粘连蛋白。在另一具体实施方式中，所述ECM组合物不包含或包含不可检测量的糖胺聚糖。在另一具体实施方式中，所述ECM组合物包含非常低量的纤连蛋白，例如，少于0.1％的纤连蛋白、少于0.01％的纤连蛋白或少于0.001％的纤连蛋白；不包含或包含不可检测量的层粘连蛋白；且不包含或包含不可检测量的糖胺聚糖。在具体的实施方式中，本文提供了包含约35-72％的胶原蛋白和约15-25％的弹性蛋白的ECM组合物。在另一具体实施方式中，本文提供了包含约40-70％的胶原蛋白和约15-25％的弹性蛋白的ECM组合物。在另一具体实施方式中，所述组合物包含40-70％的胶原蛋白和15-22％的弹性蛋白。在再另一具体实施方式中，所述组合物包含43-68％的胶原蛋白和18-21％的弹性蛋白。在某些实施方式中，所述ECM组合物包含纤连蛋白，例如，少于0.1％的纤连蛋白、少于0.05％的纤连蛋白、少于0.01％的纤连蛋白、少于0.001％的纤连蛋白、0.001-0.1％的纤连蛋白、0.001-0.05％的纤连蛋白、0.001-0.01％的纤连蛋白、0.01-0.1％的纤连蛋白或0.01-0.05％的纤连蛋白。在另一具体实施方式中，所述ECM组合物包含层粘连蛋白，例如，少于0.1％的层粘连蛋白、少于0.05％的层粘连蛋白、少于0.01％的层粘连蛋白、少于0.001％的层粘连蛋白、0.001-0.1％的层粘连蛋白、0.001-0.05％的层粘连蛋白、0.001-0.01％的层粘连蛋白、0.01-0.1％的层粘连蛋白或0.01-0.05％的层粘连蛋白。在另一具体实施方式中，所述ECM组合物包含糖胺聚糖，例如，少于0.1％的糖胺聚糖、少于0.05％的糖胺聚糖、少于0.01％的糖胺聚糖、少于0.001％的糖胺聚糖、0.001-0.1％的糖胺聚糖、0.001-0.05％的糖胺聚糖、0.001-0.01％的糖胺聚糖、0.01-0.1％的糖胺聚糖或0.01-0.05％的糖胺聚糖。在另一具体实施方式中，所述ECM组合物不包含或包含不可检测量的细胞因子、生长因子和/或脱氧胆酸。在某些实施方式中，所述ECM组合物包含纤连蛋白，例如，少于0.1％的纤连蛋白、少于0.05％的纤连蛋白、少于0.01％的纤连蛋白、少于0.001％的纤连蛋白、0.001-0.1％的纤连蛋白、0.001-0.05％的纤连蛋白、0.001-0.01％的纤连蛋白、0.01-0.1％的纤连蛋白或0.01-0.05％的纤连蛋白；层粘连蛋白，例如，少于0.1％的层粘连蛋白、少于0.05％的层粘连蛋白、少于0.01％的层粘连蛋白、少于0.001％的层粘连蛋白、0.001-0.1％的层粘连蛋白、0.001-0.05％的层粘连蛋白、0.001-0.01％的层粘连蛋白、0.01-0.1％的层粘连蛋白或0.01-0.05％的层粘连蛋白；糖胺聚糖，例如，少于0.1％的糖胺聚糖、少于0.05％的糖胺聚糖、少于0.01％的糖胺聚糖、少于0.001％的糖胺聚糖、0.001-0.1％的糖胺聚糖、0.001-0.05％的糖胺聚糖、0.001-0.01％的糖胺聚糖、0.01-0.1％的糖胺聚糖或0.01-0.05％的糖胺聚糖，和任选地不包含或包含不可检测量的细胞因子、生长因子和/或脱氧胆酸。在另一具体实施方式中，所述ECM组合物从胎盘组织，例如，人胎盘组织获得。在另一具体实施方式中，所述ECM组合物从胎盘的绒毛膜(例如胎盘的绒毛膜板)获得，例如，来自人胎盘的绒毛膜(例如，绒毛膜板)。在另一具体实施方式中，本文提供了包含约50-60％的胶原蛋白和约10-20％的弹性蛋白的ECM组合物。在具体的实施方式中，所述ECM组合物从胎盘组织，例如，人胎盘组织获得。在另一具体实施方式中，所述ECM组合物从胎盘的绒毛膜，例如，来自人胎盘的绒毛膜获得。在另一具体实施方式中，所述ECM组合物包含非常低量的纤连蛋白，例如，少于0.1％的纤连蛋白、少于0.01％的纤连蛋白或少于0.001％的纤连蛋白。在本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种细胞外基质(ECM)组合物，其包含约35‑55％的胶原蛋白和约10‑30％的弹性蛋白。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2014.08.25 US 62/041,4681.一种细胞外基质(ECM)组合物，其包含约35-55％的胶原蛋白和约10-30％的弹性蛋白。2.如权利要求1的组合物，其中所述组合物包含少于0.1％的纤连蛋白。3.如权利要求1或2的组合物，其中所述组合物包含不可检测量的层粘连蛋白。4.如权利要求1-3任一项的组合物，其中所述组合物包含不可检测量的糖胺聚糖。5.如权利要求1的组合物，其中所述组合物包含少于0.1％的纤连蛋白、不可检测量的层粘连蛋白和不可检测量的糖胺聚糖。6.一种ECM组合物，包含约40-70％的胶原蛋白和约15-25％的弹性蛋白。7.如权利要求6的组合物，其中所述组合物包含少于约0.1％的纤连蛋白。8.如权利要求6或7的组合物，其中所述组合物包含少于约0.1％的层粘连蛋白。9.如权利要求6-8任一项的组合物，其中所述组合物包含少于约0.1％的糖胺聚糖。10.如权利要求6-9任一项的组合物，其中所述组合物包含不可检测量的细胞因子、生长因子或脱氧胆酸。11.如权利要求6的组合物，其中所述组合物包含少于约0.1％的纤连蛋白、少于约0.1％的层粘连蛋白、少于约0.1％的糖胺聚糖和不可检测量的细胞因子、生长因子或脱氧胆酸。12.如权利要求11的组合物，其中所述组合物包含少于约0.1％的纤连蛋白、少于约0.1％的层粘连蛋白、少于约0.1％的糖胺聚糖及不可检测量的细胞因子、生长因子和脱氧胆酸。13.如权利要求1-12任一项的组合物，其中所述ECM是胎盘ECM。14.如权利要求13的组合物，其中所述胎盘ECM是人胎盘ECM。15.如权利要求1-13任一项的组合物，其中所述组合物配制为薄片。16.如权利要求15的组合物，其中所述薄片为约1.5-2.5mm厚。17.如权利要求1-16任一项的组合物，其中所述组合物配制为颗粒物。18.如权利要求1-16任一项的组合物，其中所述组合物配制为可流动基质。19.一种ECM组合物，包含约35-55％的胶原蛋白和约10-30％的弹性蛋白，其中所述ECM组合物按照以下方法制备：(i)从胎盘除去羊膜、绒毛膜和脐带；(ii)将剩余的胎盘组织置于包含1MNaCl的溶液中；(iii)使所述胎盘组织均质化；(iv)使所述胎盘组织与包含2％的脱氧胆酸钠的溶液接触；(v)用水洗涤所述胎盘组织；(vi)使所述胎盘组织与包含1M氢氧化钠的溶液接触；(vii)使包含所述胎盘组织的溶液至中性pH；和(viii)收集所述胎盘组织。20.如权利要求19的组合物，其中所述组合物包含少于0.1％的纤连蛋白。21.如权利要求19或20的组合物，其中所述组合物包含不可检测量的层粘连蛋白。22.如权利要求19-21任一项的组合物，其中所述组合物包含不可检测量的糖胺聚糖。23.如权利要求22的组合物，其中所述组合物包含少于0.1％的纤连蛋白、不可检测量的层粘连蛋白和不可检测量的糖胺聚糖。24.一种ECM组合物，包含约40-70％的胶原蛋白和约15-25％的弹性蛋白，其中所述ECM按照以下方法制备：(i)从胎盘获得绒毛膜；(ii)刮擦和清洁所述绒毛膜；(iii)将所述绒毛膜组织置于包含0.5MNaCl的溶液中；(iv)使所述绒毛膜与包含2％的脱氧胆酸或脱氧胆酸钠的溶液接触；(v)用水清洗所述绒毛膜；和(vi)研磨和冻干。25.如权利要求24的组合物，其中所述组合物包含少于约0.1％的纤连蛋白。26.如权利要求24或25的组合物，其中所述组合物包含少于约0.1％的层粘连蛋白。27.如权...

【专利技术属性】
技术研发人员：M·B·巴哈蒂雅，U·赫兹博格，A·卡普鲁诺维斯基，R·扎克，叶谦，
申请(专利权)人：HLI细胞疗法有限责任公司，
类型：发明
国别省市：美国,US