本发明专利技术涉及一种促黄体生成素释放激素衍生物的合成方法，所述促黄体生成素释放激素衍生物结构为pGlu-His-Trp-Ser-Tyr-D-Ser(tBu)-Leu-Arg-Pro-R，R=Azgly-NH2或NHEt，本发明专利技术将戈舍瑞林和布舍瑞林分成两个片段分别固相合成，且第一片段不受D-Ser(tBu)的影响，第二片段最后一步才涉及到D-Ser(tBu)，使得整个合成工艺克服了因D-Ser(tBu)的影响而使得戈舍瑞林和布舍瑞林的固相合成与传统的固相合成不能兼容的缺陷，从而使得整体工艺具有成本低、收率高、纯度好的优点。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及一种。
技术介绍
黄体生成素(LH)和卵泡刺激素(FSH)是由垂体前叶释放出来的，受控于下丘脑产生的LH-RH (促黄体生成素释放激素)或称&iRH (促性腺素释放激素)，下文统称为促黄体生成素释放激素。LH-RH及其衍生物具有促进促性腺激素分泌的活性，按序给药LH-RH及其衍生物可抑制性腺功能，因此其可以用作药物以抑制和/或治疗诸如子宫内膜异位、中枢性早熟、不育和前列腺癌等疾病。已用作药物的LH-RH及其衍生物包括戈舍瑞林、布舍瑞林、亮丙瑞林和那法瑞林。其中，戈舍瑞林(Goserelin)和布舍瑞林(Buserelin)结构可表示如下pGlu-His-Trp-Ser-Tyr-D-Ser (tBu) -Leu-Arg-Pro-R，当 R=Azgly-NH2 时，该结构式表示戈舍瑞林(Goserelin)，当R=NHEt时，该结构表示布舍瑞林(Buserelin)。因为结构上的极其相似，戈舍瑞林(Goserelin)和布舍瑞林(Buserelin)可以基于相同的合成工艺进行合成，目前戈舍瑞林(Goserelin)和布舍瑞林(Buserelin)的合成方法主要包括固相合成和液相合成两种。液相合成操作繁琐，每合成一步都需要纯化，合成得率很低，不适合超过5个氨基酸以上的多肽合成。液相合成的原材料的价格已大大高于大规模工业化生产的Fmoc/tBu 固相体系的原材料价格，因此，目前液相合成的方法已经被多肽合成工业体系所逐渐淘汰。对于固相合成方法来说，一般采用多肽合成中的SPPS (a Solid Phase Peptide Synthesis)进行整个片段的全合成，如专利EP2119724A1和专利US2010/0311946A1中报道的那样。但是，促黄体生成素释放激素中的戈舍瑞林(Goserelin)和布舍瑞林(Buserelin) 由于侧链D-Ser含有tBu和常规的Fmoc/tBu固相反应体系不兼容，用常规的Fmoc/tBu固相反应体系无法合成，故也有采用淘汰的液相合成或者改进的Fmoc/tBu固相反应体系来生产。例如，美国专利US5602231中报道了一种戈舍瑞林的固相合成方法，采用了侧链不保护的iTrp，Ser, Tyr固相反应体系合成戈舍瑞林，由于侧链不保护的Trp，Ser, Tyr在 Fmoc/tBu固相合成时会造成很多的副反应，导致合成的产物难以纯化，得率下降，而且采用不保护的氨基酸合成多肽对于工业化生产来说是非常难控制各种副反应的发生，故不适合工业化生产；美国专利US2010/0311946A1中报道了采用不常用侧链保护体系的Fmoc固相合成方法，采用了 His (trt)，Ser(trt)，Tyr(2-Cl-trt)等原料合成戈舍瑞林，由于工业生产中很少厂家用到kr(trt)，Tyr(2-Cl-trt)这2个原料，很难找到工业化的供应商，因此不但价格昂贵，生产成本高，给企业大规模生产带来很大的成本压力，而且在最后trt保护基团脱除的时候，很难选择性的脱除trt而不影响D-ser含有的tBu，因此会产生各种不纯物，导致得率下降；专利EP0518656B1中同样采用了侧链不保护的kr和不常用侧链保护的Tyr(BrZ)的方法，是专利US2010/0311946A1和专利US5602231的复合体，同样无法解决不保护侧链引起的副反应和应用和很难找到工业化原料的供应商，原料价格昂贵和生产成本高等问题。
技术实现思路
为了克服现有技术的缺陷，本专利技术提出一种，其通过将促黄体生成素释放激素分成两个片段分别固相合成，再拼接成整个片段的方法，从而克服了现有技术中的缺陷，使得本专利技术的合成方法具有适合放大生产、收率高、 纯度好的优点。为解决前述技术问题，本专利技术采用的技术方案如下一种，所述促黄体生成素释放激素衍生物结构为 pGlu-His-Trp-Ser-Tyr-D-Ser(tBu)-Leu-Arg-Pro-R，R=Azgly-NH2 或 NHEt，其包括以下步骤(1)固相合成第一片段pGlu-His-Trp-Ser-Tyr-OH，其中，His、Ser,Tyr为侧链保护氨基酸；(2)固相合成第二片段Dler(tBu)-Leu-Arg-Pro-R-固相支持物，其中Dler (tBu)的氨基端为保护基团Fmoc或Boc ；(3)连接所述第一片段和第二片段，并经切肽、纯化，得到所述的促黄体生成素释放激素衍生物 pGlu-Hi s-Trp-Ser-Tyr-D-Ser (tBu) -Leu-Arg-Pro-R。本专利技术的，将戈舍瑞林(Goserelin) 和布舍瑞林(Buserelin)分成两个片段分别固相合成，且第一片段不受Dler (tBu)的影响，第二片段最后一步才涉及到D^er (tBu)，因而可以使得整个合成工艺克服了因 D-Ser (tBu)的影响而使得戈舍瑞林(Goserelin)和布舍瑞林(Buserelin)的固相合成与传统的固相合成不能兼容的缺陷，从而使得整体工艺具有成本低、收率高、纯度好的优点。本专利技术的，其中，(1)由以下步骤组成 (al)提供一树脂作为固相支持物；(bl)用一活化试剂活化氨基端为保护基团Fmoc或Boc的Tyr (tBu)-0H，并将其连接到 (al)所述的固相支持物上，接着用一脱保护试剂脱去保护基团Fmoc或Boc ；(cl)用一活化试剂活化氨基端为保护基团Fmoc或Boc的kr (tBu) -0H,并将其连接到(bl)的固相支持物上的Tyr(tBu)上，接着用一脱保护试剂脱去保护基团Fmoc或Boc ；(dl)用一活化试剂活化氨基端为保护基团Fmoc或Boc的Trp-OH，并将其连接到(cl) 的固相支持物上的kr(tBu)上，接着用一脱保护试剂脱去保护基团Fmoc或Boc ；(el)用一活化试剂活化氨基端为保护基团Fmoc或Boc的His (trt)-0H，并将其连接到 (dl)的固相支持物上的Trp上，接着用一脱保护试剂脱去保护基团Fmoc或Boc ；(fl)用一活化试剂活化pGlu-OH，并将其连接到(el)的固相支持物上的His(trt)上； (gl)将(fl)的固相支持物加入一切肽试剂中，使得其上的多肽从(al)的固相支持物上脱离，且使得Tyr (tBu)、Ser (tBu), His (trt)上的侧链保护基团被脱去，从而得到所述的第一片段 pGlu-HiS-Trp-Ser-Tyr-OH0本专利技术的，其中，(2)由以下步骤组成 (a2)提供匹配偶联所述末端为R基团的树脂作为固相支持物；(b2)用一活化试剂活化氨基端为保护基团Fmoc或Boc的ftx)-0H，并将其连接到(a2)所述的固相支持物上，接着用一脱保护试剂脱去保护基团Fmoc或Boc ；(c2)用一活化试剂活化氨基端为保护基团Fmoc或Boc的Arg -0H,并将其连接到(b2) 的固相支持物上的Pro上，接着用一脱保护试剂脱去保护基团Fmoc或Boc ；(d2)用一活化试剂活化氨基端为保护基团Fmoc或Boc的Leu-OH，并将其连接到(c2) 的固相支持物上的Arg上，接着用一脱保护试剂脱去保护基团Fmoc或Boc ；(e2)用一活化试剂活化氨基端为保护基团Fmoc或Boc的Dle本文档来自技高网...
【技术保护点】
１．促黄体生成素释放激素衍生物的合成方法，所述促黄体生成素释放激素衍生物结构为ｐＧｌｕ－Ｈｉｓ－Ｔｒｐ－Ｓｅｒ－Ｔｙｒ－Ｄ－Ｓｅｒ（ｔＢｕ）－Ｌｅｕ－Ａｒｇ－Ｐｒｏ－Ｒ，Ｒ＝Ａｚｇｌｙ－ＮＨ２或ＮＨＥｔ，其特征在于包括：（１）固相合成第一片段ｐＧｌｕ－Ｈｉｓ－Ｔｒｐ－Ｓｅｒ－Ｔｙｒ－ＯＨ，其中，Ｈｉｓ、Ｓｅｒ、Ｔｙｒ为侧链保护氨基酸；（２）固相合成第二片段Ｄ－Ｓｅｒ（ｔＢｕ）－Ｌｅｕ－Ａｒｇ－Ｐｒｏ－Ｒ－固相支持物，其中Ｄ－Ｓｅｒ（ｔＢｕ）的氨基端为保护基团Ｆｍｏｃ或Ｂｏｃ；（３）连接所述第一片段和第二片段，并经切肽、纯化，得到所述的促黄体生成素释放激素衍生物ｐＧｌｕ－Ｈｉｓ－Ｔｒｐ－Ｓｅｒ－Ｔｙｒ－Ｄ－Ｓｅｒ（ｔＢｕ）－Ｌｅｕ－Ａｒｇ－Ｐｒｏ－Ｒ。
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：王宇，杨祺，
申请(专利权)人：厦门博欣生物技术有限公司，
类型：发明
国别省市：92
还没有人留言评论。发表了对其他浏览者有用的留言会获得科技券。